豬場獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室的建立及要求

張文通 ，魏 鳳 ，李 峰 ，王金良 ，苗立中 ，沈志強(qiáng) ＊，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

隨著規(guī)模化養(yǎng)殖加速發(fā)展，豬病變得極為復(fù)雜，僅靠傳統(tǒng)診斷變得極為困難，實(shí)驗(yàn)室診斷就顯得極為重要。目前從事豬病實(shí)驗(yàn)室檢測服務(wù)的單位主要有：農(nóng)業(yè)高校或科研院所、飼料廠或獸藥廠及剛興起的“第三方”專業(yè)檢測機(jī)構(gòu)等[1-3]。這些服務(wù)機(jī)構(gòu)提供的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在準(zhǔn)確性上存疑，或者不能對養(yǎng)豬場疫病防控提供切實(shí)可行的防控方案，這兩方面缺陷導(dǎo)致不少養(yǎng)豬場對這些服務(wù)機(jī)構(gòu)的檢測不認(rèn)可。規(guī)?；B(yǎng)豬場在內(nèi)部建設(shè)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室已逐漸興起。本文對如何建立規(guī)范的豬場獸醫(yī)診斷室做了如下綜述。

1 豬場獸醫(yī)診斷室選址

在養(yǎng)豬場內(nèi)部，應(yīng)選址在遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū)、位于生產(chǎn)區(qū)下風(fēng)向、排污設(shè)施下游的地方[4]；若在養(yǎng)豬場外部，首先應(yīng)考慮遠(yuǎn)離附近養(yǎng)殖區(qū)域，還應(yīng)考慮遠(yuǎn)離居民區(qū)及飲用水源區(qū)域。

2 豬場獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建筑設(shè)置

豬場獸醫(yī)診斷室一般應(yīng)包括：解剖間，試劑室，會(huì)議室，檔案室，實(shí)驗(yàn)室等五部分組成。實(shí)驗(yàn)室可細(xì)分為：細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室，病毒實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室等。如果實(shí)驗(yàn)室要開展PCR檢測病原工作，為防止氣溶膠污染則需將PCR室進(jìn)一步劃分配液區(qū)、擴(kuò)增區(qū)及電泳區(qū)。

3 豬場獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備

豬場獸醫(yī)診斷室儀器設(shè)備包括：解剖臺(tái)、超凈工作臺(tái)或生物安全柜、高壓滅菌鍋、離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、冷藏冰箱、冷凍冰柜、試劑柜、組織搗碎儀、精密天平、pH計(jì)、光學(xué)顯微鏡、試驗(yàn)操作臺(tái)、PCR儀、電泳儀、酶標(biāo)儀、檔案柜等[5]。

4 豬場獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室人員配備

豬場獸醫(yī)診斷室人員必須接受專業(yè)的教育或培訓(xùn)，懂獸醫(yī)知識(shí)，能夠分析檢測結(jié)果，并將結(jié)果用于豬病防控指導(dǎo)。豬場獸醫(yī)診斷室人員必須具有較強(qiáng)的生物安全意識(shí)，防止病原傳播擴(kuò)散，防止病原對自己的侵襲[6]。豬場獸醫(yī)診斷室人員必須愛崗敬業(yè)、不怕臟不怕累。

5 豬場獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作內(nèi)容

5.1 細(xì)菌分離及鑒定

豬場存在比較常見的豬細(xì)菌病有：豬大腸桿菌、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬沙門氏菌及豬傳染性胸膜肺炎等。首先是無菌采集適于細(xì)菌分離的病料；選擇合適的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；根據(jù)其特性進(jìn)行鏡檢、菌落形態(tài)觀察、生化試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)及PCR方法等進(jìn)行鑒定；挑取單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。

5.2 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)就是為了找到能夠?qū)Ρ緢黾?xì)菌敏感的治療藥物，避免藥物濫用。通常使用紙片擴(kuò)散法做藥敏試驗(yàn)。其原理是將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。

