多能干細(xì)胞向雄性生殖細(xì)胞定向分化的研究進(jìn)展

王新杰 姬小利 王敏 周君梅

生殖健康是人類社會得以繼續(xù)繁榮發(fā)展和進(jìn)步的關(guān)鍵和保證。男性不育是亟待解決的一大問題，其原因和機(jī)制有待研究，但因倫理限制，不能利用人類胚胎開展研究，因此在體外建立合適的研究模型成為解決問題的一種新思路。

胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells，ESCs）是一種來源于早期胚胎囊胚階段內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的具有自我更新能力及多向分化潛能的細(xì)胞，可在體外定向誘導(dǎo)分化為三個胚層的各種類型成體細(xì)胞。已有研究表明，小鼠的ESCs可在體外誘導(dǎo)分化為成熟的單倍體精子，且這些精子可使卵子受精并得到存活的后代[1]。人的ESCs也可在體外誘導(dǎo)分化為生殖細(xì)胞[2]，但是，人ESCs的建立需破壞早期胚胎，將其用于生物醫(yī)學(xué)研究存在倫理及技術(shù)限制等諸多制約[3]。2006年，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）的出現(xiàn)為解決以上難題提供了可能。iPSCs是多能干細(xì)胞的一種，通過在體外向成體細(xì)胞中導(dǎo)入與ESCs多能性密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，誘導(dǎo)其重編程，可得到iPSCs。2006年，日本科學(xué)家首次將四種轉(zhuǎn)錄因子Oct3/4、Sox2、Klf4 和c-Myc通過逆轉(zhuǎn)錄病毒導(dǎo)入小鼠皮膚成纖維細(xì)胞，使之重編程后得到了具有ESCs特性的小鼠iPSCs[4]。2007年，該研究小組又通過同樣的方法成功獲得了人iPSCs[5]。同年，美國科學(xué)家用另外一組轉(zhuǎn)錄因子，即Oct3/4、Sox2、Nanog、Lin28成功地將人的皮膚成纖維細(xì)胞重編程，得到人iPSCs[6]。iPSCs的形態(tài)特征、增殖能力和分化潛能等均與ESCs相似，但具有ESCs不具備的以下優(yōu)勢：（1）其種子細(xì)胞來源廣泛，包括皮膚成纖維細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、尿源性細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、羊水細(xì)胞、肝細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞等[7]；（2）避開了破壞人類胚胎的倫理問題；（3）自體細(xì)胞的移植應(yīng)用避免了免疫排斥問題。同時，由于ESCs與iPSCs均具備分化成多種成體細(xì)胞的能力，因此，可利用ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞分化為體外模型，研究人類生殖細(xì)胞的發(fā)育規(guī)律，在此基礎(chǔ)上，建立帶有人類疾病遺傳背景的iPSCs模型，體外向雄性生殖細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化，利用該模型來研究男性不育的發(fā)病機(jī)制。精子的形成是一個雄性生殖細(xì)胞分化、增殖和成熟的復(fù)雜過程，該過程可分為2個階段：第1階段是原始生殖細(xì)胞（primordial germ cells，PGCs）形成，繼之向精原干細(xì)胞（spermatogonial stem cells，SSCs）方向分化；第2階段是SSCs向精子細(xì)胞方向分化，經(jīng)過有絲分裂和兩次減數(shù)分裂，最終形成成熟的精子[8]。該過程的不同階段受到不同誘導(dǎo)因子的作用，因此，為了更好地在體外模擬精子的形成過程，誘導(dǎo)因子的選擇及添加時間應(yīng)根據(jù)以上生殖細(xì)胞在體內(nèi)的發(fā)育規(guī)律而定、在不同發(fā)育階段循序加入，從而達(dá)到更好地研究發(fā)病機(jī)制的目的，為維護(hù)和促進(jìn)生殖健康奠定重要基礎(chǔ)。

本文將對多能干細(xì)胞向雄性生殖細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的常用誘導(dǎo)因子及存在問題和展望進(jìn)行綜述，為相關(guān)研究的開展提供借鑒。

