根皮苷氧化物POP2的酶促反應(yīng)體系及其結(jié)構(gòu)表征

王娟，鄧紅，劉蕓，郭玉蓉，孟永宏

（陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，西安 710119）

0 引言

【研究意義】蘋果中含有維生素、礦物質(zhì)、糖類、酸類、果膠以及蘋果多酚、類黃酮等多種物質(zhì)[1]，具有生津、潤(rùn)肺、開胃、止瀉、通便功效[2]。蘋果中類黃酮的含量隨著品種和種植地的不同而有所差異，其含量約為114—803 μg·g-1[3]，是天然的優(yōu)質(zhì)抗氧化劑。然而，在蘋果汁和蘋果酒的加工過(guò)程中，隨著植物細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)的破壞，釋放出的多酚氧化酶（PPO）在氧氣（O2）的參與下產(chǎn)生酶促反應(yīng)，生成許多新的多酚氧化物，是造成果汁褐變和劣變[4]的主要原因之一。多酚氧化酶是一種含銅離子的金屬蛋白體[5]，它的催化作用分為兩種[6]：一種是選擇性地催化酚羥基化生成鄰二酚，鄰二酚產(chǎn)物繼續(xù)被氧化生成鄰苯醌；另一種是先在多酚氧化酶的作用下形成不穩(wěn)定的鄰苯醌類化合物，然后再進(jìn)一步通過(guò)非酶氧化反應(yīng)聚合生成黑色素[7]，如兒茶素類多酚在多酚氧化酶與氧氣作用下生成鄰苯醌類，鄰苯醌類化合物再進(jìn)一步生成茶黃素或茶紅素類物質(zhì)。多酚氧化酶可作用于一元酚、鄰苯二酚和對(duì)苯二酚等底物，科學(xué)研究中經(jīng)常利用與鄰苯二酚的反應(yīng)測(cè)定多酚氧化酶活性強(qiáng)度[8]。酶促褐變后的果汁中含有大量的多酚氧化產(chǎn)物，在傳統(tǒng)果汁加工過(guò)程中經(jīng)過(guò)脫色樹脂進(jìn)行吸附去除[9]，以便維持果汁的色值、儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。但是，長(zhǎng)久以來(lái)，人們并沒有重視和研究生產(chǎn)中大量產(chǎn)生的蘋果多酚氧化產(chǎn)物，其對(duì)果汁褐變、劣變的影響和生物功能尚不清楚?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前國(guó)內(nèi)外主要是通過(guò)研究不同蘋果多酚對(duì)多酚氧化酶催化特性的影響，為工業(yè)生產(chǎn)蘋果汁減少酶促褐變提高色值提供理論依據(jù)[10]。蘋果中的多酚物質(zhì)主要為黃酮醇類物質(zhì)（槲皮苷、蘆?。?，黃烷醇類物質(zhì)（原花青素、兒茶素類），二氫查耳酮類（根皮苷、根皮素），羥基肉桂酸（綠原酸）等[11]。宋燁等[12]通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定分析了不同蘋果品種中多酚的組成及果實(shí)的褐變度，結(jié)果顯示，果實(shí)的褐變度與根皮苷、兒茶素、原花青素的相關(guān)性較高，綠原酸與果實(shí)褐變度相關(guān)性較低。OSZMIANSKI等[13]通過(guò)添加不同濃度的綠原酸和兒茶素研究根皮苷的酶促氧化速率，進(jìn)而根據(jù)褐變值判斷同一反應(yīng)體系中綠原酸和兒茶素對(duì)根皮苷氧化物積累的促進(jìn)作用，但是有關(guān)蘋果多酚褐變的反應(yīng)歷程尚不清楚?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前國(guó)內(nèi)外通過(guò)模擬蘋果多酚體外氧化試驗(yàn)對(duì)果汁工業(yè)加工減少酶促褐變提供理論依據(jù)，但并未對(duì)其褐變產(chǎn)物加以分析鑒定，無(wú)法評(píng)價(jià)多酚氧化物對(duì)蘋果汁褐變的影響?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)多酚氧化酶氧化根皮苷反應(yīng)體系的建立，分離純化POP2，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征分析，明確蘋果汁酶促氧化反應(yīng)中的主要氧化物，以及根皮苷氧化物生成的條件與反應(yīng)歷程，以蘋果多酚氧化物的含量高低為標(biāo)志，為建立蘋果汁褐變和劣變的檢測(cè)指標(biāo)提供參考。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2016年11月至2017年5月在陜西師范大學(xué)長(zhǎng)安校區(qū)食品學(xué)院進(jìn)行。