5.3 血清抗體測定試驗(yàn)

豬場中測血清抗體主要有兩方面用途：一是為了淘汰野毒感染（比如豬偽狂犬病、豬口蹄疫等）豬只；另一方面是為了評價(jià)疫苗免疫效果。血清抗體測定主要使用的方法是正向間接血凝、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EL ISA）、凝集試驗(yàn)等。其中ELISA方法用途最為廣泛。豬場在使用ELISA方法測定血清抗體時(shí)，一定要選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒。目前國家在有關(guān)豬病方面，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)欠缺，所以無法對豬病診斷試劑盒進(jìn)行有效規(guī)范管理。豬病診斷試劑盒領(lǐng)域市場上存在魚龍混雜局面，所以在選擇豬病診斷試劑盒時(shí)一定要選擇有實(shí)力有信譽(yù)的廠家。操作人員按照試劑盒提供的說明書操作即可。

5.4 病原分子生物學(xué)鑒定

豬病進(jìn)行病原鑒定時(shí)，使用分子生物學(xué)方法進(jìn)行快速鑒定，已獲得業(yè)內(nèi)專業(yè)人士普遍認(rèn)可。分子生物學(xué)方法用途最廣泛的是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）或反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）。該方法一般先從組織病料中提取病原DNA或RNA，然后利用PCR儀器進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用電泳儀進(jìn)行核酸電泳。如果條件好一點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)室也可選擇熒光定量PCR儀器進(jìn)行PCR擴(kuò)增，無需核酸電泳。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收，送專業(yè)測序機(jī)構(gòu)進(jìn)行測序，可獲得病原基因信息，進(jìn)而對豬場病原基因型進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果可用于追蹤病原來源或選擇合適菌株或毒株疫苗。

5.5 豬用生物制品的制造

有條件的豬場獸醫(yī)診斷室可開展豬病高免血清和自家苗制備試驗(yàn)。豬病高免血清可用于豬病緊急接種治療。制備高免血清應(yīng)選用近期有過典型臨床表現(xiàn)且明顯康復(fù)母豬。制備好的高免血清需進(jìn)行無菌試驗(yàn)或安全檢驗(yàn)，然后才能在豬場推廣使用。

自家苗制備步驟：無菌采取病死豬的淋巴結(jié)、肺臟、脾、腎等病變器官；加適量生理鹽水，用高速搗碎機(jī)制成組織勻漿，雙層無菌紗布過濾；濾液再用生理鹽水作適當(dāng)稀釋，最后加入經(jīng)適當(dāng)稀釋的甲醛，置37 ℃條件下滅活；滅活完畢，取出置于4 ℃下，保存待用。在投入使用前，對自制的自家組織苗，進(jìn)行安全性和免疫效果的生物學(xué)試驗(yàn)。

6 豬場獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

豬場獸醫(yī)診斷室應(yīng)制定一系列的制度，比如包括生物安全措施制度、人員崗位職責(zé)制度、儀器使用制度、試劑使用制度、實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生制度、試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作制度、病豬尸體無害化處理制度等的制定。檢測人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行登記，進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)要做好試驗(yàn)記錄及實(shí)驗(yàn)報(bào)告，使用儀器及領(lǐng)用試劑應(yīng)登記，試驗(yàn)結(jié)束要做好清場記錄等。檢測人員養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣將有助于實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理。

7 小結(jié)

獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的規(guī)模大小，應(yīng)根據(jù)各豬場實(shí)際情況而定。但要堅(jiān)持一點(diǎn)，務(wù)必使檢測項(xiàng)目與解決豬場實(shí)際需要解決問題相適應(yīng)，也要根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整檢測項(xiàng)目。成立實(shí)驗(yàn)室后需經(jīng)常開展對外交流活動(dòng)，比如派檢驗(yàn)員進(jìn)行業(yè)務(wù)培訓(xùn)或交流等，提高檢測水平。