一、ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化常用的誘導(dǎo)因子

由于精子在體內(nèi)形成遵循一定的規(guī)律，體外環(huán)境中，不同發(fā)育階段的生殖細(xì)胞在不同誘導(dǎo)因子作用下可穩(wěn)定地往下一階段定向分化，為模擬精子在體內(nèi)的形成過程，誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的誘導(dǎo)因子種類及加入時間的選擇應(yīng)根據(jù)生殖細(xì)胞的體內(nèi)發(fā)育特征而定，在誘導(dǎo)的不同階段循序加入，一般可分為前期常用誘導(dǎo)因子、中期常用誘導(dǎo)因子和后期常用誘導(dǎo)因子。

（一）前期常用誘導(dǎo)因子

1. 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenic protein，BMP）家族：BMP最初可用來誘導(dǎo)骨形成。近年來，隨著研究的深入，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)BMP家族在胚胎發(fā)育和組織細(xì)胞分化中也起到重要作用，其中BMP4更是一種關(guān)鍵因子。BMP4屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β家族的重要成員之一，在體內(nèi)可影響睪丸的發(fā)育和生殖細(xì)胞的功能，是生殖細(xì)胞發(fā)育過程中的重要信號。在胚胎發(fā)育時期，BMP4作為分泌配體與絲氨酸/蘇氨酸激酶受體結(jié)合，激活Smad信號通路，從而調(diào)控ESCs / iPSCs向PGCs的方向分化[9]。因此，在誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞分化的起始階段，BMP4是最為常用的關(guān)鍵因子[10]。

2009年，Ohinata等[11]將2只小鼠ESCs的BMP4和BMP8b基因分別敲除，導(dǎo)致二者外胚層細(xì)胞的PGCs特異性基因BLIMP1缺失，最終導(dǎo)致PGCs的缺失。同年，Kee等[12]將BMPs導(dǎo)入人的ESCs中，誘導(dǎo)分化14 d后，有5%的細(xì)胞表達(dá)生殖細(xì)胞特異性蛋白VASA，并且由實驗觀察到早期生殖細(xì)胞標(biāo)志性基因DAZL，BLIMP1，STELLAR和VASA表達(dá)增加，其中，BLIMP1和STELLAR是PGCs的特異性基因，DAZL基因可促進(jìn)PGCs的形成。2011年，Panula等[13]通過向培養(yǎng)基中添加BMP4、BMP7和BMP8b誘導(dǎo)因子，誘導(dǎo)人iPSCs向生精細(xì)胞方向分化，連續(xù)誘導(dǎo)7 d后，檢測到4.85%的細(xì)胞表達(dá)生殖細(xì)胞特異性標(biāo)志物VASA，并 且 有 5% 的 PGCs形 成。2015年，Sasaki等[14]使 用BMP4、SCF、EGF、LIF聯(lián)合誘導(dǎo)人iPSCs向生精細(xì)胞分化，6 d后，有32%的細(xì)胞共表達(dá)生殖細(xì)胞早期特異性標(biāo)志物EpCAM和INTEGRINα6，同時得到了人原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞（primordial germ cells-like cells，PGCLCs）。以上研究表明，BMPs在誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的前期階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，主要用于誘導(dǎo)得到PGCs。

2.白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）、干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）：LIF是一種多效性細(xì)胞因子。PGCs膜表面存在LIF特異性受體LIF-R復(fù)合物，LIF通過與LIF-R特異性結(jié)合促進(jìn)PGCs增殖。SCF是原癌基因c-kit編碼的酪氨酸激酶受體c-kit的配體，SCF與c-kit相互作用有助于PGCs與體細(xì)胞的黏附及促進(jìn)PGCs增殖。EGF是最早發(fā)現(xiàn)的生長因子，通過與細(xì)胞表面的表皮生長因子受體結(jié)合發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。這三種生長因子在誘導(dǎo)前期主要用于維持PGCs存活以及促進(jìn)PGCs增殖。

