沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成及其抗氧化活性

趙二勞，徐 芬，尹愛萍，楊 潔，郝麗琴(.忻州師范學(xué)院 化學(xué)系，山西 忻州 034000； .重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局，重慶 40000)

沙棘(HippophaerhamnoidesL.)為胡頹子科沙棘屬小喬木或灌木，又稱酸刺、醋柳，在我國(guó)主要分布于華北、西北、東北和西南等10多個(gè)省區(qū)。我國(guó)約有沙棘林140萬(wàn)hm2，占世界沙棘總面積的95%以上，其資源極為豐富，素有“沙棘王國(guó)”之稱[1-2]。沙棘果罕有病蟲害侵襲和農(nóng)藥污染，是一種無(wú)污染原生態(tài)綠色漿果。現(xiàn)代科學(xué)研究表明，沙棘果與沙棘籽富含蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸、多種維生素以及微量元素等對(duì)人體有益的功能活性成分和營(yíng)養(yǎng)成分，具有獨(dú)特的保健功能和藥用價(jià)值，享有“綠色黃金”的美譽(yù)[3-4]。沙棘果油與沙棘籽油是沙棘果中天然功能成分的濃縮物，具有極高的食用和藥用價(jià)值[5-7]，被廣泛應(yīng)用于食品、飲料、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域。目前，對(duì)沙棘果與沙棘籽的研究，多集中于沙棘果與沙棘籽活性成分提取、功能以及沙棘果油與沙棘籽油的提取上[2,8-9]，有關(guān)沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成的研究報(bào)道不多，特別是沙棘果油與沙棘籽油抗氧化活性的研究鮮有報(bào)道?；诖?，本文重點(diǎn)研究沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成，并以清除DPPH·法與·OH法評(píng)價(jià)沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性。為人們正確認(rèn)識(shí)沙棘果油、沙棘籽油的保健功能特性、合理應(yīng)用以及相關(guān)保健產(chǎn)品的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

沙棘果油、沙棘籽油購(gòu)于山西省山地陽(yáng)光食品有限公司(由岢嵐縣產(chǎn)沙棘果(籽)經(jīng)超臨界CO2萃取而得)。1，1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)(Sigma 公司)；2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)、氫氧化鉀、無(wú)水硫酸鈉、硫酸亞鐵、水楊酸、雙氧水、甲醇、異辛烷、無(wú)水乙醇等，均為分析純。試驗(yàn)用水為二次去離子水。

7890A氣相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；SP-723分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；AL204型電子分析天平，梅特勒-托利多(上海)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成分析

沙棘果油與沙棘籽油的甲酯化：稱取約60 mg沙棘油樣，置于10 mL具塞試管中，依次加入5 mL異辛烷，0.2 mL 2.0 mol/L的氫氧化鉀甲醇溶液，塞緊試管塞，劇烈振搖1～2 min，至試管內(nèi)混合溶液澄清，加入1.0 g一水合硫酸氫鈉，劇烈振搖0.5 min，靜置，上清液稀釋40倍后，進(jìn)行氣相色譜分析。

氣相色譜分析條件：SPTM-2560色譜柱(100 m×0.25 mm×0.2 μm)；升溫程序?yàn)橹跏紲囟?0℃，保持1 min，以30℃/min上升到140℃，保持5 min，再以2℃/min上升到240℃，保持12 min；載氣為氮?dú)?，流? mL/min；氫氣流速45 mL/min；空氣流速450 mL/min；氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測(cè)器溫度260℃；進(jìn)樣量2 μL，不分流進(jìn)樣。

分析方法：通過(guò)比較脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品與樣品甲酯保留時(shí)間，確定樣品沙棘果油與沙棘籽油的脂肪酸組成，采用面積歸一化法計(jì)算其脂肪酸含量。

1.2.2 沙棘果油與沙棘籽油抗氧化活性測(cè)定

試驗(yàn)以合成抗氧化劑BHT作陽(yáng)性對(duì)照，采用清除DPPH·法與·OH法評(píng)價(jià)沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性，并利用半清除率(IC50)定量描述比較沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性[10]。

1.2.2.1 沙棘果油與沙棘籽油對(duì)DPPH·清除率的測(cè)定

[11-12]的方法，并稍作修改。準(zhǔn)確吸取2.0 mL質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL的DPPH乙醇溶液置于10 mL比色管中，再加入一定量沙棘果油或沙棘籽油，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，室溫下避光反應(yīng)40 min后，用分光光度計(jì)在517 nm處測(cè)定其吸光度，按下式計(jì)算DPPH·清除率。

清除率=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

式中：A0為未加沙棘油體系的吸光度；Ai為加入沙棘油后體系的吸光度；Aj為僅沙棘油本底的吸光度。

同法測(cè)定不同質(zhì)量濃度BHT溶液對(duì)DPPH·清除率。

1.2.2.2 沙棘果油與沙棘籽油對(duì)·OH清除率的測(cè)定

試驗(yàn)利用Fenton反應(yīng)產(chǎn)生·OH，采用水楊酸法測(cè)定沙棘油對(duì)·OH的清除率。參考文獻(xiàn) [12-13] 的方法，并稍作修改。在10 mL比色管中，依次加入1.0 mL濃度為7.55 mmol/L硫酸亞鐵溶液，1.0 mL濃度為7.50 mmol/L水楊酸溶液，一定量沙棘油，0.5 mL 0.3%的雙氧水，乙醇定容至刻度，50℃水浴反應(yīng)30 min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在510 nm處測(cè)定其吸光度為A1，同法操作，以不加沙棘油溶液體系為空白對(duì)照測(cè)定其吸光度為A0；考慮沙棘油溶液本身吸光度可能對(duì)結(jié)果的影響，測(cè)定以不加水楊酸溶液體系的吸光度為A2。按下式計(jì)算沙棘油對(duì)·OH的清除率。