1.1 材料與試劑

根皮苷（C12H24O10）由西安天美生物科技股份有限公司提供，純度為 95%；多酚氧化酶 Polyphenol Oxidase（PPO），1 800 U·mg-1，美國(guó) Worthington 公司；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），美國(guó) Fisher公司；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo高效液相色譜儀，美國(guó)熱電公司；高分辨液質(zhì)聯(lián)用 LC-MS，德國(guó) Bruker；紅外光譜儀，德國(guó)Bruker；真空冷凍干燥機(jī)，北京四環(huán)科學(xué)儀器廠；紫外可見分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 pH、溫度、底物濃度對(duì) PPO酶促氧化的影響選取磷酸鹽緩沖液pH梯度[14]為：5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5，室溫下用不同pH的磷酸鹽緩沖液分別配制3 mg·mL-1根皮苷反應(yīng)液29 mL，將配制好的反應(yīng)液置于35℃磁力攪拌器中，加入1 mL（900 U）PPO。

底物濃度梯度為：0.5、1.0、3.0和 5.0 mg·mL-1，用pH為6.5的磷酸鹽緩沖液分別配制根皮苷反應(yīng)液29 mL，置于35℃磁力攪拌器中，加入1 mL（900 U）PPO。

反應(yīng)溫度梯度[15-16]為：25℃、30℃、35℃、40℃、45℃，用pH為6.5的磷酸鹽緩沖液分別配制3 mg·mL-1根皮苷反應(yīng)液29 mL，分別置于不同溫度的磁力攪拌器中，加入1 mL（900 U）PPO。在研究pH和底物濃度對(duì)PPO酶促氧化的影響時(shí)，測(cè)定方法為每隔20 min移取反應(yīng)液 0.5 mL，迅速置于 80℃水浴鍋中滅酶5 min，稀釋10倍后置于比色皿中，連續(xù)測(cè)定120 min內(nèi)（每隔20 min測(cè)一次）反應(yīng)液在420 nm 處的吸光度值。在研究溫度對(duì)PPO酶促氧化的影響時(shí)，設(shè)定反應(yīng)時(shí)間120 min，反應(yīng)完成后迅速滅酶，并稀釋10倍后測(cè)定吸光度。

以吸光度An為縱坐標(biāo)，各影響因素為橫坐標(biāo)，研究不同pH、溫度、底物濃度對(duì)PPO酶促氧化的影響。1.3.2 無(wú)水乙醇對(duì) PPO酶促氧化的影響 室溫下選取1.3.1中最佳反應(yīng)速度的磷酸鹽緩沖液的pH、溫度、底物濃度配制無(wú)水乙醇含量分別為 0、10%、20%、30%、40%、50%的根皮苷反應(yīng)液，其他反應(yīng)條件及測(cè)定方法同1.3.1。

1.3.3 酶促反應(yīng)歷程 室溫下在pH 6.5的磷酸鹽緩沖液中加入 20%的無(wú)水乙醇配制根皮苷反應(yīng)液 3 mg·mL-149 mL，置于35℃磁力攪拌器中，加入1 mL（1 500 U）PPO，分別在反應(yīng)進(jìn)行的0、1、2、4、10、24和48 h取樣1 mL，并迅速儲(chǔ)存于-20℃冰箱終止酶促反應(yīng)，用于高效液相色譜法（HPLC）在280 nm和420 nm處檢測(cè)根皮苷的減少量及氧化物的生成量。