2011年，Hayashi等[15]首先利用堿性成纖維生長因子和激活素A誘導(dǎo)小鼠ESCs，48 h后得到外胚層樣細(xì)胞，之后使用 BMP4、LIF、SCF、EGF 誘導(dǎo)外胚層樣細(xì)胞，4 ～ 6 d后得到PGCLCs。2016年，Wang等[16]用相同的方法誘導(dǎo)豬iPSCs向生殖細(xì)胞方向分化，僅4 d得到PGCLCs。2013年，Gafni等[17]在誘導(dǎo)人ESCs向生殖細(xì)胞方向分化過程中，首先將人ESCs誘導(dǎo)至原始狀態(tài)，之后利用BMP4、LIF、SCF、EGF聯(lián)合誘導(dǎo)，4 ～ 5 d后得到人PGCLCs。2015年，Sasaki等[14]誘導(dǎo)人iPSCs向雄性生殖細(xì)胞分化，在培養(yǎng)基中加入 BMP4、LIF、SCF、EGF，6 d后，檢測到生殖細(xì)胞早期特異性標(biāo)志物EpCAM和INTEGRINα6表達(dá)增加，并且得到人PGCLCs。以上研究表明，LIF、SCF、EGF在誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的前期發(fā)揮重要作用，主要用于維持PGCs存活以及促進(jìn)PGCs增殖，對穩(wěn)定BMPs的誘導(dǎo)效果有重要作用。

綜合上述實驗結(jié)果可見，BMPs、LIF、SCF、EGF廣泛用于誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的前期階段。BMPs主要用于誘導(dǎo)ESCs/iPSCs向PGCs方向分化，在誘導(dǎo)前期起著關(guān)鍵作用，LIF、SCF、EGF主要發(fā)揮維持PGCs存活、促進(jìn)PGCs增殖以及穩(wěn)固BMPs誘導(dǎo)效果的作用。因此，當(dāng)以上4種因子聯(lián)合作用時，可有效誘導(dǎo)得到PGCs。

（二）中期常用誘導(dǎo)因子

1.睪酮：精子發(fā)生是一個依賴激素的過程。男性生殖細(xì)胞的發(fā)育受下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)與控制，睪酮是其中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的重要分子之一。睪酮是一種類固醇激素，在黃體生成素和促卵泡激素作用下由睪丸間質(zhì)細(xì)胞合成和分泌，作用于支持細(xì)胞，促使支持細(xì)胞合成和分泌雄激素結(jié)合蛋白。睪酮與雄激素結(jié)合蛋白有很強(qiáng)的親和力，結(jié)合后可促進(jìn)生殖細(xì)胞的分化[18-19]。此外，有研究報道睪酮可通過刺激生精小管管周肌樣細(xì)胞及支持細(xì)胞分泌神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell-line derived neurotrophic factor，GDNF），從而促進(jìn)SSCs的自我更新，進(jìn)而保證精子發(fā)生的持續(xù)進(jìn)行[20]。

2013年，Zanganeh等[21]將小鼠的SSCs與支持細(xì)胞共培養(yǎng)，加入睪酮、促卵泡激素及維生素后，誘導(dǎo)一周，得到精子細(xì)胞樣細(xì)胞（spermatid-like cells，SLCs）。2016年，Zhou等[22]將小鼠PGCLCs與新生小鼠睪丸體細(xì)胞共培養(yǎng)，加入睪酮、促卵泡激素及牛垂體提取物，誘導(dǎo)10 d后得到單倍體的SLCs，14 d后，SLCs陽性率達(dá)到14%～ 20%，將獲得的SLCs與野生型卵母細(xì)胞結(jié)合，得到具有生殖能力的健康后代。2017年，Deng等[23]在對照組中利用促卵泡激素、黃體生成素、GDNF等誘導(dǎo)羊SSCs，實驗組在此基礎(chǔ)上加入了睪酮，35 d后，對照組有5.54%的單倍體細(xì)胞產(chǎn)生，實驗組的單倍體細(xì)胞產(chǎn)生效率提高到了9.18%。將得到的單倍體SLCs與卵母細(xì)胞結(jié)合，結(jié)合后的細(xì)胞可進(jìn)一步發(fā)育。以上研究表明，睪酮對促進(jìn)小鼠和羊的生殖細(xì)胞向精子方向進(jìn)一步分化有不可缺少的作用，但目前尚未有研究報道睪酮對人生殖細(xì)胞進(jìn)一步分化的調(diào)控作用。

