植物血凝素誘發(fā)凝集反應(yīng)及對(duì)凝血系統(tǒng)的影響

賈睿奕，張　慶，丁曉旭，蘇艷娜

（承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科，河北承德 067000）

植物血凝素誘發(fā)凝集反應(yīng)及對(duì)凝血系統(tǒng)的影響

賈睿奕，張慶△，丁曉旭，蘇艷娜

（承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科，河北承德 067000）

目的：探討植物血凝素（PHA）誘發(fā)紅細(xì)胞凝集反應(yīng)及對(duì)凝血系統(tǒng)的影響。方法：12只Wistar大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，分別經(jīng)尾靜脈注射植物血凝素和生理鹽水，觀察紅細(xì)胞在體內(nèi)外的凝集反應(yīng)、溶血現(xiàn)象，大鼠的一般狀況以及大鼠凝血指標(biāo)的變化情況。結(jié)果：植物血凝素在體內(nèi)外均能誘發(fā)凝集反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)組大鼠表現(xiàn)為豎毛、弓背、蜷縮、顫抖，而對(duì)照組大鼠無(wú)上述表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)組大鼠纖維蛋白原顯著低于對(duì)照組，凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間、活化的部分凝血活酶時(shí)間、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值顯著高于對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。結(jié)論：植物血凝素在體內(nèi)外均能誘發(fā)凝集反應(yīng)，并能激活凝血系統(tǒng)，在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意其對(duì)凝血系統(tǒng)的影響。

植物血凝素；凝集反應(yīng)；凝血系統(tǒng)；臨床應(yīng)用

植物血凝素（PHA）是一種由低聚糖和蛋白質(zhì)組成的高分子糖蛋白，能與人和動(dòng)物的紅細(xì)胞受體相結(jié)合，引起凝集反應(yīng)，故命名為植物血凝素［1］。植物血凝素可從植物的根、莖、種子等部位進(jìn)行萃取、提純，有著較為廣泛的應(yīng)用，如用于各種細(xì)菌、病毒性疾病的治療和預(yù)防，以及腫瘤性疾病的治療［2-5］。植物血凝素還具有一個(gè)特性，即在體外能夠引起紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，但在體內(nèi)的凝集反應(yīng)尚不明確。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)植物血凝素的研究還不充分，臨床應(yīng)用中也未注意到其體內(nèi)的凝集現(xiàn)象。是否血凝素在體內(nèi)也能誘發(fā)紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，并導(dǎo)致凝血系統(tǒng)及微循環(huán)的障礙，本研究對(duì)此進(jìn)行了探討。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑 SPF級(jí)Wistar大鼠12只，雌雄各半，體重150-200g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供（許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001）。實(shí)驗(yàn)中按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予大鼠人道關(guān)懷。植物血凝素，購(gòu)自上海生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組：大鼠隨機(jī)分為血凝素實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組，每組6只（雌雄各半），分別經(jīng)尾靜脈注射血凝素和生理鹽水，劑量均為1.5ml/100g。

1.2.2觀察指標(biāo)：經(jīng)靜脈注射血凝素和生理鹽水4h后：①觀察大鼠的一般狀況；②經(jīng)大鼠尾靜脈采血，采用玻片法在顯微鏡下觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象；同時(shí)，應(yīng)用試管法，將血液離心后觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象。

1.2.3監(jiān)測(cè)凝血指標(biāo)：腹腔麻醉大鼠后，經(jīng)下腔靜脈取血，檢測(cè)大鼠的凝血指標(biāo)：纖維蛋白原（FIB）、凝血酶原時(shí)間（PT）、凝血酶時(shí)間（TT）、活化的部分凝血活酶時(shí)間（APTT）和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）。

1.3統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，組間比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1大鼠一般狀況 實(shí)驗(yàn)組大鼠主要表現(xiàn)為精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、顫抖、反應(yīng)差、活動(dòng)少；對(duì)照組大鼠無(wú)上述表現(xiàn)。

2.2凝集及溶血現(xiàn)象 對(duì)照組無(wú)凝集及溶血現(xiàn)象；實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，且離心后血液上清液呈橙紅色，出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（圖1-2）。

