不同產(chǎn)地葛根中葛根素含量的測(cè)定

張 莉， 何春萍， 劉良科*， 聶 歆，李 月， 張崇華

葛根為豆科植物野葛 [Pueraria lobata（Willd.）Ohwi]或粉藤（Pueraria thomsanii Benth.）的干燥根.野葛在我國(guó)分布較廣，遼寧、河北、河南、江蘇、福建、湖南等地均有分布.葛根中以葛根素為代表的異黃酮類成分，是葛根的主要有效成分[1].葛根為項(xiàng)背強(qiáng)痛之要藥，現(xiàn)代藥理已發(fā)現(xiàn)葛根的多種藥理活性，其中包括解熱、降血糖、降血脂等[2].現(xiàn)代研究表明，葛根素對(duì)治療心律失常、心肌梗死、心絞痛、冠心病、高血壓等心腦血管疾病有很好的療效[3，4].遲霽菲等[5]對(duì)不同產(chǎn)地葛根中的葛根素含量進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)葛根素的含量隨葛根產(chǎn)地不同而存在較大差異.張尊聽等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，葛根采集的季節(jié)不同，葛根素的含量也存在明顯的不同.陳元生等[7]對(duì)36份藥葛種質(zhì)資源進(jìn)行了葛根素含量測(cè)定，36份樣品的葛根素含量為0.01%-3.64%.可見，采收時(shí)間和產(chǎn)地等因素都影響葛根素含量.葛根是藥食兩用植物，葛根素含量是評(píng)價(jià)葛根藥材質(zhì)量的重要指標(biāo).因此，高葛根素含量葛根品種的選育具有重要的實(shí)踐意義.

本研究采用高效液相色譜法，對(duì)不同產(chǎn)地葛根的葛根素含量進(jìn)行測(cè)定，為葛根優(yōu)良品種的選育和產(chǎn)業(yè)開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

通過(guò)對(duì)中國(guó)各地葛根資源的調(diào)查了解，于2007年開始采用野外收集和引種方式，在全國(guó)范圍內(nèi)收集葛根種質(zhì)資源50份，種植于懷化學(xué)院生物園.根據(jù)幾年的栽培觀察結(jié)果，從中挑選產(chǎn)量較高的15份種質(zhì)用于本試驗(yàn)研究.這15份種質(zhì)中，10號(hào)、13號(hào)和14號(hào)等3份種質(zhì)是野葛 [P.lobata（Wild）Ohwi]，其它12份種質(zhì)是粉葛（Pereira thomsonii Benth）.以上15份種質(zhì)于2016年4月10日集中種植于湖南省會(huì)同縣連山鄉(xiāng)火神坡村葛根栽培基地，常規(guī)栽培管理，2016年12月下旬挖取葛根.15份葛根種質(zhì)的來(lái)源地見表1.

1.2 儀器與試劑

主要儀器有LC-15C型島津高效液相色譜儀（日本島津），UV—2450紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）等.葛根素（批號(hào)：161102）對(duì)照品購(gòu)置中國(guó)食品藥品檢定研究院.甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純.

1.3 研究方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取葛根素對(duì)照品5.0 mg，用30%乙醇溶解定容至50 mL容量瓶，保存于4℃，作為對(duì)照品的儲(chǔ)備溶液，備用.

1.3.2 供試品溶液的制備[1]

測(cè)定前，各樣品均在50℃烘箱中烘干置恒重，粉碎，過(guò)60目篩.準(zhǔn)確稱取樣品粉末2.0 g，置于50 mL燒杯中，加入30%乙醇20 mL，密封，室溫下浸泡1 h，超聲30 min（溫度 45 ℃，功率 100 W，頻率 40 kHz），過(guò)濾，將濾液用30%乙醇定容于50 mL容量瓶中，搖勻，即得樣品溶液.

1.3.3 色譜條件[1]

色譜柱：Diamonsil C18柱（250×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇 - 水（30：70）；流速：1.0 mL/mim；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL.

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 最佳吸收波長(zhǎng)的選擇

準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL于10 mL容量瓶中，用30%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，在200-400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，250 nm處都有很明顯的吸收峰，故選擇最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm.

2.1.2 線性關(guān)系考察

分別準(zhǔn)確量取葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.1、2、5、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度線，制得系列濃度的葛根素對(duì)照品溶液.按“1.3.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），葛根素的含量為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得葛根素的回歸方程為：Y=76612X-100145，葛根素含量在1～100μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系.葛根素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖1.

2.1.3 精密度試驗(yàn)

精密量取同一溶度的對(duì)照品溶液，按“1.3.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，結(jié)果顯示葛根素的峰面積RSD為0.10%，表明儀器精密度良好.

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取同一供試品溶液在 0、2、4、6、18、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示葛根素的峰面積RSD為0.86%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.1.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

圖1 葛根素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

精密稱取3份同一樣品，按“1.3.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行制備和“1.3.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果測(cè)定葛根素峰面積RSD為0.29%，表明方法的重現(xiàn)性良好.

2.1.6 加樣回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取同一樣品3份，精密加入葛根素對(duì)照品適量，按按“1.3.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行制備和“1.3.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果葛根素的平均加樣回收率為100.23%，RSD為2.1%.

2.2 樣品含量測(cè)定

取不同產(chǎn)地的葛根樣品，按“1.3.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行制備和“1.3.3”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定葛根素含量，葛根樣品色譜圖如圖2，結(jié)果見表1.

從表1看出，野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量；粉葛的產(chǎn)地不同，其葛根素含量也存在較大差異：12個(gè)樣品的葛根素含量為0.12%-1.83%，來(lái)源于火山的粉葛的葛根素含量最低，為0.12%，來(lái)源于懷化的粉葛的葛根素含量最高，為1.83%，是火山粉葛葛根素含量的15.25倍.

圖2 葛根樣品色譜圖

表1 不同產(chǎn)地葛根樣品中葛根素含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

文獻(xiàn)報(bào)道了多種提取葛根素的方法，如索氏提取、加熱回流提取等[8-10]，這些方法回流時(shí)間長(zhǎng)，且溫度較高，而超聲法從葛根中提取葛根素具有省時(shí)、節(jié)能、提取率和產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)室對(duì)超聲法從葛根中提取葛根素的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，以30%乙醇浸泡1 h，料液比1：20的提取效果最佳.

不同種類和產(chǎn)地葛根的葛根素含量差異較大，其中野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量，同時(shí)不同產(chǎn)地粉葛的葛根素含量也存在較大差異.作為藥用的葛根，其葛根素含量必須達(dá)到藥典要求：野葛的葛根素含量不低于2.4%，粉葛的葛根素含量不低于0.3%[1].因此，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)葛根的質(zhì)量控制，入藥時(shí)要選用固定產(chǎn)地的葛根，最好在采購(gòu)前進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，或只采購(gòu)經(jīng)測(cè)定已達(dá)標(biāo)的葛根.若要做保健品開發(fā)，也應(yīng)選用葛根素含量較高的葛根，這樣才能起到更好的保健作用.

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