2. GDNF：生殖細(xì)胞是由PGCs分化形成[24]，在雄性動物中，PGCs首先分化為SSCs，再由SSCs進(jìn)一步分化成精子細(xì)胞。因此，維持SSCs的自我更新和分化是雄性生殖細(xì)胞發(fā)育過程中的重要一環(huán)。

GDNF是轉(zhuǎn)化生長因子-β家族的一員，由支持細(xì)胞產(chǎn)生，通過與SSCs表面的受體復(fù)合物GFRα1結(jié)合，激活RET酪氨酸激酶發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。SSCs被認(rèn)為是一種持續(xù)表達(dá)GFRα1的單個精原細(xì)胞[25]，近期有研究表明，在生精小管末端，GFRα1陽性表達(dá)的單個精原細(xì)胞是通過GDNF持續(xù)高表達(dá)得以選擇性維持的[26]。因此，GDNF對維持和擴(kuò)增SSCs有重要作用。2000年，Meng等[27]發(fā)現(xiàn)GDNF是調(diào)節(jié)小鼠SSCs自我更新和分化的重要因子，通過在培養(yǎng)小鼠SSCs的培養(yǎng)基里加入GDNF，發(fā)現(xiàn)高濃度GDNF促使未分化的SSCs大量增殖，低濃度GDNF促使SSCs向生精細(xì)胞方向分化。2011年，Kubota等[28]實驗發(fā)現(xiàn)GDNF 同樣可促進(jìn)非嚙齒類動物兔的SSCs自我更新和分化。2016年，Boozarpour等[29]首次指出，GDNF可誘導(dǎo)雞間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞向精原干細(xì)胞樣細(xì)胞方向分化，并且推測GDNF有能力誘導(dǎo)雞間充質(zhì)干細(xì)胞分化成SSCs。同年，Chen等[30]通過實驗發(fā)現(xiàn)Gdnf基因被敲除的小鼠其GDNF表達(dá)量比野生型小鼠降低40%，并且在敲除后，其SSCs嚴(yán)重缺失。以上研究表明，GDNF是促進(jìn)SSCs在體內(nèi)和體外自我更新和擴(kuò)增的重要因子[31]。

綜上所述，睪酮對推動生殖細(xì)胞進(jìn)一步分化及促進(jìn)精子發(fā)生有重要作用，GDNF可促進(jìn)SSCs自我更新及增殖，從而保證精子發(fā)生的持續(xù)進(jìn)行。

（三）后期常用誘導(dǎo)因子

維甲酸（retinoic acid，RA）是維生素A的衍生物，在細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、器官形成和生殖等方面起到重要作用。RA通過激活精子形成相關(guān)基因Stra8促進(jìn)生殖細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂[32]。有實驗證明，小鼠睪丸支持細(xì)胞分泌的代謝酶Cyp26b1可降解RA，抑制RA信號，導(dǎo)致減數(shù)分裂被延遲。當(dāng)性成熟時，Cyp26b1的表達(dá)量下降，RA信號重新啟動，減數(shù)分裂開始。因此，RA是生殖細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂與否的開關(guān)[33-35]。

