水培條件下氮素對(duì)擬巫山淫羊藿產(chǎn)量和黃酮類(lèi)成分的影響

張?jiān)骑L(fēng)+郭寶林+楊相波+李礫+姜志海+莫玉敏

[摘要] 采用水培方法研究了不同氮濃度和氮素形態(tài)及配比對(duì)擬巫山淫羊藿產(chǎn)量和黃酮類(lèi)成分的影響。氮濃度設(shè)7個(gè)處理組N0～N6，分別為0，2.5，5.0，7.5，10.0，13.0 mmol·L-1；氮形態(tài)設(shè)5個(gè)處理組T1～T5，硝銨比NO3-N/NH4-N依次為5∶0，4∶1，2.5∶2.5，1∶4，0∶5，總施氮量為5 mmol·L-1。結(jié)果表明，隨氮濃度的增大，擬巫山淫羊藿的生物量和葉干重均顯著升高，N5組的生物量和葉干重分別比N0組和N4組高29%，23%和36%，23%（P<0.05），但與N6組差別不顯著；根，莖干重變化不明顯。凈光合速率及各光合色素含量在N3～N5組中較高。朝藿定A，B，C，淫羊藿苷及總黃酮含量在N3組最低，N4組突然升高，N4～N6組變化不大，朝藿定C的含量最高的N5組比含量最低的N3組高131%（P<0.05）。在不同硝銨比處理組中，生物量，單株葉干重，莖干重在硝銨比為2.5∶2.5時(shí)最大，單純施用硝態(tài)氮（T1）和銨態(tài)氮處理（T5）最低（二者差異不顯著）；各光合色素含量和凈光合速率在T3和T4組最低，其他3組較高。氮形態(tài)對(duì)黃酮含量的影響遠(yuǎn)小于氮濃度的影響。朝藿定C的含量在T1組中最高，但僅比T2～T5組高5%～8%（P<0.05），其他4組間差異不明顯。朝藿定A，B，淫羊藿苷及總黃酮含量在T1組中均較高，在T2組中最低，T1組分別比T2組高41%，62%，27%（P<0.05）。擬巫山淫羊藿為高氮耐受性植物，10.0 mmol·L-1是其生長(zhǎng)轉(zhuǎn)向良好的拐點(diǎn)，最適的氮濃度為10.0～13.0 mmol·L-1，喜好硝態(tài)氮和銨態(tài)氮混施，最適的氮形態(tài)及配比為2.5 mmol·L-1硝態(tài)氮+2.5 mmol·L-1銨態(tài)氮。

[關(guān)鍵詞] 擬巫山淫羊藿； 氮濃度； 氮形態(tài)； 產(chǎn)量； 黃酮

[Abstract] Nitrogen nutrition divided into concentrations and forms for Epimedium pseudowushanense was studied under hydroponic conditions. There were 7 nitrogen concentrations treatments（N0-N6）which nitrogen concentration was 0， 2.5， 5.0， 7.5， 10.0， 13.0 mmol·L-1， respectively， and 5 nitrogen forms and proportions treatments （T1-T5） which NO3-N/NH4-N was 5∶0， 4∶1， 2.5∶2.5， 1∶4， 0∶5 respectively， the total nitrogen applied was 5 mmol·L-1. The results showed that along with the increase of nitrogen concentration， biomass （dry weight） and leaf dry weight increased， which in N5 treatment was 29%， 23% higher than those in N0 and 36%， 23% higher than those in N4 respectively， but not significantly different from N6 treatment. Roots and stem dry weights did not change significantly. Pn and the contents of photosynthetic pigments were higher in N3-N5 treatments. Epimedin A， B， C， icariin and total flavonoids contents were the lowest in N3 treatment， suddenly increase in N4 treatment and only a little change between N4-N6 treatments. N5 treatment with the highest epimedin C content was 131% higher than N3 treatment with the lowest epimedin C content （P<0.05）. While in the nitrogen forms and proportions treatments， biomass， leaf and stem dry weights were the highest in T3 treatment and lower in T1 and T5 treatments， without significance between T1 and T5 treatments. These indicators in T3 treatment were more than 30% higher than those in T1 treatment. The impact of nitrogen concentrations was greater than nitrogen forms on flavonoids. epmedin C content was the highest in T1 treatment， only 5%-8% higher than that in T2-T5 treatments （no significance between 4 treatments）. Epimedin A， B， icariin and total flavonoids contents were higher in T1 treatment， the lowest in T2 treatment， those in T1 treatment was 41%， 62% and 27% higher than T2 treatment respectively （P<0.05）. In a conclusion， E. pseudowushanense is a high nitrogen tolerant plant， 10.0 mmol·L-1 was the boundary point between growing general to well and the optimal nitrogen concentration for it was 10.0-13.0 mmol·L-1. Besides， it prefers to grow in NO-3 plus NH+4 and the optimal proportion was 2.5∶2.5.endprint

