Glypican-3和CD34免疫組化染色在肝細(xì)胞癌與良性肝細(xì)胞性病變鑒別診斷中的價值

李麗暉，許錦文

（開平市中心醫(yī)院，廣東 開平529300）

肝細(xì)胞癌是常見的惡性腫瘤，患者通常在晚期出現(xiàn)臨床病變，喪失了最佳的治療時機(jī)［1］。因此，對患者行早期診斷和治療具有重要的臨床價值。在早期診斷中，免疫組化方式具有較高的診斷率，Glypican－3（磷脂酸肌醇蛋白聚糖－3）與HCC（肝細(xì)胞癌）相關(guān)，且患者體內(nèi)呈現(xiàn)高表達(dá)。CD34可以清晰地顯現(xiàn)腫瘤性毛細(xì)血管化的肝竇結(jié)構(gòu)。但是肝細(xì)胞癌與良性肝細(xì)胞性病變的免疫組化鑒別研究相對較少。本研究選擇在我院接受治療的150例患者，探討Glypican－3和CD34免疫組化染色的臨床診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2003年1月至2017年6月在我院接受治療的150例肝病患者，男性患者90例，女性患者60例，年齡39～69歲，平均年齡 （58.2±2.1）歲。其中肝細(xì)胞癌患者63例，男性40例，女性23例，年齡40～68歲，平均年齡（58.0±2.0）歲。良性肝細(xì)胞性病變患者87例，其中肝硬化患者20例，肝炎患者56例，良性腫瘤患者11例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)；②同意參與本研究且簽署知情同意書。所有患者均進(jìn)行Glypican－3和CD34免疫組化染色。

1.2 方法

1.2.1 Glypican－3免疫組化 采集患者清晨空腹血5 mL，4 000 r／min離心處理5 min，分離后保存在－86℃環(huán)境下。Glypican－3試劑盒 （BioMosaics公司生產(chǎn)），檢測前搖勻，將Glypican－3標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品置于96孔微孔中，按照試劑盒說明書，制作 6個濃度， 分別為 0、 50、 150、 450、 1 350以及 4 050 ρg／mL。通過線性計算，確定濃度。

1.2.2 CD34免疫組化 將標(biāo)本置于4%中性甲醛溶液中，常規(guī)石蠟包埋，制作4 μm的切片，采用免疫組化染色，經(jīng)過微波修復(fù)抗原，一抗在4℃下孵育，二抗在37℃下孵育30 min，運(yùn)用二氨基聯(lián)苯胺底物顯色。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) CD34陽性顯示為微血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色染色，按照血管分布，分為局灶型、斑片型以及彌漫型。局灶型

為血管圍繞纖維瘢痕兩側(cè)分布，斑片型為血管呈現(xiàn)片狀分布，彌漫型為均勻分布。鏡下隨機(jī)選取5個中倍視野 （×200），每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞占細(xì)胞數(shù)的百分比。0分：陽性細(xì)胞比例≤5%；1分：陽性細(xì)胞比例在6%~25%之間；2分：陽性細(xì)胞比例占26%~50%之間；3分：陽性細(xì)胞比例占51%~75%之間；4分：陽性細(xì)胞比例超過75%。陽性著色計分：0分：無色；1分：淡黃色；3分：棕黃色。兩項(xiàng)目相加計算陽性情況：相加＜2分為 （－）；相加2~3分為 （＋）；相加 4~5分為 （＋＋）； 相加 6~7分為 （＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料和計量資料分別采用n（%）和x±s表示，數(shù)據(jù)檢驗(yàn)分別用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清Glypican－3表達(dá)水平 肝細(xì)胞癌患者的Glypican－3表達(dá)水平為明顯高于其他良性病變 （P＜0.05），見表1。Glypican－3表達(dá)敏感度為 84.1%，特異度為 84.1%，陽性預(yù)測值為52.4%， 陰性預(yù)測值為 93.7%， 準(zhǔn)確度為 77.8%。