清除率=[1-(A1-A2)/A0]×100%

同法測(cè)定不同質(zhì)量濃度BHT溶液對(duì)·OH清除率。

2 結(jié)果與討論

2.1 沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成及含量

按試驗(yàn)方法對(duì)沙棘果油與沙棘籽油脂肪酸組成及含量進(jìn)行分析，結(jié)果見表1。

由表1可知，沙棘果油中檢出11種脂肪酸，主要為棕櫚油酸(35.945%)、棕櫚酸(34.108%)、油酸(18.357%)和亞油酸(6.198%)；沙棘籽油中檢出8種脂肪酸，主要為亞油酸(38.958%)、亞麻酸(29.327%)、油酸(20.859%)和棕櫚酸(7.659%)?？梢姡臣秃蜕臣延椭兄舅峤M成及含量有明顯差異。沙棘果油中飽和脂肪酸含量為37.50%，沙棘籽油中飽和脂肪酸含量為10.035%，沙棘果油中飽和脂肪酸含量約是沙棘籽油的3.7倍。沙棘果油不飽和脂肪酸含量為62.501%，沙棘籽油不飽和脂肪酸含量為89.965%，沙棘籽油不飽和脂肪酸含量明顯高于沙棘果油的。油脂中的不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比值越大，越有利于降低血液中膽固醇和心臟病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[11,14]。沙棘籽油該比值為8.97，沙棘果油該比值為1.67，沙棘籽油不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比值遠(yuǎn)高于沙棘果油的。由表1也可知，沙棘果油和沙棘籽油中亞油酸和亞麻酸含量差異較大，亞油酸和亞麻酸是人體的兩種必需脂肪酸。研究[15]表明，亞油酸具有抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低血脂、防治糖尿病、預(yù)防心腦血管疾病等多種生物活性；亞麻酸則具有抗癌、抗凝血、抗炎、降血脂、增強(qiáng)免疫力、提高智力、延緩腦細(xì)胞衰老、促進(jìn)嬰幼兒大腦發(fā)育、預(yù)防老年性癡呆等藥理作用?？梢?，沙棘果油與沙棘籽油均具有保持、促進(jìn)人體健康的功效，沙棘籽油更具優(yōu)勢(shì)。

表1 沙棘籽油與沙棘果油脂肪酸組成及含量 %

2.2 沙棘果油與沙棘籽油對(duì)DPPH·清除率(見圖1)

由圖1可知，沙棘果油、沙棘籽油和BHT對(duì)DPPH·清除率都隨其質(zhì)量濃度的增加而增大，并呈一定的量效關(guān)系。沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除DPPH·的IC50分別為25.68、17.29 μg/mL和27.61 μg/mL。表明沙棘果油與沙棘籽油對(duì)DPPH· 的清除能力都強(qiáng)于合成抗氧化劑BHT，即沙棘果油與沙棘籽油均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性高于沙棘果油。

圖1 沙棘果油、沙棘籽油和BHT對(duì)DPPH·的清除率

2.3 沙棘果油與沙棘籽油對(duì)·OH清除率(見圖2)

圖2 沙棘果油、沙棘籽油和BHT對(duì)·OH的清除率

由圖2可知，沙棘果油、沙棘籽油和BHT對(duì)·OH 清除率都隨其質(zhì)量濃度的增加而增大，并呈一定的量效關(guān)系。沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除·OH的IC50分別為29.32、25.48 μg/mL和33.60 μg/mL。表明沙棘果油與沙棘籽油對(duì)·OH的清除能力都強(qiáng)于合成抗氧化劑BHT，即沙棘果油與沙棘籽油均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性強(qiáng)于沙棘果油。

自由基具有很強(qiáng)的活性，正常情況下，生命機(jī)體內(nèi)自由基處于穩(wěn)定平衡狀態(tài)，但某些狀態(tài)下會(huì)產(chǎn)生過(guò)量的自由基。過(guò)量的自由基會(huì)氧化損傷機(jī)體內(nèi)糖類、氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)和脂類等大分子，使人體組織細(xì)胞壞死或突變，導(dǎo)致機(jī)體衰老或引起腫瘤等諸多疾病的發(fā)生和發(fā)展。沙棘果油與沙棘籽油能有效清除自由基。

3 結(jié) 論

通過(guò)氣相色譜分析，沙棘果油中檢出11種脂肪酸，主要含有棕櫚油酸(35.945%)、棕櫚酸(34.108%)、油酸(18.357%)和亞油酸(6.198%)，不飽和脂肪酸含量為62.501%。沙棘籽油中檢出8種脂肪酸，主要含有亞油酸(38.958%)、亞麻酸(29.327%)、油酸(20.859%)和棕櫚酸(7.659%)，不飽和脂肪酸含量為89.965%?？寡趸囼?yàn)表明，沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除DPPH·的IC50分別為25.68、17.29 μg/mL和27.61 μg/mL，清除·OH 的IC50分別為29.32、25.48 μg/mL和33.60 μg/mL。表明沙棘籽油與沙棘果油均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性強(qiáng)于沙棘果油。

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