圖1　顯微鏡下血涂片觀察（A.對(duì)照組，B.實(shí)驗(yàn)組）

圖2　溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果（左.對(duì)照組，右.實(shí)驗(yàn)組）

2.3凝血指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)組大鼠FIB顯著低于對(duì)照組，PT、TT、APTT、INR顯著高于對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)附表：

附表 兩組大鼠凝血指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（，n=6）

附表 兩組大鼠凝血指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（，n=6）

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3　討論

植物血凝素是一種具有較強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的高分子糖蛋白，對(duì)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、CIK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞的活性均有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生IFN-γ、IL-2、IL-4等多種細(xì)胞因子［6-7］。植物血凝素在臨床上用于各種細(xì)菌、病毒性疾病的治療和預(yù)防、也可用于腫瘤的治療。但目前對(duì)植物血凝素的研究還有不同觀點(diǎn)，有研究報(bào)道原發(fā)性腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移等與體內(nèi)血凝素結(jié)合位點(diǎn)的存在呈正相關(guān)關(guān)系；同時(shí)，植物血凝素也可誘發(fā)人體的過(guò)敏癥狀［8-9］。雖然植物血凝素在體外的凝集現(xiàn)象被廣泛熟知，但在體內(nèi)可能由于血漿的稀釋作用，紅細(xì)胞的凝聚現(xiàn)象減弱，從而被忽視。但當(dāng)血凝素在體內(nèi)達(dá)到一定濃度后，紅細(xì)胞凝集能力加強(qiáng)，通過(guò)微血管時(shí)可能會(huì)使血管內(nèi)皮受損，從而激活凝血系統(tǒng)，產(chǎn)生繼發(fā)凝血和纖溶失衡。

本研究將植物血凝素注入大鼠體內(nèi)，當(dāng)血凝素進(jìn)入血液并達(dá)到一定濃度后，血液出現(xiàn)凝集反應(yīng)，導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集成團(tuán)，阻塞毛細(xì)血管，從而造成組織缺血缺氧，大鼠出現(xiàn)相應(yīng)的病理表現(xiàn)，如精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、顫抖等；同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)出現(xiàn)凝集反應(yīng)后，在補(bǔ)體的作用下可發(fā)生溶血；并伴隨著纖維蛋白原的下降，凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間、活化的部分凝血活酶時(shí)間等明顯升高，提示凝血系統(tǒng)被激活。

隨著相關(guān)研究的不斷深入，作為免疫學(xué)領(lǐng)域極其重要的藥物，植物血凝素不但具有巨大的應(yīng)用前景，而且植物血凝素抗菌、抗病毒、抗腫瘤的作用也逐漸應(yīng)用于臨床。但在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意，植物血凝素在體內(nèi)還具有誘發(fā)紅細(xì)胞凝集的作用，并且可引起凝血系統(tǒng)的改變。

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AGGLUTINATION REACTION INDUCED BY PHYTOHEMAGGLUTININ AND ITS’ EFFECTS ON
COAGULATION SYSTEM

JIA Rui-yi， ZHANG Qing， DING Xiao-xu， et al
(Department of Respiratory Medicine, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To explore the agglutination reaction induced by phytohemagglutinin （PHA） and it's effects on coagulation system. Methods: 12 Wistar rats were randomly divided into experimental group and control group，which were injected PHA and 0.9% saline into caudal vein respectively. The agglutination of red blood cells in vitro and in vivo， hemolysis， the rats' general conditions and coagulation markers of rats were observed. Results: PHA could induce agglutination reaction and hemolysis in vitro and in vivo. The rats in experimental group showed the following performance: piloerection， arched， cured up and trembling； but the rats in control group did not show above performance. The fi brinogen of rats in experimental group was obviously lower than that of rats in control group （P＜0.01）； While the prothrombin time， thrombin time， thromboplastin time and international normalized ratio were obviously higher （P＜0.01， P＜0.05）. Conclusions: PHA can induce agglutination reaction in vivo and in vitro； it also can activate coagulation system. Clinical application should pay attention to its' effects on coagulation system.

Phytohemagglutinin （PHA）；Agglutination reaction；Coagulation system；Clinical application

R392-3

A

1004-6879（2016）01-012-03

2015-04-07）

（基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)欄目編輯：陳志宏）