1.3.4 根皮苷氧化物的純化 預(yù)試驗(yàn)得到根皮苷氧化物為水溶性產(chǎn)物，而根皮苷易溶于乙酸乙酯，所以將反應(yīng)完成的反應(yīng)液用兩倍體積的乙酸乙酯溶液萃取3次以除去未反應(yīng)的根皮苷，萃取后的反應(yīng)液經(jīng)真空冷凍干燥后用超純水溶解至飽和狀態(tài)，加入無(wú)水乙醇進(jìn)行脫鹽處理，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去乙醇，經(jīng)80%甲醇重結(jié)晶后得到氧化產(chǎn)物純品[17]。

1.3.5 高效液相色譜法 將1.3.4中的樣品從冰箱取出溶解后用0.22 μm濾器過(guò)濾；進(jìn)樣量：5 μL；色譜柱：C18柱（Diamonsil SB-C18 column，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相A為pH 2.6的乙酸水溶液，B為乙腈，流速梯度：0—5 min為 3%—9% B，5—15 min為9%—16% B，15—30 min為16%—30% B，30—45 min為30%—5% B；流速為0.6 mL·min-1；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm和420 nm。

1.3.6 質(zhì)譜（ESI-MS）分析氧化物 質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；噴霧電壓：0.4 bar；正離子模式；質(zhì)量掃描范圍m/z 100—1 000；母離子m/z 467。

1.3.7 紅外光譜（IR）分析氧化物 溴化鉀提前在90℃烘箱中烘干24 h備用，取約2 mg樣品與烘干的溴化鉀充分混合并研磨，再轉(zhuǎn)入壓片機(jī)中使其分布均勻，在抽真空狀態(tài)下將其壓成透明薄片。掃描紅外光譜時(shí)以溴化鉀空白壓片作為參比，在4 000—400 cm-1范圍內(nèi)記錄其光譜圖。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Origin 8.0和Microsoft Excel軟件分析處理。采用DPS軟件進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 pH、溫度、底物濃度對(duì)PPO的酶促氧化反應(yīng)

pH作為影響酶促氧化速率的一個(gè)重要因素，由圖1-A可以看到，隨著pH逐漸從弱酸性（pH 5.5）提高至弱堿性（pH 7.5）時(shí)，反應(yīng)速率也呈現(xiàn)先增后減趨勢(shì)，在前60 min內(nèi)，6種pH下的吸光度值都急劇升高，pH 6.5上升的最快，與其他5種具有顯著性差異（P＜0.05）。在60—120 min，反應(yīng)逐漸趨于平緩，并且當(dāng)反應(yīng)液處于弱酸性和弱堿性時(shí)都不利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行，其原因可能是當(dāng)pH接近中性時(shí)對(duì)多酚氧化酶的銅離子輔基具有穩(wěn)定作用，pH過(guò)高或過(guò)低時(shí)都會(huì)不同程度的導(dǎo)致酶失活。所以選擇pH 6.5為根皮苷酶促氧化的最佳pH。

圖1-B結(jié)果顯示，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?.5—3 mg·mL-1范圍內(nèi)，PPO酶促氧化反應(yīng)隨著底物濃度的增加，褐變值也有所上升，當(dāng)濃度達(dá)到 5 mg·mL-1時(shí)，反應(yīng)速度不及 3 mg·mL-1，原因可能是因?yàn)榈孜锖窟^(guò)高對(duì)PPO酶活力產(chǎn)生抑制，所以最佳反應(yīng)底物濃度為 3 mg·mL-1，與其他3組具有顯著性差異（P＜0.05）。

溫度是果汁加工中一個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)，經(jīng)常會(huì)采用低溫控制褐變。圖1-C結(jié)果顯示，在相同的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，溫度較低時(shí)，酶促反應(yīng)很慢；而在35℃時(shí)，與其他溫度具有顯著性差異（P＜0.05），褐變值顯示最高；隨后溫度升高時(shí)，褐變值降低，其原因可能是隨著溫度升高多酚氧化酶變性失活，為了使根皮苷完全轉(zhuǎn)化為氧化物，酶促氧化的溫度選擇35℃。

