豬流行性腹瀉病毒高免卵黃抗體制備及應(yīng)用

周紹寬先永芳

（1，四川省瀘州市瀘縣云龍鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心 646123；2，四川省瀘州市瀘縣兆雅畜牧獸醫(yī)站 646123）

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，PED） 是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的主要危害仔豬的一種急性、高度接觸性、病毒性傳染病[1]。初生仔豬通常在出生后獲得母源抗體保護(hù)，但隨著時(shí)間增長(zhǎng)，母源抗體逐漸消失，卵黃抗體與母源抗體都是通過被動(dòng)免疫使仔豬獲得對(duì)疾病的抵抗力。近年來，高免卵黃抗體在仔豬疾病防控中發(fā)揮越來越重要的作用，現(xiàn)將PEDV高免卵黃抗體的制備及應(yīng)用過程介紹如下。

1 材料與方法

1.1 毒株與試驗(yàn)動(dòng)物

PEDV由本實(shí)驗(yàn)室分離并保存；健康小鼠購(gòu)自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；1日齡仔豬由瀘縣云龍鎮(zhèn)星月豬場(chǎng)提供。

1.2 動(dòng)物免疫

將PEDV病毒液滅活后，常規(guī)方法配置油乳劑滅活疫苗。以PEDV滅活疫苗免疫健康產(chǎn)蛋雞，分3次免疫，第一次免疫1.0ml，第二次免疫1.5ml，第三次免疫2.0ml，免疫間隔期為2周，3次免疫后，收集高免蛋。

1.3 卵黃抗體純化及效價(jià)測(cè)定

無菌收集高免蛋的卵黃，按1∶2比例加入滅菌生理鹽水，再加入1/2體積的氯仿，混合均勻，8000r/min離心10min后收集上清，加入飽和硫酸銨溶液，使其濃度達(dá)到33%，5000r/min離心15min后，沉淀用生理鹽水溶解，透析法除去鹽和雜質(zhì)。通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定純化后的卵黃抗體效價(jià)。

1.4 安全性試驗(yàn)

取健康小鼠20只，隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組灌服卵黃抗體1.0ml/只，對(duì)照組灌服生理鹽水1.0ml/只，觀察7d后剖檢小鼠，觀察臟器病變。

1.5 人工感染治療試驗(yàn)

將30頭1日齡未吃初乳仔豬隨機(jī)分3組（對(duì)照組、低劑量組、高劑量組），每組10頭，各組仔豬均肌肉注射PEDV病毒液1.0ml，當(dāng)仔豬出現(xiàn)腹瀉癥狀后，低劑量組口服卵黃抗體治療，每次0.5ml，連續(xù)服用3d。高劑量組口服卵黃抗體治療，每次2.0ml，連續(xù)服用3d。對(duì)照組不進(jìn)行治療。

2 結(jié)果與分析

2.1 卵黃抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果

采用瓊脂擴(kuò)散方法測(cè)定卵黃抗體的抗體效價(jià)達(dá)1∶128。

2.2 安全性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠均健活，剖檢小鼠未見各臟器和消化道病變，表明卵黃抗體安全性好。

2.3 人工感染治療試驗(yàn)結(jié)果

攻毒后24h，所有仔豬都出現(xiàn)腹瀉癥狀，高劑量組在口服高免卵黃抗體后，腹瀉癥狀逐漸減輕，5d內(nèi)全部痊愈，治愈率為100%。低劑量組死亡4只，存活6只，治愈率為60%。對(duì)照組在攻毒后5d內(nèi)10頭仔豬全部死亡。

3 討論

卵黃抗體具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，產(chǎn)量高的優(yōu)點(diǎn)，特別適用于動(dòng)物疾病的保健預(yù)防[2]。而在卵黃抗體母體來源的選擇上，由于蛋雞產(chǎn)蛋量高，易于飼養(yǎng)，且應(yīng)用蛋雞制備PEDV卵黃抗體屬于利用異源動(dòng)物制備卵黃抗體，降低了同源疫病傳染的危險(xiǎn)。鑒于此，本研究通過健康產(chǎn)蛋雞制備了PEDV高免卵黃抗體，其抗體效價(jià)達(dá)1∶128，通過安全性試驗(yàn)和人工感染試驗(yàn)證明制備的卵黃抗體安全性好，2.0ml使用劑量對(duì)人工感染仔豬的治愈率達(dá)100%，具有較好的治療效果，為PEDV的防治提供了一種快速、簡(jiǎn)單、安全、有效的技術(shù)方法，一般的基層養(yǎng)殖場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室都可以制備使用，具有很好的推廣和應(yīng)用價(jià)值。

[1]李冰,張顯浩,蔡佳躍,等.豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體制備及抗體水平檢測(cè)[J].畜牧與獸醫(yī),2015,47(8):106-109.

[2]潘孝成,趙瑞宏,沈?qū)W懷,等.豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體的制備與應(yīng)用[J].養(yǎng)豬,2016(3):119-120.