血小板活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展

卞敬琦，馮月男，牛雯穎，肖洪彬

血管出現(xiàn)損傷時(shí)，血小板會(huì)直接與損傷部位的激活因子相接觸并受到刺激，引發(fā)血小板活化并最終導(dǎo)致血栓形成。病理性血小板異?；罨瘯?huì)誘導(dǎo)閉塞性血栓的形成，這將增加人們患心臟病及卒中等缺血性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)黏附蛋白及可溶性激動(dòng)劑是血小板活化的主要因素，它們與血小板膜受體相互作用進(jìn)而引發(fā)血小板的一系列生理變化。隨著對(duì)機(jī)體凝血機(jī)制研究的不斷深入，越來(lái)越多的血小板活化信號(hào)通路被證實(shí)，近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)了更為復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及放大網(wǎng)絡(luò)。本文將對(duì)這些新發(fā)現(xiàn)的血小板活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行概述。

1 血小板活化受體信號(hào)通路

1.1 黏附受體介導(dǎo)的血小板活化通路 在高血流量剪切力的作用下，血小板膜表面糖蛋白GPⅠb-Ⅸ-Ⅸ-Ⅴ復(fù)合物與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面或皮下組織中的血管假性血友病因子（von Willebrand factor，VWF）結(jié)合。該復(fù)合物中的配體結(jié)合亞基GPⅠbα能夠特異性識(shí)別VWF上的A1結(jié)構(gòu)域并發(fā)生偶聯(lián)，該偶聯(lián)使血小板能夠以滾動(dòng)的方式黏附于受損傷部位。GPⅠb-Ⅸ介導(dǎo)的血小板與VWF的接觸只是暫時(shí)的，需要更為穩(wěn)定且持久的偶聯(lián)結(jié)構(gòu)。最新的研究證實(shí)，GPⅠbα上一個(gè)被稱(chēng)作機(jī)械敏感通路的區(qū)域在VWF依賴的拉力作用下會(huì)發(fā)生延展［1］。而GPⅠbα上的另一個(gè)亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)同樣會(huì)在VWF的介導(dǎo)下發(fā)生構(gòu)象變化［2］，這些構(gòu)象變化不僅能夠增強(qiáng)血小板與VWF之間的穩(wěn)定性，還可以使細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量提升，促進(jìn)血栓形成［3］。GPⅠb-Ⅸ與凝血酶的結(jié)合對(duì)于低劑量下凝血酶誘導(dǎo)的血小板活化具有重要影響。該機(jī)制普遍適用于凝血物含量較低的凝血過(guò)程，而該過(guò)程對(duì)體內(nèi)血栓的形成同樣至關(guān)重要［4］。

免疫受體酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM）是免疫細(xì)胞活化相關(guān)受體胞漿區(qū)所共有的、以酪氨酸殘基為基礎(chǔ)的氨基酸序列，其中酪氨酸是蛋白激酶的磷酸化位點(diǎn)，磷酸化后能夠與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑下游的信號(hào)分子結(jié)合，對(duì)白細(xì)胞的激活起著重要作用［5］。整合素以及GPⅠb-Ⅸ雖然與ITAM受體有關(guān)，但它們的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)卻不以ITAM的信號(hào)通路為主，ITAM的作用主要體現(xiàn)在受體信號(hào)放大上［6］。位于人血小板上的ITAM受體亞基，如Fc受體γ鏈（FcRγ）與其對(duì)應(yīng)的位于免疫球蛋白IgG上的FcγRⅡa受體的結(jié)合會(huì)導(dǎo)致人血小板對(duì)抗原抗體復(fù)合物以及聚集免疫球蛋白的應(yīng)答。ITAM受體除了對(duì)血小板與白細(xì)胞信號(hào)傳輸有影響外，其對(duì)血小板的活化作用也是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。ITAM與膠原受體（GPVI）信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)，而膠原受體是血小板活化、黏附過(guò)程的重要元件。研究表明，GPVI與FcRγ形成的非共價(jià)復(fù)合物與一些特殊的家族激酶，如Lyn有關(guān)聯(lián)，然而GPVI與Lyn的關(guān)系至今仍存在爭(zhēng)議。一些研究者認(rèn)為L(zhǎng)yn在GPIV介導(dǎo)的ITAM信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面具有拮抗作用，其抑制了配對(duì)免疫蛋白受體B在ITAM信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的促進(jìn)作用［7］。此外，活性氧對(duì)于ITAM的信號(hào)放大作用同樣具有重要影響［8］。