圖1 pH、溫度、底物濃度對(duì)POP2轉(zhuǎn)化率的影響Fig. 1 Effects of different pH, temperatures, concentrations on conversion rate ofPOP2

2.2 無(wú)水乙醇濃度對(duì)PPO的酶促氧化反應(yīng)

根皮苷在水中的溶解度較小，易溶于無(wú)水乙醇等有機(jī)溶劑，通過(guò)添加不同濃度的無(wú)水乙醇對(duì)酶促氧化的影響如圖2所示，添加不同濃度的無(wú)水乙醇均可以提高 POP2的轉(zhuǎn)化率，20%的無(wú)水乙醇作用效果最明顯，與其他4組具有顯著性差異（P＜0.05），乙醇濃度提高至40%時(shí)對(duì)PPO酶活力產(chǎn)生抑制，可能是因?yàn)橐掖际且环N具有還原性的一元醇，將 PPO中的 Cu2+還原為磚紅色Cu2O沉淀，導(dǎo)致PPO失活。所以最佳的乙醇添加量為20%。

2.3 酶促反應(yīng)歷程

圖2 乙醇濃度對(duì)酶促反應(yīng)的影響Fig. 2 Effects of different ethanol concentrations on enzymatic reaction

根皮苷反應(yīng)液隨時(shí)間的變化顏色也發(fā)生改變，反應(yīng)剛開始溶液顏色呈微黃色，隨著反應(yīng)的進(jìn)行顏色逐漸從亮黃色變?yōu)槌赛S色，最終產(chǎn)物的顏色為橙紅色。高效液相色譜檢測(cè)結(jié)果如圖3顯示，反應(yīng)過(guò)程中有4種物質(zhì)的含量發(fā)生變化，分別是根皮苷、中間產(chǎn)物X1、POP1和POP2，從色譜圖中可以看出，0—5 h內(nèi)，根皮苷的含量急劇減少，在280 nm處檢測(cè)到中間產(chǎn)物X1和POP1的生成，在420 nm處檢測(cè)到POP2的生成，在10 h以后，根皮苷的消耗基本不再發(fā)生變化，此時(shí)根皮苷的轉(zhuǎn)化率已達(dá)到 90.2%，中間產(chǎn)物 X1和POP1也基本接近痕量，而POP2含量一直在增加，根皮苷屬于一元酚，所以其反應(yīng)歷程（圖 4）可能為根皮苷先轉(zhuǎn)化為中間產(chǎn)物X1，X1再迅速轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g產(chǎn)物POP1，隨后轉(zhuǎn)變?yōu)镻OP2是一個(gè)非常緩慢的過(guò)程。HPLC結(jié)果顯示，根皮苷經(jīng)酶促氧化后，氧化產(chǎn)物的主要成分是POP2，無(wú)其他副產(chǎn)物的生成。

圖3 反應(yīng)歷程中根皮苷的消耗和POP2的生成Fig. 3 Consumption of phloridzin and the formation of POP2 during 48h reaction

圖4 根皮苷氧化物POP2的形成過(guò)程Fig. 4 Reaction pathway for formation of phloridzin oxide POP2

2.4 根皮苷氧化物的純化

根皮苷反應(yīng)液經(jīng)PPO酶促氧化48 h后的反應(yīng)液用兩倍體積的乙酸乙酯萃取3次，得到POP2的純度為96.8%。圖5結(jié)果顯示，HPLC法在280 nm處檢測(cè)到萃取后反應(yīng)液根皮苷的峰消失，在420 nm處反應(yīng)液中僅存在氧化產(chǎn)物 POP2。由于此產(chǎn)物是水溶性化合物，用無(wú)水乙醇脫鹽后，用80%的甲醇重結(jié)晶，得到的結(jié)晶物即為根皮苷氧化產(chǎn)物純品，將其進(jìn)行質(zhì)譜和紅外光譜分析。