[Key words] Epimedium pseudowushanense； nitrogen concentrations； nitrogen forms； yields； flavonoids

擬巫山淫羊藿Epimedium pseudowushanense B. L. Guo是小檗科淫羊藿屬多年生草本植物，主要分布于貴州黔東南州。因其葉形態(tài)和藥材品質(zhì)與巫山淫羊藿相似，一直被誤作為巫山淫羊藿E. wushanense T. S.Ying使用，擬巫山淫羊藿中朝藿定C和其他淫羊藿苷類(lèi)成分含量較巫山淫羊藿高且質(zhì)量穩(wěn)定，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明朝藿定C具有與淫羊藿苷類(lèi)似的作用[1-4]。目前淫羊藿藥材資源主要來(lái)自于野生，隨著用量大幅增加和破壞性采挖，野生資源蘊(yùn)藏量逐年銳減，急需實(shí)現(xiàn)栽培化。擬巫山淫羊藿經(jīng)十多年的引種馴化，目前在貴州省黔東南州雷山縣初步實(shí)現(xiàn)了規(guī)?；N植，是淫羊藿屬中首個(gè)實(shí)現(xiàn)大面積人工種植的物種，但其營(yíng)養(yǎng)需求規(guī)律尚需系統(tǒng)研究。本研究組在對(duì)擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)地土壤理化狀況調(diào)查分析中發(fā)現(xiàn)，氮素對(duì)擬巫山淫羊藿的葉產(chǎn)量有顯著影響[5]。本文利用水培方式就氮素濃度和氮素形態(tài)對(duì)擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)指標(biāo)和黃酮類(lèi)成分含量的影響開(kāi)展研究。

1 材料

1.1 儀器與試劑

自制水培盆；通氣泵（SB-248，中山市松寶電器有限公司）；pH計(jì)（ST300，奧豪斯儀器（常州）有限公司）；光合儀（LI-6400XT，美國(guó)LI-COR公司）；熒光儀（Dual-Pam-100，德國(guó)WALZ公司）；高效液相色譜儀（Flexar FX-15，美國(guó)PE公司）；紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（島津UV2550，日本島津制作所）；分析天平（FA2014N型，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；循環(huán)式真空泵（CA-1111，上海愛(ài)朗儀器有限公司）；超聲波清洗器（KQ-500E型，昆山市超聲儀器有限公司）。

純凈水（娃哈哈）；甲醇（色譜純，fisher公司）；乙腈（色譜純，fisher公司），無(wú)水乙醇（分析純，北京化工廠(chǎng)）；硝酸鈣、硝酸鉀、氯化鈣、氯化鉀、硫酸鎂、硫酸銨、磷酸二氫鉀、硼酸、硫酸錳、硫酸銅、硫酸鋅、硫酸亞鐵、EDTA（分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）。對(duì)照品朝藿定A、B、C，淫羊藿苷及鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ均由本實(shí)驗(yàn)自制，純度均大于98%。

1.2 植物樣品

一年生擬巫山淫羊藿實(shí)生苗，采自貴州雷山栽培基地的同一塊種植地，經(jīng)郭寶林教授鑒定為擬巫山淫羊藿E. pseudowushanense。試驗(yàn)于2016年10月至12月在藥用植物研究所北京溫室培養(yǎng)間進(jìn)行，溫度20 ℃左右，光照強(qiáng)度為63 μmol·m-2·s-1，相對(duì)濕度60%，每日光照16 h，黑暗8 h。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