2010年，Dong等[36]利用RA誘導(dǎo)胎牛生殖細(xì)胞向后期方向分化，48 h后繼續(xù)用無RA的培養(yǎng)基培養(yǎng)5 ～ 7 d，得到細(xì)長型SLCs，將這些細(xì)胞注入胎牛卵母細(xì)胞中，有23.1%的卵母細(xì)胞成功受精并開始卵裂。2014年，Wang等[37]利用RA誘導(dǎo)鼠SSCs向單倍體細(xì)胞方向分化，2 d后，轉(zhuǎn)為無RA培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)6 ～ 8 d，結(jié)果顯示，減數(shù)分裂后特異性標(biāo)志物Prm1表達(dá)增高，單倍體細(xì)胞相關(guān)基因Sycp3和TH2B表達(dá)增加。2016年，Wang等[38]利用RA誘導(dǎo)小鼠SSCs分化，僅24 h后，與SSCs分化及減數(shù)分裂相關(guān)的基因Stra8、c-Kit、SYCP3表達(dá)增高。2014年，Yang等[39]為幫助無精子癥患者得到有功能的配子，利用RA和SCF誘導(dǎo)來源于隱睪患者的人SSCs向單倍體精子方向分化，結(jié)果顯示，減數(shù)分裂特異性標(biāo)志物SCP3、CREST、MLH1和單倍體細(xì)胞標(biāo)志物Prm2、Acrosin的表達(dá)量均較對照組增高，并且得到了單倍體精子，將這些單倍體細(xì)胞與鼠卵母細(xì)胞結(jié)合，有60%成功受精并進(jìn)一步發(fā)育。以上研究結(jié)果表明：在生殖細(xì)胞的發(fā)育過程中，RA對推動生殖細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂并促進(jìn)其向后期成熟方向分化起到非常關(guān)鍵的作用。此外，有研究表明在誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞方向分化的過程中，生殖細(xì)胞的分化成熟程度對RA有濃度依賴性。2017年，Shah等[40]發(fā)現(xiàn)當(dāng)加入的RA濃度為16 μmol/L時，與PGCs增殖及減數(shù)分裂相關(guān)的基因如DAZL、VASA、SYCP3等表達(dá)增高，當(dāng)加入的RA濃度為2 μmol/L時，與生殖細(xì)胞成熟相關(guān)的基因如BOULE、TEKT1等表達(dá)增高，因此他們認(rèn)為高濃度的RA（＞ 16 μmol/L）對于PGCs增殖及進(jìn)入減數(shù)分裂有促進(jìn)作用，而低濃度的RA（2 μmol/L）可促進(jìn)后期生殖細(xì)胞的成熟。但是過高濃度的RA對細(xì)胞存在毒性，因此，在誘導(dǎo)分化過程中還需對RA的濃度以及培養(yǎng)基成分進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整和把控。