2.5 ESI-MS圖

將 2.4中所得到的根皮苷氧化物的結(jié)晶純品用超純水溶解后再用色譜甲醇稀釋至10-6μg·L-1，圖6顯示，在正離子模式下分析得到根皮苷氧化物m/z為467，即其分子質(zhì)量應(yīng)為 466，與所推測(cè)的最終產(chǎn)物 POP2相吻合，其分子式為C21H22O12。

圖5 萃取過(guò)程中根皮苷與POP2的含量變化Fig. 5 Content change of phloridzin (280 nm) and POP2 (420 nm) before and after extraction

圖6 根皮苷氧化物POP2的質(zhì)譜圖Fig. 6 Mass spectrogram of phloridzin oxide POP2

2.6 紅外光譜圖

根皮苷氧化物的紅外光譜圖（圖7）結(jié)果顯示，1 725 cm-1為酮基（υC=O1 725—1 700 cm-1）的特征吸收峰，1 060 cm-1為飽和脂肪醚（1 150—1 060 cm-1）的特征吸收峰，3 535 cm-1為羥基（υ-OH3 750—3 000 cm-1）的特征吸收峰，1 628 cm-1為苯環(huán)的特征吸收峰（1 500—1 700 cm-1），691為苯環(huán)上取代基的吸收峰，2 830 cm-1為飽和-CH2（υC-H2 830—2 870 cm-1）的吸收峰，3 271 cm-1為羧酸上的-OH（υO(shè)-H3 300—2 500 cm-1）的特征吸收峰，由此推測(cè)，與根皮苷氧化物POP2的結(jié)構(gòu)式吻合。

圖7 根皮苷氧化物POP2的紅外光譜圖Fig. 7 Infrared spectrogram of phloridzin oxide POP2

3 討論

3.1 無(wú)水乙醇提高POP2的轉(zhuǎn)化率

蘋果中含有一些天然香精[18-19]，在果汁加工中通過(guò)回流濃縮收集揮發(fā)性物質(zhì)得到的產(chǎn)品[20]，主要分為醇香型和酯香型兩種，馬永昆等[21]研究發(fā)現(xiàn)蘋果中 3種天然香精（SH1、SH2和 SB）中醇類所占比例分別為46.71%、47.01%、24.48%，蘋果中各香精成分隨著蘋果品種和成熟度的不同而有所差異[22]。KLIBANOV[23]和 MA[24]等研究了在有機(jī)溶劑中提高酶的活性，相比在水為溶劑的酶促反應(yīng)中，酶表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性。郭盼等[25]研究了非水介質(zhì)中漆酶催化多酚化合物的影響，結(jié)果表明低濃度親水性的有機(jī)溶劑甲醇可以促進(jìn)酶促反應(yīng)。

果蔬的酶促褐變主要是由于果蔬中富含的 PPO催化酚類物質(zhì)的氧化反應(yīng)所引起。PPO可催化果蔬中酚類物質(zhì)形成醌，醌類物質(zhì)在果蔬體內(nèi)進(jìn)行自身縮合或與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)反應(yīng)生成黑色素[26]。在完整的果蔬體內(nèi)，PPO處于潛伏狀態(tài)并不起催化作用，但是果蔬在加工過(guò)程中組織被損傷，氧氣的侵入使多酚氧化酶被激活，作用于酚類物質(zhì)生成黑色素。所以體外模擬PPO酶促反應(yīng)時(shí)必須具備的條件有：氧氣、多酚氧化酶、底物與酶的結(jié)合[27]。

果汁中香精為有機(jī)溶劑會(huì)增加多酚的溶解度，所以為了模擬果汁工業(yè)生產(chǎn)體系，在研究pH、底物濃度和溫度對(duì)PPO酶促氧化影響的基礎(chǔ)上，又研究了不同濃度的無(wú)水乙醇對(duì)PPO酶促氧化的影響，發(fā)現(xiàn)20%的乙醇濃度酶促氧化效果最佳，可提高反應(yīng)轉(zhuǎn)化率 2.4倍，其可能的原因是無(wú)水乙醇能使根皮苷充分溶解，使PPO與底物充分結(jié)合，有研究表明在酶促氧化過(guò)程中乙醇是一種激活劑[28]，但是隨著乙醇濃度的升高，酶活力受到抑制，是因?yàn)橐掖际且环N具有還原性的一元醇，將PPO中的Cu2+還原為磚紅色Cu2O沉淀，導(dǎo)致PPO失活。