表1 患者的血清Glypican－3表達(dá)水平

2.2 CD34的臨床病理表現(xiàn) 肝細(xì)胞癌患者的CD34陽性表達(dá)水平顯著高于良性肝細(xì)胞性病變患者 （P＜0.05）。見表2。

表2 CD34的臨床病理表現(xiàn)情況 ［n（%）］

3 討論

肝細(xì)胞癌屬于惡性腫瘤之一，病死率相對較高，在對患者的診斷及治療中，采用早期診斷方式具有重要的價值。Glypican－3以及CD34表達(dá)具有較好的診斷效果，在對肝細(xì)胞癌患者的診斷中，采用該診斷方式，可以準(zhǔn)確地診斷患者的臨床病變，具有較高的應(yīng)用價值［2］。但是臨床上對其鑒別診斷價值的研究相對較少，因而探討其臨床診斷價值具有重要的意義。

本研究結(jié)果顯示，肝細(xì)胞癌患者的Glypican－3表達(dá)水平為（1 326.8 ± 121.4） ρg／mL， 明顯高于其他良性病變， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），表明在肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)Glypican－3的表達(dá)水平明顯高于良性肝細(xì)胞性病變，主要是由于Glypican－3屬于膜糖蛋白，在氨基端面出現(xiàn)可溶性片段可以被檢測出來，對于血清的檢測具有較高的診斷價值。有研究［3］顯示，Glypican－3在肝炎等良性細(xì)胞性病變的鑒別和診斷中具有較好的診斷效果，主要是由于該物質(zhì)在良性細(xì)胞性病變患者中表達(dá)率相對較低，因而可通過免疫組化染色方式來確定患者的臨床病變。還有研究［4］指出，Glypican－3對于肝細(xì)胞癌具有較高的診斷價值，主要是由于該物質(zhì)在肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)具有較高的表達(dá)率，可以清晰反映患者體內(nèi)的病變，從而可以提高診斷效果。

本研究中，Glypican－3表達(dá)敏感度為84.1%，特異度為84.1%，陽性預(yù)測值為52.4%，陰性預(yù)測值為93.7%，準(zhǔn)確度為77.8%，表明在對肝細(xì)胞癌患者的檢測中，Glypican－3的診斷率相對較高，主要是由于在對患者的檢測中，Glypican－3可以作為敏感的腫瘤標(biāo)志，通過動態(tài)的監(jiān)測，可以提高對患者的診斷效果。有研究［5］指出，Glypican-3具有較高的表達(dá)敏感度和特異度，并且在對124例患者的臨床診斷中，其敏感度為96%，特異度為88%。還有研究［6］指出，在對肝細(xì)胞癌患者的臨床診斷中，Glypican－3具有較高的敏感度和準(zhǔn)確度，其準(zhǔn)確度高達(dá)85%左右，可為患者的臨床診斷提供科學(xué)的依據(jù)。

本研究中，肝細(xì)胞癌患者的CD34陽性表達(dá)水平顯著高于良性肝細(xì)胞性病變患者 （P<0.05）。在肝細(xì)胞癌患者的臨床表現(xiàn)中，其存在高度異型增生結(jié)節(jié)，在臨床診斷中，難以與常規(guī)的病變進(jìn)行有效的區(qū)分，在此情況下，正常肝組織、慢性肝炎以及肝硬化等表現(xiàn)均為非腫瘤性，難以被CD34染色，而肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)出現(xiàn)新生毛細(xì)血管網(wǎng)，通過CD34染色，可以較為清晰地顯現(xiàn)出來，具有明顯的特征。有研究［7］指出，CD34在良性細(xì)胞性病變中缺乏診斷價值，主要是由于在良性病變中難以進(jìn)行CD34有效染色，從而無法對疾病進(jìn)行診斷；而在對肝細(xì)胞癌患者的診斷中，CD34可以清晰地染色，并且表達(dá)出來，可以有效提高對患者疾病的診斷。

綜上所述，在對肝細(xì)胞癌與良性肝細(xì)胞性病變患者的診斷中，Glypican－3和CD34免疫組化染色具有較高的診斷價值，可以為患者的臨床診斷和治療提供依據(jù)。

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