老鸛草的化學(xué)成分研究△

趙銳，郭安軍，李新路，李軍，李洋

(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 研究院，江蘇　南京　210042)

老鸛草又名狼巴巴草、綿綿牛、太陽花等，具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、止瀉痢的功效。2015版《中華人民共和國藥典》規(guī)定老鸛草為牻牛兒苗科植物牻牛兒苗ErodiumstephanianumWilld.、老鸛草GeraniumwilfordiiMaxim.或野老鸛草G.carolinianumL.的干燥地上部分，前者習(xí)稱“長嘴老鸛草”，后兩者習(xí)稱“短嘴老鸛草”[1]。對牻牛兒苗、野老鸛草的化學(xué)成分研究表明其主要成分可分為黃酮類、鞣質(zhì)類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類及一些其他成分，其提取物具有較好的抗病毒、抗氧化及抗炎鎮(zhèn)痛的作用[2]。但目前對其來源之一的老鸛草G.wilfordii化學(xué)成分的研究較少，為了更好地開發(fā)利用這一常用藥材，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對老鸛草體積分?jǐn)?shù)75%乙醇水提取物進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離得到10個(gè)化合物，并根據(jù)理化性質(zhì)和譜學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，分別為β-谷甾醇(1)，柯里拉京(2)，1，2，3，6-四-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖(3)，短葉蘇木酚(4)，原兒茶酸(5)，沒食子酸(6)，對羥基苯甲酸(7)，β-胡蘿卜苷(8)，槲皮素(9)，1，3，6-三-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖(10)。其中化合物3～5，7，10為首次從該植物中分離得到，其化學(xué)成分與牻牛兒苗、野老鸛草具有一定相似性，從化學(xué)成分上證明了三者具有親緣關(guān)系，具有化學(xué)分類學(xué)意義。

1　儀器與材料

X-4型顯微熔點(diǎn)測定儀(北京科儀電光儀器廠，溫度計(jì)未校正)；Bruker DRX-300/500型核磁共振儀(瑞士Bruker公司)；Agilent 1260型高效液相色譜儀(Agilent公司，美國)；AB SCIEX Triple TOF 4600型質(zhì)譜儀(AB公司，美國)；半制備液相(江蘇漢邦)；YMC-Triart perp C-18色譜柱(250 mm×50 mm，10 μm)(YMC公司，日本)；薄層色譜和柱色譜用硅膠(青島海洋化工)；Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Sciences AB公司，瑞典)；液相所用試劑為色譜純，其他均為分析純。

老鸛草藥材采購于江蘇省藥材公司，由江蘇正大天晴藥物研究院李洋博士鑒定為老鸛草GeraniumwilfordiiMaxim.的全草。

2　提取與分離

干燥的老鸛草全草5.0 kg，粉碎，用體積分?jǐn)?shù)75%乙醇水回流提取3次，每次2 h，減壓回收得浸膏，浸膏溫水懸浮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，減壓濃縮后分別得石油醚部位75 g，乙酸乙酯部位200 g。其中乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，共分成6個(gè)組分。所得組分Ⅰ經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯(100∶7)流分得到化合物1(95 mg)，在石油醚-乙酸乙酯(100∶15)流分得到灰白色粉末，經(jīng)Sephadex LH-20純化得化合物2(35 mg)。所得組分Ⅲ經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇(100∶8)流分得淡黃色粉末，經(jīng)Sephadex LH-20純化得化合物3(35 mg)和4(43 mg)；二氯甲烷-甲醇(100∶17)流分得化合物5(27 mg)。所得組分Ⅱ和Ⅳ經(jīng)Sephadex LH-20純化得到4個(gè)流分，分別以制備高效液相色譜(乙腈-0.1%三氟乙酸)梯度洗脫得到化合物6(25 mg)、7(68 mg)、8(17 mg)、9(16 mg)、10(36 mg)。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp 136～137 ℃。Lieberman-Burchard反應(yīng)呈陽性。與β-谷甾醇對照品共薄層，其Rf值一致，且混合后熔點(diǎn)不下降。故鑒定化合物1為β-谷甾醇。

化合物2：白色無定形粉末(甲醇)，mp 216～219 ℃。ESI-MSm/z：633.2[M-H]-。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：6.69(1H，s，H-3)，6.66(1H，s，H-12)，6.36(1H，d，J=2.0 Hz，H-20)，3.98(1H，d，J=1.4 Hz，H-19)，4.97(2H，m，H-16，H-18)，4.46(1H，m，H-17)，4.53(1H，m，H-15a)，4.16(1H，m，H-15b)，7.05(2H，s，H-23，H-27)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：168.5(C-1)，125.4(C-2)，110.2(C-3)，145.2(C-4)，138.2(C-5)，145.3(C-6)，117.2(C-7)，116.7(C-8)，145.6(C-9)，137.7(C-10)，146.0(C-11)，108.3(C-12)，125.5(C-13)，170.1(C-14)，65.0(C-15)，71.6(C-16)，62.5(C-17)，76.2(C-18)，69.5(C-19)，95.0(C-20)，166.7(C-21)，120.6(C-22)，111.0(C-23)，146.4(C-24)，140.4(C-25)，146.4(C-26)，111.0(C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道的柯里拉京基本一致。