1.2 模式識(shí)別受體介導(dǎo)的血小板活化通路 病原相關(guān)模式分子（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）和損傷相關(guān)模式分子（damageassociated molecular patterns，DAMPs）是組織或細(xì)胞受到損傷、缺氧、應(yīng)激等因素刺激后釋放到細(xì)胞間隙或血液循環(huán)中的一類(lèi)成份。PAMPs與DAMPs可通過(guò) Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域（NOD）樣受體、糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）等模式受體實(shí)現(xiàn)先天免疫及非感染性炎癥應(yīng)答的初始信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。最新的研究表明，TLRs和NOD均與促進(jìn)血小板活化有關(guān)［9］。血小板表面分布有幾種 TLRs，如 TLR1、TLR2、TLR4、TLR6 以及TLR9。研究表明，TLR2可在TLR1-/TLRs-特異性受體激動(dòng)劑以及脂質(zhì)衍生物的誘導(dǎo)下活化血小板［10］。TLR9則在氧化應(yīng)激的過(guò)程中調(diào)節(jié)了血小板活化信號(hào)的傳導(dǎo)。TLR4是血小板主要的脂多糖受體，其可促進(jìn)血小板顆粒的釋放與活化，且TLR4介導(dǎo)了髓樣分化因子依賴的環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷-蛋白激酶G血小板活化通路［11］。由模式識(shí)別受體引發(fā)的血小板活化很可能是機(jī)體針對(duì)微生物感染及組織損傷的炎性反應(yīng)，已經(jīng)有研究證明血小板活化與血栓形成對(duì)機(jī)體感染期間出現(xiàn)的敗血癥及動(dòng)脈粥樣硬化具有重要影響［12］。

1.3 可溶性血小板受體激動(dòng)劑介導(dǎo)的G蛋白偶聯(lián)血小板活化 血管損傷處釋放的可溶性受體激動(dòng)劑與血小板膜表面特異性受體的結(jié)合是血小板活化的關(guān)鍵。這些特異性受體絕大多數(shù)是G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein-coupled receptors，GPCR）。GPCR 家族是一組擁有7個(gè)跨膜域結(jié)構(gòu)的膜蛋白，該受體的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要依靠其配體系統(tǒng)。與配體結(jié)合的GPCR會(huì)發(fā)生構(gòu)象變化，從而表現(xiàn)出鳥(niǎo)苷酸交換因子的特性，三磷酸鳥(niǎo)苷（GTP）與G蛋白上固有的二磷酸鳥(niǎo)苷（GDP）的交換使得α亞基與β、γ亞基分離，G蛋白隨即變?yōu)榧せ顮顟B(tài)，并參與下一步的信號(hào)傳遞過(guò)程，而具體的傳遞通路則取決于α亞基的種類(lèi)。典型的G蛋白亞基Gαi及Gαs，其偶聯(lián)受體分別為P2Y12與前列腺素受體PTGIR。Gαi及Gαs均可與腺苷酸環(huán)化酶結(jié)合，Gαs會(huì)通過(guò)刺激腺苷酸環(huán)化酶而促進(jìn)腺苷酸的合成，Gαi則會(huì)抑制該反應(yīng)。最新研究表明，腺苷酸可利用其依賴的腺苷酸蛋白激酶使血小板保持穩(wěn)定狀態(tài)，而Gαi可通過(guò)拮抗抑制血小板合成的第二信使（環(huán)腺苷酸）達(dá)到激活血小板的目的［13］。