在果汁生產(chǎn)過(guò)程中，可以從隔絕氧氣、滅酶、減少底物與酶的結(jié)合、除去香精4個(gè)方面減少酶促褐變。例如在果汁生產(chǎn)中盡量減少破碎后的蘋果與空氣接觸，采用冷破碎的方式去除蘋果皮和蘋果籽，防止溫度過(guò)高發(fā)生酶促褐變，殺菌時(shí)采用高溫短時(shí)滅菌或其他非熱殺菌技術(shù)。通過(guò)在根皮苷反應(yīng)體系中添加不同濃度的乙醇均可促進(jìn)酶促反應(yīng)，因此，在工業(yè)生產(chǎn)中可先回收蘋果香精再進(jìn)行果汁生產(chǎn)，最后根據(jù)需要再將香精添加至果汁中。

3.2 POP2的生成過(guò)程

根皮苷在前5 h內(nèi)消耗的最快，轉(zhuǎn)化率已經(jīng)達(dá)到86.1%，之后根皮苷的含量基本不再發(fā)生變化，5 h以后主要是中間產(chǎn)物向終產(chǎn)物POP2的轉(zhuǎn)變，在1—10 h內(nèi)，POP2的積累速度最快，在10 h后，根皮苷的含量基本不再發(fā)生變化，其原因可能是在反應(yīng)前期，底物迅速與酶活性中心結(jié)合，使根皮苷迅速被消耗，但是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，酶活達(dá)到極限，根皮苷與酶結(jié)合能力變?nèi)?，此時(shí)轉(zhuǎn)化率達(dá)到90.2%，并且中間產(chǎn)物X1已基本轉(zhuǎn)化為終產(chǎn)物 POP2，此后主要發(fā)生的反應(yīng)是POP1向 POP2的轉(zhuǎn)變。GUYOT[29]和 GUERNEVé[30]的研究表明在反應(yīng)時(shí)間為5 h時(shí)，根皮苷已完全轉(zhuǎn)化為氧化物POP1和POP2，在280 nm處未檢測(cè)到根皮苷的殘留及中間產(chǎn)物X1的生成，5 h后發(fā)生的反應(yīng)是氧化物POP1向POP2的轉(zhuǎn)變，當(dāng)反應(yīng)終止時(shí)，體系中僅存在POP1和POP2兩種氧化物，并且POP2為主要產(chǎn)物，在420 nm處檢測(cè)到POP2的積累。但不同的是，王雪暉[31]的研究表明反應(yīng)完成后，在287 nm處同時(shí)檢測(cè)到兩種氧化物POP1和POP2的生成，并且POP1為主要產(chǎn)物。通過(guò)HPLC追蹤根皮苷酶促反應(yīng)歷程發(fā)現(xiàn)，根皮苷不能完全轉(zhuǎn)化為POP2，在420 nm處檢測(cè)到根皮苷氧化物中的主要成分為POP2。根皮苷為蘋果的特征性多酚，通過(guò)明確根皮苷氧化物POP2的結(jié)構(gòu)和HPLC的檢測(cè)方法，可以以POP2的含量多少檢測(cè)蘋果汁的摻假。

4 結(jié)論

通過(guò)多酚氧化酶氧化根皮苷反應(yīng)體系的建立，明確了根皮苷酶促氧化體系中的主要氧化物為POP2，添加適宜濃度的無(wú)水乙醇可以顯著提高根皮苷的轉(zhuǎn)化率和POP2的積累；經(jīng)分離純化后利用ESI-MS和IR確定了 POP2的結(jié)構(gòu)。此研究結(jié)果可為蘋果汁中POP2的檢測(cè)分析及功能評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)，進(jìn)而可以用POP2含量的多少建立蘋果汁褐變和劣變的標(biāo)志性檢測(cè)指標(biāo)。

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