化合物3：灰白色無定形粉末(甲醇)，mp 226～228 ℃。Molish反應(yīng)呈陽性。ESI-MSm/z：787.2[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.19(2H，s，2-Gall H-2，6)，7.11(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.09(2H，s，6-Gall H-2，6)，7.02(2H，s，3-Gall H-2，6)，6.19(1H，d，J=8.4 Hz，H-1)，5.49(1H，dd，J=9.6，9.5 Hz，H-2)，5.70(1H，dd，J=8.4，7.9 Hz，H-3)，4.62(1H，d，J=9.4 Hz，H-6a)，4.58(1H，dd，J=7.8，4.4 Hz，H-6b)，4.16(1H，m，H-5)，4.12(1H，d，J=4.8 Hz，H-4)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.5(6-Gall-C7)，165.9(3-Gall-C7)，165.5(2-Gall-C7)，164.8(1-Gall-C7)，146.5(1，2，3，6-Gall-C3，5)，140.4(1-Gall-C4)，139.8(2-Gall-C4)，139.4(3，6-Gall-C4)，119.9(6-Gall-C1)，119.8(3-Gall-C1)，118.9(2-Gall-C1)，118.3(1-Gall-C1)，109.8(1-Gall-C2，6)，109.7(2-Gall-C2，6)，109.6(3-Gall-C2，6)，109.5(6-Gall-C2，6)，92.7(Glc-C1)，71.5(Glc-C2)，75.5(Glc-C3)，68.5(Glc-C4)，75.2(Glc-C5)，63.9(Glc-C6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的1，2，3，6-四-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖基本一致，為首次從該植物中分離得到。

化合物4：黃色針晶(甲醇)，mp 290～291 ℃。ESI-MSm/z：247.1[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.34(1H，s，H-7)，3.26(2H，t，J=3.8 Hz，H-10)，3.19(2H，t，J=3.8 Hz，H-9)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：149.3(C-2)，115.5(C-3)，140.1(C-3a)，145.0(C-4)，141.3(C-5)，144.2(C-6)，108.0(C-7)，113.3(C-7a)，160.5(C-8)，23.8(C-9)，33.0(C-10)，195.4(C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的短葉蘇木酚基本一致，為首次從該植物中分離得到。

化合物5：白色針晶(甲醇)，mp 202～205 ℃。溴甲酚綠反應(yīng)呈陽性，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性。ESI-MSm/z：152.2[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：6.85(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.44(1H，dd，J=8.2，1.5 Hz，H-6)，7.46(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：168.5(-OCH2)，123.1(C-2)，116.8(C-6)，114.7(C-5)，151.1(C-4)，145.2(C-3)，122.3(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的原兒茶酸基本一致，為首次從該植物中分離得到。

化合物6：無色針晶(甲醇)，mp 231～233 ℃。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：12.03(1H，s，-COOH)，9.45(2H，s，4，6-OH)，8.48(1H，s，5-OH)，7.16(2H，s，H-3，7)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：167.7(C-1)，146.1(C-4，6)，138.7(C-5)，122.2(C-2)，110.3(C-3，7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的沒食子酸基本一致。

化合物7：白色無定形粉末(甲醇)，mp 214～217 ℃。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.79(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.82(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.8(COOH)，161.5(C-4)，132.0(C-2，6)，115.4(C-3.5)，121.2(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的對羥基苯甲酸基本一致，為首次從該植物中分離得到。

化合物8：白色無定形粉末(甲醇)，mp 282～283 ℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，與β-胡蘿卜苷對照品混合熔點(diǎn)不下降，共TLC的Rf值一致，故鑒定為β-胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物9：黃色針晶(甲醇)，mp 315～316 ℃。ESI-MSm/z：303.2[M+H]+。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.76(1H，d，J=1.5 Hz，H-2′)，7.66(1H，dd，J=9.0，1.5 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=9.0 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.24(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：149.0(C-2)，138.1(C-3)，176.4(C-4)，159.2(C-5)，99.7(C-6)，166.2(C-7)，94.8(C-8)，162.5(C-9)，104.4(C-10)，123.2(C-1′)，116.5(C-2′)，145.8(C-3′)，145.0(C-4′)，116.3(C-5′)，122.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的槲皮素基本一致。

化合物10：白色無定形粉末(甲醇)，mp 213～215 ℃。Molish反應(yīng)呈陽性。ESI-MSm/z：635[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.15(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.09(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.07(2H，s，6-Gall H-2，6)，5.99(1H，d，J=8.3 Hz，H-1)，5.25(1H，dd，J=9.2，9.0 Hz，H-2)，5.74(1H，dd，J=8.3，7.9 Hz，H-3)，4.48(1H，m，H-6a)，4.58(1H，m，H-6b)，3.98(1H，m，H-5)，3.93(1H，m，H-4)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.5(6-Gall-C7)，165.9(3-Gall-C7)，164.8(1-Gall-C7)，146.5(3，6-Gall-C3，5)，146.0(1-Gall-C3，5)，140.4(1-Gall-C4)，139.4(3，6-Gall-C4)，119.9(6-Gall-C1)，119.8(3-Gall-C1)，118.3(1-Gall-C1)，109.8(1-Gall-C2，6)，109.6(3-Gall-C2，6)，109.5(6-Gall-C2，6)，93.5(Glc-C1)，71.1(Glc-C2)，76.0(Glc-C3)，64.1(Glc-C4)，75.5(Glc-C5)，63.9(Glc-C6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的1，3，6-三-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖基本一致，為首次從該植物中分離得到。

4　討論

本研究從老鸛草的75%乙醇水提取物的乙酸乙酯部位中分離得到10個(gè)化合物，主要為酚酸類、黃酮類化合物，與此前老鸛草成分研究報(bào)道一致，為進(jìn)一步闡明老鸛草的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了依據(jù)。也從化學(xué)成分上證明了牻牛兒苗、老鸛草以及野老鸛草三者具有親緣關(guān)系，具有化學(xué)分類學(xué)意義。但老鸛草的正丁醇及水部位的化學(xué)成分仍有待進(jìn)一步研究。

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