46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑的高效液相色譜分析

郭菲菲

（天津綠源生物藥業(yè)有限公司，天津300270）

硝磺草酮是一種能夠抑制羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)的芽前和苗后廣譜選擇性除草劑，可有效防治主要的闊葉草和一些禾本科雜草。其分析條件可以采用液相色譜分析[1]。異丙甲草胺是一種廣譜性播后苗前除草劑。可有效的防除一年生禾本科雜草及部分雙子葉雜草。其分析條件可以采用液相色譜分析。莠去津是玉米田中使用多年的三氯苯類除草劑，可防除多種一年生闊葉雜草[2]。其分析條件可以采用液相色譜分析。硝磺草酮、異丙甲草胺和莠去津復(fù)配制劑防效明顯高于單劑，可有效防治玉米田中一年生闊葉雜草雜草和禾本科雜草，具有速度快、殺草譜廣等特點(diǎn)[2]，目前關(guān)于46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑產(chǎn)品的高效液相色譜的分析方法還未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行分析，方法操作簡(jiǎn)便、分析速度快，精密度和準(zhǔn)確度均符合分析要求，可以滿足常規(guī)分析和生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和儀器

乙腈：色譜級(jí)；冰乙酸：分析純；水：新蒸二次蒸餾水；硝磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品：已知含量≥95.0%，沈陽化工研究院；異丙甲草胺標(biāo)準(zhǔn)品：已知含量≥96.0%，上海農(nóng)藥研究所；莠去津標(biāo)準(zhǔn)品：已知含量≥97.0%，北京勤誠(chéng)亦信科技開發(fā)有限公司。

高效液相色譜儀（P-1010）：具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)；色譜柱：250 mm×4.6 mm（i.d.）不銹鋼；內(nèi)裝C18、5μm填充物，超聲波清洗器；分析天平（梅特勒ME204E）；過濾器：為0.45μm；微量注射器：50μL；定量進(jìn)樣器：20μL。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相為（乙腈）：（水）：（冰乙酸）=60：40：0.1經(jīng)濾膜過濾，并進(jìn)行脫氣；流速：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：208 nm；進(jìn)樣體積：20 μL；保留時(shí)間：硝磺草酮約為3.8 min，莠去津約為6.2 min，異丙甲草胺約為13.8 min。硝磺草酮、莠去津和異丙甲草胺的高效液相色譜圖見圖1、2。外標(biāo)法計(jì)算。

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

a）準(zhǔn)確稱取硝磺草酮標(biāo)樣0.06 g（精確至0.0002 g）置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻備用。

b）莠去津標(biāo)樣0.1 g（精確至0.0002 g），異丙甲草胺標(biāo)樣0.1 g（精確至0.0002 g），置于50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管各移取上述兩種溶液5mL置于另一個(gè)50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣前用0.45μm過濾器過濾。

圖1 硝磺草酮、莠去津和異丙甲草胺標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑的典型高效液相色譜圖

1.3.2 試樣溶液的制備

準(zhǔn)確稱取試樣約0.5 g（精確至0.0002 g），置于50mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取此溶液5mL置于另一個(gè)50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣前用0.45μm過濾器過濾。

1.3.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰兩針的相對(duì)響應(yīng)值變化不大于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

試樣中莠去津或異丙甲草胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1（%）計(jì)算，硝磺草酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2（%）計(jì)算：

式中：

A1——標(biāo)樣溶液中異丙甲草胺（或莠去津）的峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中異丙甲草胺（或莠去津）的峰面積的平均值；

A3——標(biāo)樣溶液中硝磺草酮峰面積的平均值；

A4——試樣溶液中硝磺草酮峰面積的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，單位為g；

m2——試樣的質(zhì)量，單位為g；

w——標(biāo)樣中硝磺草酮（或異丙甲草胺或莠去津）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相比例的選擇

為了實(shí)現(xiàn)硝磺草酮、莠去津、異丙甲草胺的有效分離，先后試驗(yàn)了（乙腈）：（水）：（冰乙酸）=60：40：0.1、（乙腈）：（水）：（冰乙酸）=80：20：0.1、（甲醇）：（水）：（冰乙酸）=60：40：0.1的多種流動(dòng)相配比進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，最后確定（乙腈）：（水）：（冰乙酸）=60：40：0.1、為試驗(yàn)的流動(dòng)相。硝磺草酮、莠去津和異丙甲草胺分離效果好，峰型對(duì)稱，保留時(shí)間適中，可以滿足分析要求[3]。

2.2 波長(zhǎng)的選擇

在190～310nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)試樣進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)208nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，硝磺草酮、莠去津和異丙甲草胺具有較強(qiáng)吸收，最終選擇208nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[3]。

2.3 方法的線性關(guān)系測(cè)定

圖3 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮濟(jì)中硝磺草酮線性關(guān)系曲線

線性關(guān)系是稱取不同量的標(biāo)樣（5組）稀釋至相同的體積進(jìn)行分析，得到響應(yīng)值，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，與其相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性關(guān)系曲線（見圖3、4、5）。得到硝磺草酮在0.63～5.47mg/50 mL的質(zhì)量濃度內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=5.4131x-0.1817，R2=0.9999；莠去津在2.15～17.90 mg/50 mL的質(zhì)量濃度內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=6.4982x-0.7514，R2=0.9999；異丙甲草胺在2.08～18.12 mg/50 mL的質(zhì)量濃度內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=1.6316x-0.1066，R2=0.9998[4]。

圖4 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮濟(jì)中莠去津線性關(guān)系曲線

圖5 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮濟(jì)中異丙草胺線性關(guān)系曲線

2.4 方法精密度測(cè)定

選取一批46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑樣品，從稱樣開始，按上述色譜操作條件獨(dú)立平行測(cè)定8次，考察方法的精密度（見表1）3種成分的變異系數(shù)分別為1.44,0.83,0.83，可見該方法精密度較好。

2.5 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

稱取5個(gè)已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑試樣，分別加入一定量的硝磺草酮、異丙甲草胺和莠去津標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜操作條件的分析方法分別測(cè)定其中的硝磺草酮、異丙甲草胺和莠去津質(zhì)量并計(jì)算回收率，試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2、3、4。

3 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)表明：本方法可以同時(shí)測(cè)定46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑的3種有效成分，方法操作簡(jiǎn)單、快速、分離效果好，精密度和準(zhǔn)確度高，符合定量分析要求，可以滿足生產(chǎn)企業(yè)中的質(zhì)量控制分析。

表1 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑有效成分測(cè)定方法精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑中硝磺草酮測(cè)定方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)（硝磺草酮標(biāo)樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.6%，試樣中硝磺草酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)6.2%）

表3 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑中異丙甲草胺測(cè)定方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)（異丙甲草胺標(biāo)樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.8%，試樣中異丙甲草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.1%)

表4 46%硝磺·異甲·莠可分散油懸浮劑中莠去津測(cè)定方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)（莠去津標(biāo)樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%，試樣中莠去津質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.2%）