1.4 血小板激活途徑不同受體之間的協(xié)同作用 一些血小板激活劑存在多個(gè)血小板受體，最佳的血小板活化途徑常常需要多個(gè)受體通路的協(xié)同作用。二磷酸腺苷（ADP）是一種由血小板顆粒及受損細(xì)胞釋放出的血小板激活劑，其需在Gαq偶聯(lián)的P2Y1及Gαi偶聯(lián)的P2Y12共同信號(hào)作用下活化血小板。血凝素誘發(fā)的血小板活化網(wǎng)絡(luò)較為復(fù)雜，在血小板表面至少有3種血凝素受體：人源的血小板膜糖蛋白（PAR）1、PAR4和GPⅠb-Ⅸ以及鼠源的血小板膜糖蛋白PAR3、PAR4和GPⅠb-Ⅸ。研究證實(shí)，在血凝素的刺激作用下，PAR1會(huì)通過(guò)與PAR4形成異源二聚體的形式增強(qiáng)PAR4的裂解［14］。研究表明，PAR4與P2Y12形成的異源二聚體促進(jìn)了信號(hào)的傳遞，進(jìn)而導(dǎo)致與血小板激活相關(guān)蛋白激酶的活化［15］，針對(duì)于P2Y12的治療則可有效預(yù)防血小板的異?；罨?6］。在血小板活化機(jī)制中，GPⅠb-Ⅸ會(huì)促進(jìn)血凝素的分解，或者作為一個(gè)獨(dú)立的血小板活化信號(hào)，因此GPⅠb-Ⅸ的作用一直存在爭(zhēng)議。最近的研究結(jié)果表明，GPⅠb-Ⅸ既不是一個(gè)被動(dòng)的血凝素識(shí)別位點(diǎn)，也不是PAR-依賴的血凝素受體，但血凝素誘導(dǎo)的GPⅠb-Ⅸ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與PAR信號(hào)的協(xié)同作用是血小板應(yīng)答的最佳方式［4］。這些不同受體的協(xié)同作用極大地增強(qiáng)了血小板對(duì)血凝素濃度的敏感性，該機(jī)制對(duì)動(dòng)脈血栓的形成極為重要［4］。

2 信號(hào)放大網(wǎng)絡(luò)

2.1 磷脂酶C、鈣調(diào)節(jié)及甘油二脂（DAG） 磷脂酶C（Phospholipase C，PLC）是大多數(shù)血小板活化信號(hào)通路的整合中心。血小板表達(dá)了至少3種不同的PLC––PLCβ、PLCγ以及PLCδ。在人的血小板中，PLCγ2 的含量高于 PLCβ2 并均高于 PLCβ3，且PLCβ與PLCγ擁有不同的激活機(jī)制，PLCβ受Gαq的影響，而PLCγ則受酪氨酸激酶介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化的調(diào)控。然而最新的研究成果表明，Gαq偶聯(lián)的受體激動(dòng)劑也會(huì)通過(guò)活性氧介導(dǎo)的信號(hào)通路誘導(dǎo)PLCγ的磷酸化［17］。PLC的主要功能之一是催化45-磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）分解為DAG和1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）。IP3與IP3受體的結(jié)合使得Ca2+從復(fù)雜的管狀系統(tǒng)釋放到胞質(zhì)內(nèi)，該過(guò)程是凝血過(guò)程中Ca2+升高的主要機(jī)制。細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的升高在血小板活化過(guò)程中扮演了重要角色，其同時(shí)也是大部分細(xì)胞進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)的重要方式之一。DAG可活化常規(guī)（α、β）及特殊（δ、θ、η、ε）的蛋白激酶 C（PKC）同系物，這些同系物在整合素激活及血小板顆粒釋放過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。研究表明Ca2+濃度的增加促進(jìn)了Ca2+與DAG調(diào)控相關(guān)鳥(niǎo)嘌呤核苷酸傳遞因子Ⅰ（CalDAG-GEFⅠ）的釋放［18］。盡管 CalDAGGEFⅠ上僅存在一個(gè)低親和力的DAG結(jié)合位點(diǎn)，但并不排除其參與了CalDAG-GEFⅠ的活化過(guò)程［19］。

2.2 磷脂酰肌醇3-蛋白激酶（PI3K）通路 PI3K通路是誘導(dǎo)血小板顆粒釋放、激活及黏附的重要信號(hào)放大網(wǎng)絡(luò)。在眾多磷酸肌醇成員中，3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）主要由4,5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）在Ⅰ型PI3K的作用下轉(zhuǎn)變而來(lái)。受體激動(dòng)劑激活PI3K并產(chǎn)生PIP3，PIP3能夠與3-磷酸肌醇依賴的蛋白激酶1（PDK1）及其蛋白激酶亞型PIP3受體位點(diǎn)結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致PDK1磷酸化及蛋白激酶活化。在血小板中，蛋白激酶B（Akt）共含有3種異形體，敲除任何一種都會(huì)導(dǎo)致血凝素含量降低以及凝血惡烷A2類(lèi)似物誘導(dǎo)的血小板活化減弱［20］。一氧化氮合成酶（NOS）與糖原合成酶激酶3（GSK3β）是2種蛋白激酶效應(yīng)因子，它們被證實(shí)可以調(diào)節(jié)PI3K激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致血小板顆粒的分泌及活化。研究表明，GSK3β在不同的血小板活化途徑中扮演了不同的角色，首先其可以抑制血凝素誘導(dǎo)的血小板活化，但在膠原蛋白誘導(dǎo)的血小板活化過(guò)程中，GSK3β 似乎又能起到促進(jìn)作用［20］。然而 GSK3β的活化機(jī)制目前尚不清楚。最新的研究表明，PI3K家族的第二類(lèi)成員PI3KC2α對(duì)血栓在血流中形態(tài)的保持發(fā)揮了重要作用［21］。此外，PI3K家族的第三類(lèi)成員PI3K vps34可通過(guò)影響氮氧化物的組裝調(diào)節(jié)血小板活性且與血小板的自噬有密切關(guān)系［22］。