首先將苗栽種在盛有25% Hoagland營(yíng)養(yǎng)液的塑料盆（6 L）中進(jìn)行緩苗。1周后長(zhǎng)出新根，再?gòu)钠渲羞x取生長(zhǎng)良好且大小一致的實(shí)生苗，隨機(jī)均分為12個(gè)組。試驗(yàn)包括2部分，氮濃度試驗(yàn)和氮素形態(tài)及配比試驗(yàn)。每個(gè)培養(yǎng)盆為1個(gè)處理，共30株，包含3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10株。

氮濃度（硝態(tài)氮）試驗(yàn)設(shè)有7個(gè)處理：0 mmol·L-1（N0），1.0 mmol·L-1（N1），2.5 mmol·L-1（N2），5.0 mmol·L-1（N3），7.5 mmol·L-1（N4），10.0 mmol·L-1（N5），13.0 mmol·L-1（N6），各處理所用營(yíng)養(yǎng)液中H2PO4-的濃度為0.25 mmol·L-1，K+的濃度為5.0 mmol·L-1，Ca2+的濃度為4.0 mmol·L-1，其他元素及鐵鹽均與100% Hoagland營(yíng)養(yǎng)液相同。

氮形態(tài)和配比試驗(yàn)設(shè)有5個(gè)處理，硝銨比NO3-N/NH4-N依次為5∶0（T1），4∶1（T2），2.5∶2.5（T3），1∶4（T4），0∶5（T5），總施氮量為5 mmol·L-1。各處理所用營(yíng)養(yǎng)液中除氮以外的其他元素及鐵鹽均與100% Hoagland營(yíng)養(yǎng)液相同。

每3 d調(diào)1次pH（6.00± 0.03），每10 d更換1次營(yíng)養(yǎng)液。連續(xù)處理2個(gè)月后對(duì)擬巫山淫羊藿進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定。

2.2 取樣

從每個(gè)處理的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)挑選3株植物，取內(nèi)側(cè)成熟葉片，進(jìn)行光合參數(shù)測(cè)定；從每個(gè)重復(fù)每株取1枚新鮮的成熟葉片，剪碎后混勻，測(cè)定光合色素含量；10株苗于105 ℃殺青，80 ℃烘干，稱(chēng)量根、莖、葉及全株干重，成熟葉片混合粉碎，測(cè)定黃酮類(lèi)成分、可溶性糖及可溶性蛋白含量。

2.3 測(cè)定項(xiàng)目

2.3.1 光合色素的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[6]。

2.3.2 淫羊藿苷類(lèi)黃酮的測(cè)定 樣品溶液的制備：精密稱(chēng)定過(guò)3號(hào)篩的干燥樣品約0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密量取30 mL 50%乙醇，稱(chēng)重，超聲提取1 h，放冷，再稱(chēng)重，用50%乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，用0.22 μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取各對(duì)照品，分別配制成朝藿定A 1.361 g·L-1，朝藿定B 1.163 g·L-1，朝藿定C 2.012 g·L-1，淫羊藿苷1.887 g·L-1，鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ 0.991 g·L-1的對(duì)照品溶液。

色譜條件：Agela Technologies Venusil MP C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～25 min，25%～27%A；25～30 min，27%～80%A；30～35 min，80%～100%A）；流速 1.0 mL·min-1；柱溫 35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng) 270 nm；進(jìn)樣量 10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3.3 光合特性指標(biāo)測(cè)定 于上午8：00—11：30測(cè)定葉片的凈光合速率（Pn）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、胞間二氧化碳濃度（Ci）和蒸騰速率（Tr）。樣本室內(nèi)氣體流速200 μmol·s-1，葉室CO2濃度600 μmol·mol-1，溫度20 ℃，相對(duì)濕度53%。紅藍(lán)光源，葉室光合有效輻射為63 μmol·m-2·s-1。endprint

