非小細(xì)胞肺癌胸腔積液細(xì)胞塊與組織學(xué)ALK檢測的效果對比

徐東來

（撫順礦務(wù)局總醫(yī)院病理科，遼寧 撫順 113008）

當(dāng)前，我國對于肺癌的治療方法多樣并日漸成熟，在臨床的應(yīng)用實(shí)踐中，多針對絡(luò)氨酸激酶抑制劑和淋巴瘤激酶進(jìn)行組合的基因檢測[1]，其檢測的類型多樣，有各類的組織學(xué)樣本，脫落的細(xì)胞和血液的清樣等。同時(shí)，很多患者在年齡、身體狀態(tài)等方面存在著一定的不同，其樣本存在諸多差異，對于肺癌的個(gè)體化檢測來說無法較好的保證樣本的可靠性。當(dāng)前細(xì)胞蠟塊的技術(shù)研究數(shù)量較多，很多的報(bào)道中明確提出，可以將細(xì)胞蠟塊應(yīng)用在分子的檢測之中，但是具體的醫(yī)院實(shí)踐治療很少有相關(guān)的案例。本文對脫落細(xì)胞形成的細(xì)胞塊在肺癌患者中和熒光的原位進(jìn)行雜交檢測，現(xiàn)將相關(guān)的應(yīng)用價(jià)值報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇本院病理科從2017年1月至2017年12月經(jīng)過病理組織學(xué)診斷患有非小細(xì)胞腺癌患者或者同時(shí)體內(nèi)的細(xì)胞快被診斷成為癌癥或者疑惑癌癥的患者共計(jì)100例。根據(jù)細(xì)胞樣本的來源不同，主要為胸腔積液。另外，組織塊的樣本具體包括經(jīng)過胸膜的活體檢驗(yàn)和手術(shù)檢驗(yàn)等，將組織學(xué)的診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析其中的疾病組成，其中100例患者中鱗癌患者18例，肺腺癌患者79例，其他肺癌類型的患者3例。100例患者中，男性54例，女性46例，年齡為42～46歲，中位年齡為44歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 細(xì)胞塊制備：將新鮮的胸腔積液放置在4 ℃的冰箱中靜置處理，并收集底部的沉淀液，將其放置在離心管中，轉(zhuǎn)速為2500 r/min。進(jìn)行離心處理3 min，后加入10 mL福爾馬林，以同樣的離心處理方式得到棄掉上清液，最后放入95%的乙醇進(jìn)行處理，處理之后棄掉上清液。將以上的沉淀物質(zhì)放置在擦鏡紙上，收集患者體內(nèi)的常規(guī)組織，并進(jìn)行脫水處理，最終制成石蠟塊。

1.2.2 IHC方法：其中的免疫組化ALK抗體從北京的中杉公司，其中的試劑盒選擇福州的邁新制藥有限公司，進(jìn)行DAB染色處理。

1.3 結(jié)果判定：5%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)顆粒狀的分布，其中強(qiáng)著色被判定為（+++），超過5%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)中度細(xì)胞質(zhì)著色現(xiàn)象（+-+），超過5%的腫瘤著色現(xiàn)象向相對較為微弱，細(xì)胞無顯著的著色現(xiàn)象，臨床判定為ALK IGC（0）。

2 結(jié) 果

在被測試的所有樣本中，其中（+++）和（++），（+）的共計(jì)28例，陽性率為28.00%。細(xì)胞塊測試后免疫結(jié)果顯示為（+-+）和（++）還有（+）的患者共計(jì)13例，陽性率為13.00%。以上兩組的組織塊和融合基因在熒光位置上的雜交結(jié)果均呈現(xiàn)陽性特點(diǎn)，其與免疫組化的結(jié)果明顯相同。

3 討 論

國外的研究中，在2號(hào)染色體的斷臂位置形成了動(dòng)物的微管相關(guān)性蛋白，其與簡便性的淋巴瘤激酶等構(gòu)成融合基因，其研究已經(jīng)成為了醫(yī)學(xué)界的重大突破。IHC是進(jìn)行ALK蛋白表達(dá)檢驗(yàn)的一種較為可靠的方法[3]，國外的研究中明確指出ALK D5F3中敏感度超強(qiáng)，已經(jīng)達(dá)到了98%的特異性，其各種斷裂方式和拷貝數(shù)量等已經(jīng)成為了當(dāng)前靶向治療嚴(yán)重性的重要依據(jù)，但是使用ALK D5F3方式需要相對較高的成本，對患者的收費(fèi)相對較高，并不適用于臨床的廣泛推廣，當(dāng)前階段，對于疾病的診斷多是使用IHC進(jìn)行預(yù)審核篩選，其中的陽性患者在進(jìn)行FISH的檢驗(yàn)。在本次調(diào)查研究中（+++）和（++），（+）的FISH的結(jié)果均為陽性，在細(xì)胞蠟塊中，固定單個(gè)細(xì)胞的過程中會(huì)盡可能的保持抗原原有的活性，同時(shí)，細(xì)胞中蠟塊中的惡性腫瘤成分經(jīng)過集聚之后，其內(nèi)容和類型較為單一，直接為FISH和IHC等提供了一定的抗原標(biāo)本。

綜上所述，對于惡性腫瘤來說，其原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶之間存在著相對較大的差異，原發(fā)灶細(xì)胞的基因狀態(tài)和體液脫落細(xì)胞的基因狀態(tài)之間存在一定的異質(zhì)性，但是經(jīng)過腫瘤的基因檢測發(fā)現(xiàn)，其陽性率顯著低于組織學(xué)的樣本，最終的結(jié)果較為可信。對于晚期的非小細(xì)胞肺癌的患者來說，已經(jīng)成為了一種較為可靠地檢測方式。傳統(tǒng)的細(xì)胞保留方式不夠成熟，無法長期有效的保存處理，伴隨著細(xì)胞蠟塊技術(shù)的發(fā)明，已經(jīng)解決了細(xì)胞的長期保留難題，并能夠通過重復(fù)的切塊，最終為整體的實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造了較好的條件，很多無法獲取組織學(xué)樣本的中晚期肺癌患者可以進(jìn)行全面有效的肺癌分子檢測，該種方式具有較強(qiáng)的臨床價(jià)值。