2.3 血小板環(huán)鳥(niǎo)苷酸（cGMP）信號(hào)通路新概念 cGMP在cGMP依賴的蛋白激酶（PKG）活化過(guò)程中扮演了重要角色。血小板激動(dòng)劑能夠刺激cGMP含量的升高，且外源性cGMP類(lèi)似物的刺激也會(huì)對(duì)血小板產(chǎn)生影響。早期對(duì)于由NO誘導(dǎo)的可溶性環(huán)鳥(niǎo)苷酸的研究表明，NO-cGMP通路能夠有效抑制血小板的活化，但幾乎全部的擬cGMP藥物并不能有效抑制血小板的生理功能。直到最近，這一概念受到了NO-cGMP-PKG雙向信號(hào)傳導(dǎo)研究的挑戰(zhàn)。研究人員發(fā)現(xiàn)，血小板活化過(guò)程中高濃度的NO及cGMP會(huì)抑制血小板的活化，而細(xì)胞內(nèi)部早期合成的低濃度NO及cGMP則可以促進(jìn)血小板的活化過(guò)程，且能夠顯著增加血小板對(duì)激動(dòng)劑的敏感度［23］，該血小板活化cGMP-PKG通路模式識(shí)別受體的重要作用已被多個(gè)研究小組成功證實(shí)［24］。

2.4 類(lèi)花生酸通路 類(lèi)花生酸作為第二信使為血小板活化傳遞信號(hào)，成員包括前列腺素類(lèi)、凝血惡烷類(lèi)和白細(xì)胞三烯類(lèi)等。類(lèi)花生酸的合成需要鈣離子依賴的細(xì)胞溶質(zhì)磷脂酶A2（PLA2）的活化，其可以水解磷脂膜釋放花生四烯酸（AA）。研究表明，AA是通過(guò)環(huán)氧合酶（COX）和脂氧合酶途徑進(jìn)行代謝的［25］。COX 可以將 AA 轉(zhuǎn)化為前列腺素（PG）［26］。血小板合成的幾種PG中凝血酶A2（TXA2）是一種有效的血小板激動(dòng)劑，其在增強(qiáng)血小板活性方面起著重要作用，TXA2與血小板偶聯(lián)受體Gq-/G13-的結(jié)合可以促進(jìn)血栓的形成。

2.5 顆粒物分泌介導(dǎo)的信號(hào)放大 血小板活化過(guò)程中最常見(jiàn)的信號(hào)放大機(jī)制是血小板顆粒的分泌。血小板含有3種主要分泌細(xì)胞器：含有小分子的δ顆粒、含有黏附蛋白的α顆粒以及含有降解酶的溶酶體［27-28］。已分泌的血小板顆粒不僅能夠增強(qiáng)血小板活化信號(hào)，還可以激活處于休眠狀態(tài)的血小板，該機(jī)制極大地促進(jìn)了血栓的形成。此外，分泌出的顆粒物有助于血管損傷及炎癥的修復(fù)，當(dāng)然也不可避免地增加了病理性動(dòng)脈粥樣硬化及血液中癌細(xì)胞的擴(kuò)散。血小板顆粒釋放的關(guān)鍵機(jī)制是顆粒膜與血小板及開(kāi)放微管系統(tǒng)中原生質(zhì)膜的融合，該融合使得血小板顆粒釋放到胞外環(huán)境中。隨著血小板連續(xù)的收縮，大量的顆粒被源源不斷地釋放出來(lái)，該過(guò)程受到N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感的融合蛋白（NSF）、可溶性NSF連接蛋白（SNAP）以及可溶性NSF連接蛋白受體（SNAREs）的調(diào)控［27-28］。細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度的升高及SNARE的磷酸化在某種程度上也刺激了顆粒物的分泌。幾乎所有的血小板激動(dòng)劑都會(huì)刺激血小板顆粒的分泌，如膠原蛋白和血凝素等“強(qiáng)”激動(dòng)劑會(huì)直接誘導(dǎo)血小板顆粒的分泌及聚集。相比之下，一些“弱”激動(dòng)劑，如ADP或者低濃度的“強(qiáng)”激動(dòng)劑需要在整合素等外源信號(hào)的介導(dǎo)下才能激活顆粒的分泌。目前已證實(shí)的與促進(jìn)血小板顆粒分泌相關(guān)的因子及信號(hào)通路包括：（1）鈣離子濃度。（2）PKC信號(hào)通路。（3）Src家族激酶信號(hào)通路。（4）PI3K/AKT 及NO/cGMP/PKG信號(hào)通路。（5）絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路。（6）CalDAG-GEFI與 Rap1b信號(hào)通路。（7）RhoGTPase Rac1與RhoA信號(hào)通路。這些通路的作用機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步研究證明。