2.3.4 可溶性蛋白和可溶性糖的測(cè)定 采用改良的考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定可溶性蛋白含量[7]，采用蒽酮比色法測(cè)定可溶性糖含量[8]。

2.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2016和SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同處理間的差異采用單因素方差分析，多重比較采用Duncan進(jìn)行。

3 結(jié)果與分析

3.1 HPLC方法學(xué)考察

3.1.1 線(xiàn)性關(guān)系 分別精密吸取2.3.2項(xiàng)下的各對(duì)照品溶液1.0，2.0，5.0，8.0，12.0，15.0，18.0，20.0 μL，按2.3.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積為橫坐標(biāo)（x），進(jìn)樣質(zhì)量（μg）為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，見(jiàn)表1。

3.1.2 精密度 取2.3.2項(xiàng)下的供試品溶液，在2.3.2項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ峰面積的RSD分別為 1.8%，1.8%，2.0%，1.4%，2.0%。

3.1.3 重復(fù)性 按2.3.2項(xiàng)下方法操作，制備同一 供試品溶液6份，在2.3.2項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定，記錄峰面積，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ峰面積的RSD分別為0.79%，2.4%，2.5%，2.9%，2.6%。

3.1.4 加樣回收率 精密稱(chēng)定6份已測(cè)定含量的擬巫山淫羊藿樣品，每份約0.1 g，加入與0.1 g該樣品含量相等的5種對(duì)照品，按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。在2.3.2項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算回收率，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的回收率和RSD分別是99.74%，1.2%；100.1%，0.92%；100.2%，0.88%；99.91%，1.2%；100.1%，0.92%。

3.2 氮濃度對(duì)擬巫山淫羊藿的影響

3.2.1 不同氮濃度對(duì)擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)及生化指標(biāo)的影響 不同氮濃度顯著影響了擬巫山淫羊藿的單株葉干重及單株生物量（干重）。葉干重隨氮濃度的增大而增加，N5，N6組顯著高于N0～N4組（P<0.05），但N5，N6 2組間和N0～N4 4組間均無(wú)明顯差異，N5組分別比N0，N4組高35.71%，22.58%。莖干重、根干重及根冠比隨不同氮濃度的變化不明顯，生物量隨氮濃度增大的變化趨勢(shì)與葉干重相似，可溶性糖及可溶性蛋白的含量隨不同氮濃度變化不明顯，見(jiàn)表2。

3.2.2 不同氮濃度對(duì)擬巫山淫羊藿光合色素含量及光合參數(shù)的影響 N0組中葉綠素a的含量最低，N1～N2組較高，N3組最高，N4～N6僅次于N3組（P<0.05），N3組比N2組高33.91%。葉綠素b、葉綠素總量（葉綠素a+葉綠素b）及類(lèi)胡蘿卜素的含量隨不同氮濃度的變化趨勢(shì)與葉綠素a相似，即光合色素的含量隨氮濃度增加大體呈增大趨勢(shì)，見(jiàn)表3。

擬巫山淫羊藿的Pn隨氮濃度增大呈逐漸增大趨勢(shì)，N0組的Pn最小，N1，N2的Pn僅高于N0組（P<0.05）；N3～N5組的Pn較大，顯著高于N0～N2組；N6組的Pn最大（P<0.05），比N1組高28.36%。整體來(lái)看N3～N6組的Pn較大，而N0～N2組的Pn較小。不同氮濃度對(duì)Ci也有影響：N3～N6組的Ci較大，而N0～N2組的Ci較小，但差異并不顯著。不同氮濃度對(duì)Gs及Tr影響不明顯。

3.2.3 不同氮濃度對(duì)擬巫山淫羊藿黃酮類(lèi)成分含量的影響 不同氮濃度對(duì)擬巫山淫羊藿中不同黃酮化合物的含量均有顯著影響，見(jiàn)表4。