二、存在的問題及展望

為研究男性不育的發(fā)病機(jī)制，一方面，可利用ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞分化為模型研究人類生殖細(xì)胞的發(fā)育規(guī)律，另一方面，在此基礎(chǔ)上，可建立帶有人類男性不育遺傳背景的iPSCs，體外誘導(dǎo)其向雄性生殖細(xì)胞方向分化，以此為模型研究不育的發(fā)病機(jī)制。目前，在這一研究過程中還存在一些問題。（1）在重編程得到iPSCs的過程中，由于加入了外源性轉(zhuǎn)錄因子，因此得到的iPSCs可能攜帶新的遺傳特征對后續(xù)進(jìn)一步的誘導(dǎo)分化產(chǎn)生影響[41]。（2）目前，小鼠ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞分化的誘導(dǎo)體系已較為成熟，誘導(dǎo)得到的單倍體精子可與母鼠的卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵，并培育出具有生殖能力的健康后代。然而，人ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究進(jìn)展則相對比較緩慢，誘導(dǎo)得到的多是較為早期的生殖細(xì)胞，分化較為成熟的生殖細(xì)胞仍然很難誘導(dǎo)獲得。究其原因，是由于物種之間的差異，人和鼠的生殖細(xì)胞體內(nèi)發(fā)育過程并非完全一致，一些在人PGCs階段表達(dá)的基因，如作用于內(nèi)胚層的SOX17、作用于滋養(yǎng)層的TEAD4等在鼠的PGCs階段并不表達(dá)[42-43]，因此，誘導(dǎo)鼠ESCs / iPSCs向生殖細(xì)胞方向分化的方案并不完全適用于人的ESCs / iPSCs。（3）誘導(dǎo)效率比較低。在小鼠方面，例如，2013年，Li等[44]利用RA或睪酮誘導(dǎo)小鼠iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化，結(jié)果顯示僅有2%～ 8%的單倍體細(xì)胞生成。2017年，Dong等[45]誘導(dǎo)小鼠ESCs向生殖細(xì)胞方向分化，利用SSCs培養(yǎng)基誘導(dǎo)時，得到的減數(shù)分裂后細(xì)胞只有1.36%，加入RA后，誘導(dǎo)效率有所提高，但也僅有17.2%，并且未得到更加成熟的生殖細(xì)胞。在人方面，例如，2011年，Eguizabal等[46]通過依次添加 FGF2、RA、hLIF、FRSK和R115866，誘導(dǎo)人iPSCs向生精細(xì)胞方向分化，9 ～ 10周后，檢測到僅有0.4%～ 2.3%的單倍體配子生成。2012年，Easley等[47]利用添加了GDNF、FGF的培養(yǎng)基誘導(dǎo)人iPSCs向生精細(xì)胞方向分化，誘導(dǎo)10 d后，檢測到僅有3.9%的單倍體配子生成。2014年，Lim等[48]利用BMP4和RA等三步法誘導(dǎo)人ESCs向生殖細(xì)胞分化，結(jié)果僅得到3%的單倍體生殖細(xì)胞。以上實驗結(jié)果看出，利用目前的研究方案誘導(dǎo)得到單倍體配子的效率并不高。因此，體外誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的誘導(dǎo)方案還需進(jìn)一步優(yōu)化。

如今，生殖健康受到越來越多的關(guān)注，男性不育成為影響生殖健康的一大問題。為研究其發(fā)病機(jī)制，同時避開倫理和技術(shù)等方面的限制，各研究小組利用攜帶男性不育遺傳背景的iPSCs模型。在模擬精子體內(nèi)發(fā)育過程的基礎(chǔ)上，于體外誘導(dǎo)其向雄性生殖細(xì)胞方向分化，在誘導(dǎo)分化過程中，從細(xì)胞形態(tài)特征，基因表達(dá)水平，生物標(biāo)志物等多個方面，將疾病來源的iPSCs與正常人來源的iPSCs進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)兩者在發(fā)育過程中的差異，以此研究男性不育的發(fā)病機(jī)制。目前，新型基因編輯技術(shù)快速發(fā)展，尤其是CRISPR / Cas9技術(shù)被廣泛應(yīng)用，在研究男性不育的發(fā)病機(jī)制時，可利用基因編輯技術(shù)對疾病來源的iPSCs進(jìn)行基因修正，將此細(xì)胞株與攜帶疾病遺傳背景的iPSCs細(xì)胞株共同誘導(dǎo)分化，以此減少非致病因素的干擾，從而更精確地發(fā)現(xiàn)兩者發(fā)育過程中的差異，進(jìn)而更好地研究男性不育的發(fā)病機(jī)制，而得到基因修正的iPSCs作為疾病治療的種子細(xì)胞用于臨床研究。除此之外，由于在體外誘導(dǎo)ESCs / iPSCs向雄性生殖細(xì)胞方向分化的過程模擬了精子在體內(nèi)的發(fā)育過程，因此，還可利用這一模型進(jìn)行藥物胚胎毒性檢測及篩選。由此可見，ESCs / iPSCs的應(yīng)用前景廣闊，可誘導(dǎo)其向雄性生殖細(xì)胞方向分化，利用該模型研究男性不育發(fā)病機(jī)制、進(jìn)行藥物檢測及用于疾病治療，為維護(hù)和促進(jìn)生殖健康奠定重要基礎(chǔ)。