3 展望

血小板活化信號(hào)在血小板誘導(dǎo)的血栓形成中發(fā)揮了重要作用，多年來(lái)一直是研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。相比于傳統(tǒng)的血小板活化概念，一些新出現(xiàn)的更為龐大且復(fù)雜的血小板信號(hào)激活及放大網(wǎng)絡(luò)越來(lái)越受到人們的關(guān)注。這些新理論的出現(xiàn)不僅使研究者對(duì)血小板活化機(jī)制有了更深入的認(rèn)識(shí)，同時(shí)也對(duì)傳統(tǒng)理論發(fā)起了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。借助于動(dòng)物模型技術(shù)的發(fā)展以及創(chuàng)新型藥物的研究，更多的血小板活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制將被闡明，血小板相關(guān)生理學(xué)領(lǐng)域的研究也將取得長(zhǎng)足進(jìn)步。

［1］Zhang W，Deng W，Zhou L，et al.Identification of a juxtamembrane mechanosensitive domain in the platelet mechanosensor glycoprotein Ib-IX complex［J］.Blood，2015，125（3）：562-569.doi:10.1182/blood-2014-07-589507.

［2］Ju L，Lou J，Chen Y，et al.Force-induced unfolding of leucine-rich repeats of glycoprotein Ibα strengthens ligand interaction［J］.BiophysJ，2015，109（9）：1781-1784.doi:10.1016/j.bpj.2015.08.050.

［3］Ju L，Chen Y，Xue L，et al.Cooperative unfolding of distinctive mechanoreceptor domains transduces force into signals［J］.eLife，2016，5：e15447.doi:10.7554/eLife.15447.

［4］Estevez B，Kim K，Delaney MK，et al.Signaling-mediated cooperativity between glycoprotein Ib-IX and protease-activated receptors in thrombin-induced platelet activation［J］.Blood，2016，127（5）：626-636.doi:10.1182/blood-2015-04-638387.

［5］Arman M，KrauelK.Human plateletIgG Fc receptor FcgammaRIIA in immunity and thrombosis［J］.J Thromb Haemost，2015，13（6）：893-908.doi:10.1111/jth.12905.

［6］Zhi H，Rauova L，Hayes V，et al.Cooperative integrin/ITAM signaling in platelets enhances thrombus formation in vitro and in vivo［J］.Blood，2013，121（10）：1858-1867.doi:10.1182/blood-2012-07-443325.

［7］Fan X，Shi P，Dai J，et al.Paired immunoglobulinlike receptor B regulates platelet activation［J］.Blood，2014，124（15）：2421 –2430.doi：10.1182/blood-2014-03-557645.

［8］Qiao J，Arthur JF，Gardiner EE，et al.Regulation of platelet activation and thrombus formation by reactive oxygen species［J］.Redox Biol，2017，14：126-130.doi：10.1016/j.redox.2017.08.021.

［9］Panigrahi S，Ma Y，Hong L，et al.Engagement of platelet toll-like receptor9 by novelendogenous ligands promotes platelet hyperreactivity and thrombosis［J］.Circ Res，2013，112（1）：103-112.doi：10.1161/CIRCRESAHA.112.274241.

［10］Biswas S，Xin L，Panigrahi S，et al.Novel phosphatidylethanol?amine derivatives accumulate in circulation in hyperlipidemic ApoE/mice and activate platelets via TLR2［J］.Blood，2016，127（21）：2618-2629.doi:10.1182/blood-2015-08-664300.

［11］Vogel S，Bodenstein R，Chen Q，et al.Platelet-derived HMGB1 is a critical mediator of thrombosis［J］.J Clin Invest，2015，125（12）：4638-4654.doi:10.1172/JCI81660.