朝藿定C的含量在N5組中最高，在N3組中最低（P<0.05），N5組比N3組高130.69%。整體看來(lái)，朝藿定C的含量在N4～N6組均較高；N0，N1組居中；N2，N3組的含量最低，N0組比N3組高69.31%（P<0.05）。朝藿定A、朝藿定B、淫羊藿苷及總黃酮含量（5種黃酮的含量之和）變化與朝藿定C的變化相似，鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ含量變化不同，隨氮濃度增大而降低。

不同氮濃度對(duì)朝藿定C和總黃酮的產(chǎn)量的影響與對(duì)朝藿定C含量的影響幾乎一致。

3.3 氮形態(tài)對(duì)擬巫山淫羊藿的影響

3.3.1 不同氮素形態(tài)對(duì)擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)及生化指標(biāo)的影響 不同氮素形態(tài)及配比顯著影響了擬巫山淫羊藿的單株葉干重、莖干重、根干重、生物量及根冠比，見(jiàn)表5。

葉干重隨硝銨比的減小呈先增大后減少趨勢(shì)。T3組中葉干重最高（P<0.05），比T1組高38.42%，T1和T5組中單株葉干重較低，顯著低于其他各組（P<0.05）。莖干重和生物量隨不同硝銨比減小的變化趨勢(shì)與葉干重一致。不同氮素形態(tài)及配比對(duì)根干重也有明顯影響。T1和T3組的根干重?zé)o顯著差別，T3組分別比T2，T4，T5組高34.76%，28.70%，59.40%，T2，T4，T5 3組間無(wú)明顯差異。根冠比隨硝銨比的減小大體呈降低趨勢(shì)，T1組比T5組高48.39%。

擬巫山淫羊藿中可溶性糖及可溶性蛋白的含量隨不同氮素形態(tài)及配比的變化不明顯。

3.3.2 不同氮素形態(tài)及配比對(duì)擬巫山淫羊藿光合色素含量及光合參數(shù)的影響 擬巫山淫羊藿中葉綠素a、葉綠素b、葉綠素總量及類(lèi)胡蘿卜素的含量隨硝銨比減小均呈先降低后升高趨勢(shì)，其中T3，T4組各色素含量最低（P<0.05），T1，T2，T5組間各色素含量的差異不明顯，但均顯著高于T3，T4組（P<0.05），T1組中葉綠素a、葉綠素b、葉綠素總量及類(lèi)胡蘿卜素的含量分別比T3組高11.31%，9.23%，11.15%，8.77%，見(jiàn)表6。

不同氮素形態(tài)及配比對(duì)擬巫山淫羊藿Pn影響較大。Pn由大到小依次為T(mén)1，T2（二者無(wú)明顯差異）>T5>T3>T4，T2組比T4組高62.38%。不同氮素形態(tài)及配比對(duì)Ci也有較大影響。T1，T5組的Ci最低，T2，T3，T4組中Ci最高，二者有顯著性差異（P<0.05）。endprint

3.3.3 不同氮素形態(tài)及配比對(duì)擬巫山淫羊藿黃酮類(lèi)成分含量的影響 氮素形態(tài)及配比的差異對(duì)不同黃酮化合物含量的影響不一，見(jiàn)表7。朝藿定C的含量在T1組中最高，但僅比T2～T5組高4.99%～8.27%（P<0.05），T2～T5 4組間差異不明顯。朝藿定A、B，淫羊藿苷及總黃酮含量在T1組中均較高，在T2組中最低，T1組分別比T2組高41.18%，62.07%，26.67%（P<0.05）。而鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的含量隨硝銨比減小而降低。

朝藿定C及總黃酮的產(chǎn)量隨硝銨比減小呈增大—減小趨勢(shì)，T3和T4組產(chǎn)量最高（組間無(wú)明顯差異），T1和T5組含量最低（組間無(wú)明顯差異），T3組中朝藿定C及總黃酮的產(chǎn)量分別比T1組高26.67%，25.47%。

4 討論與結(jié)論

4.1 氮濃度和氮形態(tài)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響

大量研究表明，植物的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量的形成需要適宜的氮肥量。不同植物對(duì)施氮量的響應(yīng)不一，大體可分為2種類(lèi)型：一種是對(duì)高氮敏感的植物，表現(xiàn)為產(chǎn)量隨施氮量的增大呈增長(zhǎng)-快速降低的趨勢(shì)，如蕎麥[9]、黃芪[10]、杭白菊[11]等；另一種是高氮耐受植物，產(chǎn)量隨施肥量的增大呈增長(zhǎng)-平臺(tái)-降低的趨勢(shì)，如廣藿香[12]、廣金錢(qián)草[13]、蘆薈[14]等。在本試驗(yàn)條件下，擬巫山淫羊藿的葉干重及生物量隨氮濃度增大而增加，10.0 mmol·L-1是其生長(zhǎng)由一般向良好轉(zhuǎn)變的拐點(diǎn)，繼續(xù)增大氮濃度到13.0 mmol·L-1，葉干重和生物量變化不明顯，故推測(cè)擬巫山淫羊藿屬于高氮耐受型植物。這與前期對(duì)貴州擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)地的土樣調(diào)研的結(jié)果一致。此外，其他學(xué)者[15-16]在對(duì)柔毛和巫山淫羊藿的研究中得到類(lèi)似結(jié)果。

氮是葉綠素的重要組成成分，缺氮會(huì)抑制葉綠素的合成，適宜氮肥會(huì)促進(jìn)各光合色素的形成。光合色素參與光合作用光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化等重要環(huán)節(jié)，對(duì)光合作用有十分重要的影響。在本實(shí)驗(yàn)中，各光合色素含量及凈光合速率隨施氮量的變化趨勢(shì)相似，二者在N0組最低，在N3～N6組較高。這與前人在青岡櫟容器苗[17]、玉米[18]等植物上的研究結(jié)果一致。

不同植物在長(zhǎng)期進(jìn)化中形成了對(duì)不同氮素形態(tài)的偏向性。大量研究表明，多數(shù)植物在硝態(tài)氮和銨態(tài)氮混施時(shí)生長(zhǎng)良好，如油麥[19]、川芎[20]、半夏[21]等。也有許多植物在硝態(tài)氮中生長(zhǎng)良好，如菠菜[22]、黃瓜[23]等。然而對(duì)于分布在酸性土壤上的杜鵑花科的蔓越橘[24]和長(zhǎng)期生長(zhǎng)在水漬環(huán)境中的水稻[25]、黑麥草[26]等植物而言，銨態(tài)氮是比硝態(tài)氮更好的氮源。只有極少數(shù)植物在純銨態(tài)氮和純硝態(tài)氮環(huán)境中均能生長(zhǎng)良好，如甜菜、棉花、高粱[27]等。對(duì)于擬巫山淫羊藿來(lái)說(shuō)，最適的氮形態(tài)為2.5 mmol·L-1硝態(tài)氮+2.5 mmol·L-1銨態(tài)氮，此時(shí)植物葉、莖、根干重均最大。純硝態(tài)氮及純銨態(tài)氮處理下，光合色素含量及光合速率較高，而生物量卻不高，這可能與葉片較小和增厚有關(guān)。

4.2 氮濃度和氮形態(tài)對(duì)淫羊藿苷類(lèi)黃酮成分的影響

氮濃度對(duì)黃酮類(lèi)含量有明顯影響。朝藿定C的含量在N4組中較N3組有突然升高，并在N5組又有升高，含量最高的N5組比含量最低的N3組高130.69%（P<0.05），無(wú)氮的N0組和低氮組（N1，N2組）的朝藿定C含量也高于N3組，N0組比N3組高69.31%（P<0.05）。不同氮濃度對(duì)朝藿定A、朝藿定B、淫羊藿苷及總黃酮含量的影響與朝藿定C相似，然而鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的含量隨氮濃度增大而降低。其他學(xué)者報(bào)道低氮會(huì)使番茄葉片中槲皮素、山柰酚及鼠李素的含量升高[28]，小蕁麻葉片[29]中槲皮素類(lèi)化合物含量升高。這與5種黃酮類(lèi)成分在0～5 mmol·L-1隨氮濃度增加大體呈降低的結(jié)果相似。5種黃酮類(lèi)成分在7.5～13.0 mmol·L-1較高，這與其他學(xué)者在枸杞[30]、黃芩[31]及蒔蘿[32]中的研究結(jié)果相似，這可能與植物自身的營(yíng)養(yǎng)特性有關(guān)，也可能與次生代謝物復(fù)雜的合成、調(diào)控過(guò)程有關(guān)，但相關(guān)機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