［12］Boulaftali Y，Hess PR，Getz TM，et al.Platelet ITAM signaling is critical for vascular integrity in inflammation［J］.J Clin Invest，2013，123（2）：908-916.doi:10.1172/JCI65154.

［13］Aburima A，Wraith KS，Raslan Z，et al.cAMP signaling regulates platelet myosin light chain（MLC）phosphorylation and shape change through targeting the RhoA-Rho kinase-MLC phosphatase signaling pathway［J］.Blood，2013，122（20）：3533-3545.doi:10.1182/blood-2013-03-487850.

［14］Arachiche A，Mumaw MM，De La Fuente M，et al.Proteaseactivated receptor 1（PAR1）and PAR4 heterodimers are required for PAR1-enhanced cleavage of PAR4 by thrombin［J］.J Biol Chem，2013，288（45）：32553-32562.doi：10.1074/jbc.M113.472373.

［15］Khan A，Li D，Ibrahim S，et al.The physical association of the P2Y12 receptor with PAR4 regulates arrestin-mediated Akt activation［J］.Mol Pharmacol，2014，86（1）：1-11.doi:10.1124/mol.114.091595.

［16］Delierneux C，Donis N，Servais L Wéra O，et al.Targeting of C-type lectin-like receptor 2 or P2Y12 for the prevention of platelet activation by immunotherapeutic CpG oligodeoxynucleotides:reply.［J］.J Thromb Haemost，2017，Oct 20.doi:10.1111/jth.13876.［Epub ahead of print］．

［17］Delaney MK，Kim K，Estevez B，et al.Differential roles of the NADPH-oxidase 1 and 2 in platelet activation and thrombosis［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2016，36（5）：846-854.doi:10.1161/ATVBAHA.116.307308.

［18］Stefanini L，Roden RC，Bergmeier W.CalDAGGEFI is at the nexus of calcium-dependent platelet activation［J］.Blood，2009，114（12）：2506-2514.doi:10.1182/blood-2009-04-218768.

［19］Czikora A，Lundberg DJ，Abramovitz A，et al.Structural basis for the failure of the C1 domain of Ras guanine nucleotide releasing protein 2（RasGRP2）to bind phorbolester with high affinity［J］.J Biol Chem，2016，291（21）：11133-11147.doi:10.1074/jbc.M116.725333.

［20］O’Brien KA，Stojanovic-Terpo A，Hay N，et al.An important role for Akt3 in platelet activation and thrombosis［J］.Blood，2011，118（15）：4215-4223.doi:10.1182/blood-2010-12-323204.

［21］Mountford JK，Petitjean C，Putra HWK，et al.The class II PI 3-kinase，PI3KC2，links platelet internal membrane structure to shear-dependent adhesive function［J］.Nat Commun，2015，6：6535.doi:10.1038/ncomms7535.

［22］Feng W，Chang C，Luo D，et al.Dissection of autophagy in human platelets［J］.Autophagy，2014，10（4）：642-651.doi:10.4161/auto.27832.

［23］Zhang G，Xiang B，Dong A，et al.Biphasic roles for soluble guanylyl cyclase（sGC）in platelet activation［J］.Blood，2011，118（13）：3670-3679.doi:10.1182/blood-2011-03-341107.

［24］Zhang S，Zhang SH，Hu L，etal.Nucleotide-binding oligomerization domain 2 receptor is expressed in platelets and enhances platelet activation and thrombosis［J］.Circulation，2015，131（13）：1160-1170.doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.114.013743.

［25］Adler DH，Cogan JD，Phillips JA，et al.Inherited human cPLA（2α） deficiency is associated with impaired eicosanoid biosynthesis，small intestinal ulceration，and platelet dysfunction［J］.J Clin Invest，2008，118（6）：2121-2131.doi:10.1172/JCI30473.

［26］Yeung J，Holinstat M.12-Lipoxygenase：a potential target for novel anti-platelet therapeutics［J］.Cardiovasc Hematol Agents Med Chem，2011，9（3）：154-164.

［27］Golebiewska EM，Poole AW.Secrets of platelet exocytosis-what do we really know about platelet secretion mechanisms?［J］.Br J Haematol，2014，165（2）：204-216.doi:10.1111/bjh.12682.

［28］Koseoglu S，F(xiàn)laumenhaft R.Advances in platelet granule biology［J］.Curr Opin Hematol，2013，20（5）：464-471.doi:10.1097/MOH.0b013e3283632e6b.