氮形態(tài)對(duì)黃酮含量的影響遠(yuǎn)小于氮濃度的影響。朝藿定C的含量在T1組中最高，但僅比T2～T5組高4.99%～8.27%（P<0.05），其他4組間差異不明顯。朝藿定A，B、淫羊藿苷及總黃酮含量在T1組中均較高，在T2組中最低，T1組分別比T2組高41%，62%，27%（P<0.05）。而鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的含量隨硝銨比減小而降低。純硝態(tài)氮下5中黃酮成分含量均最高的原因可能與此時(shí)植物葉干重最低引起的濃縮效應(yīng)有關(guān)，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。朝藿定C和總黃酮的產(chǎn)量隨硝銨比的減小呈增大—減小趨勢(shì)，T3，T4組產(chǎn)量最高（2組間無(wú)明顯差異）。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Kang H K， Choi Y H， Kwon H， et al. Estrogenic/antiestrogenic activities of a Epimedium koreanum extract and its major components： in vitro and in vivo studies[J]. Food Chem Toxicol， 2012， 50（8）：2751.

[2] Islam M N， Kim U， Kim D H， et al. High-performance liquid chromatography-based multivariate analysis to predict the estrogenic activity of an Epimedium koreanum extract[J]. Biosci Biotech Bioch， 2012， 76（5）：923.

[3] 謝娟平， 謝人明， 王小微. 巫山淫羊藿主要成分朝藿定C和雙藿苷A抗炎作用研究[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)， 2012（3）：198.endprint

[4] Huang M， Feng J， Xia P，et al. Bioactive study on mixtures of epimedin c and icariin monomers with invariant molarity to zebrafish osteoporosis model [J]. Chin Herb Med， 2017， 9（1）：69.

[5] 張?jiān)骑L(fēng)， 郭寶林. 擬巫山淫羊藿生長(zhǎng)地土壤理化性質(zhì)調(diào)查分析[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥， 2017， 19（4）：543.

[6] 明華， 胡春勝， 張玉銘，等. 浸提法測(cè)定玉米葉綠素含量的改進(jìn)[J]. 玉米科學(xué)， 2007， 15（4）：93.

[7] 王永剛， 馬建忠， 馬雪青，等. 響應(yīng)面法優(yōu)化考馬斯亮藍(lán)G-250溶液的配制[J]. 藥物生物技術(shù)， 2013（1）：57.

[8] 馬琴?lài)?guó)， 王引權(quán)， 趙勇. 蒽酮-硫酸比色法測(cè)定黨參中可溶性糖含量的研究[J]. 甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2009， 26（6）：46.

[9] 向達(dá)兵， 趙江林， 胡麗雪，等. 施氮量對(duì)苦蕎麥生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量及品質(zhì)的影響[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2013， 40（14）：57.

[10] 王振，王渭玲，徐福利.膜莢黃芪氮磷鉀優(yōu)化施肥模式研究[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2008， 14（3）：552.

[11] 祝麗香， 王建華， 畢建杰，等. 不同氮素用量對(duì)杭白菊養(yǎng)分累積、轉(zhuǎn)運(yùn)及產(chǎn)量的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2010， 16（4）：992.

[12] 盧麗蘭， 楊新全， 楊勇，等. 不同供氮水平對(duì)廣藿香產(chǎn)量與品質(zhì)的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2014（3）：702.

[13] 周佳民， 尹小紅， 陳超君，等. 施氮水平對(duì)廣金錢(qián)草產(chǎn)量和活性成分含量的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志， 2010， 35（12）：1533.

[14] 汪吉東， 劉兆普， 鄭青松，等. 供氮水平對(duì)蘆薈幼苗生長(zhǎng)、硝酸鹽和次生代謝產(chǎn)物含量的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2006， 12（6）：864.

[15] 錢(qián)一凡， 黎云祥， 陳蘭英，等. 施肥對(duì)巫山淫羊藿和柔毛淫羊藿產(chǎn)量的影響[J]. 西華師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版， 2014， 35（1）：57.

[16] 張建海， 馮彬彬. 影響巫山淫羊藿品質(zhì)的施肥指標(biāo)體系構(gòu)建[J]. 中草藥， 2015， 46（12）：1819.

[17] 陳秋夏， 王金旺， 鄭堅(jiān)，等. 不同施氮水平對(duì)青岡櫟容器苗的形態(tài)和生理特性影響[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2011， 27（28）：1.

[18] 王曉偉， 閆超， 萬(wàn)濤，等. 施氮水平對(duì)大豆光合作用及產(chǎn)量的影響[J]. 作物雜志， 2011（2）：49.

[19] 王晉， 周相助， 胡海非，等. 硝態(tài)和銨態(tài)氮配比對(duì)水培油麥菜苗期生長(zhǎng)及生理特性的影響[J]. 西北植物學(xué)報(bào)， 2016， 36（3）：542.

[20] 范巧佳， 張毅， 楊世民，等. 氮素形態(tài)對(duì)川芎生長(zhǎng)、產(chǎn)量與阿魏酸和總生物堿含量的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2010， 16（3）：720.

[21] 李燦雯， 王康才， 吳健，等. 氮素形態(tài)對(duì)半夏生長(zhǎng)及生物堿和總有機(jī)酸累積的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2012， 18（1）：256.

[22] 邢素芝， 汪建飛， 李孝良，等. 氮肥形態(tài)及配比對(duì)菠菜生長(zhǎng)和安全品質(zhì)的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)， 2015， 21（2）：527.

[23] Maynard D N， Barker A V. Studies on the tolerance of plants to ammonium nutrition[J]. J Am Soc Hort Sci， 1969， 94：235.

[24] Greidanus T， Peterson L A， Schrader L E， et al. Essentiality of ammonium for cranberry nutrition[J]. J Am Soc Hortic Sci， 1972， 97（2）：272.

[25] Wahhab A， Bhatti H M. Effect of various sources of nitrogen on rice paddy yield[J]. Agron J， 1957， 49（3）： 114.

[26] Spratt E D， Gasser J K R. The effect of ammonium sulphate treated with a nitrification inhibitor， and calcium nitrate， on growth and N-uptake of spring wheat， ryegrass and kale[J]. J Agr Sci， 1970， 74（1）：111.

[27] Morris H D， Giddens J. Response of several crops to ammonium and nitrate forms of nitrogen as influenced by soil fumigation and liming[J]. Agron J， 1963， 55（4）：372.

[28] Lvdal T， Olsen K M， Slimestad R， et al. Synergetic effects of nitrogen depletion， temperature， and light on the content of phenolic compounds and gene expression in leaves of tomato[J]. Phytochemistry， 2010， 71（5/6）：605.

[29] Grevsen K， Fretté X C， Christensen L P. Concentration and composition of flavonol glycosides and phenolic acids in aerial parts of stinging nettle （Urtica dioica L.） are affected by nitrogen fertilization and by harvest time[J]. Eur J Hortic Sci， 2008， 73（1）：20.

[30] 康建宏， 吳宏亮， 楊涓，等. 不同施氮水平下枸杞主要次生代謝產(chǎn)物與多糖的關(guān)系研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2008（36）：16008.

[31] 曹鮮艷， 徐福利， 王渭玲，等. 黃芩產(chǎn)量和黃芩苷含量對(duì)氮磷鉀肥料的響應(yīng)[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)， 2012， 23（8）：2171.

[32] Ahl S A， Aly M S， El-Shahat A Z N， et al. Effect of nitrogen and/or bio-fertilizer on the yield， total flavonoids， carbohydrate contents， essential oil quantity and constituents of dill plants[J]. Middle East J Agric Res， 2014， 4：291.

[責(zé)任編輯 呂冬梅]endprint