漢防己甲素大鼠在體小腸吸收動(dòng)力學(xué)研究

菲索查克+蔣偉哲+黃興振

【摘要】目的：通過大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)方法，研究漢防己甲素（TET）大鼠小腸吸收動(dòng)力學(xué)。方法：采用大鼠在體腸循環(huán)方法求算藥物的吸收速率。結(jié)果：TET在大鼠小腸內(nèi)一級(jí)吸收速率常數(shù)ka為0.7080h-1，吸收半衰期t1/2為0.9790h，剩余百分?jǐn)?shù)R%為26.51%，單位時(shí)間吸收百分率P%為36.75%。結(jié)論：TET在大鼠中吸收差。

【關(guān)鍵詞】漢防己甲素；高效液相色譜法；在體小腸吸收

【中圖分類號(hào)】R282.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）12-00-01

漢防己甲素（又名粉防己堿tetrandrine，TET） 是從粉防己的干燥塊根中提取出來的一種雙芐基異喹啉類生物堿，也是含量最高的生物堿[1]。TET具有消炎、鎮(zhèn)痛、降壓、擴(kuò)張冠脈、抗矽肺、抗凝血、抗炎、抗免疫、抗過敏、降血糖等作用[2-4]。本試驗(yàn)通過建立大鼠在體小腸[5]實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，考察TET的吸收在大鼠的吸收情況，為該藥物的藥代動(dòng)力學(xué)研究提供參考。

1 儀器與材料

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津）；UV-2201紫外分光光度計(jì)（日本島津）；TET（江西金芙蓉藥業(yè)有限公司，純度≥98%，批號(hào)： 150402）；TET對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)： 110711-200708）；甲醇為色譜純，K-R試液為自制，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 循環(huán)液的配制

TET對照品循環(huán)液：取適量TET對照品，用酚紅K-R液稀釋成質(zhì)量濃度為10 mg·L -1的溶液，超聲溶解30min，即得；TET原料藥循環(huán)液：取適量TET原料藥，用酚紅K-R液稀釋成質(zhì)量濃度為80 mg·L -1的溶液，超聲溶解30min，即得。

2.2 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線

取酚紅10 mg，精密稱定，用K-R試液稀釋至100 mL，作為貯備液。精密量取貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，用K-R試液稀釋至10 mL，得濃度為10，20，30，40，50mg·L -1的酚紅對照品溶液。取各溶液0.5mL加入0.2 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL顯色，在波長555nm處測定吸收度。以吸收度A為縱坐標(biāo)，濃度C（mg/L）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程：A=0.1695C+0.0103，r=0.9998。

2.3 漢防己甲素HPLC含量測定方法的建立

2.3.1 色譜條件

色譜柱：AichmmBond-1C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.06% 二乙胺甲醇-水（ 80：20 ）；流速：1mL/min；檢測波長：282 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20 μL[6]。

2.3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

空白溶液：取酚紅空白腸循環(huán)液1.0mL，置10mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度即得；對照品溶液：取TET對照品循環(huán)液100mL進(jìn)行腸循環(huán)2h，搖勻，取上述循環(huán)液1.0mL，置10mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度即得；供試品溶液：取TET原料藥循環(huán)液100mL進(jìn)行腸循環(huán)2h，搖勻，取上述循環(huán)液1.0mL，置10mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度即得。3個(gè)溶液按色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果顯示供試品溶液主峰保留時(shí)間與對照品一致，空白無干擾。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱定TET對照品適量，配成10mg·L -1的水溶液，精密吸取0.1，0.5，1.0，2.0，4.0 mL上述溶液，分別置10mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，分別得到質(zhì)量濃度為0.1，0.5，1.0，2.0，4.0mg·L -1的系列對照品溶液，進(jìn)樣測定，以峰面積A對濃度C（mg·L -1 ）進(jìn)行線性回歸，得方程A =16531C +507.98 （r=0.99995）。

2.3.4 精密度

取低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度（0.1，1.0，4.0mg·L -1）的TET溶液，測定日內(nèi)和日問精密度（ n=6）。結(jié)果表明，日內(nèi)RSD分別為0.87%，0.95%，1.22%；日間RSD分別為1.54%，1.28%，1.35%。

2.3.5 穩(wěn)定性

取供試品溶液，37℃水浴放置，于0，15，30，45，60min取樣測定。結(jié)果漢防己甲素質(zhì)量濃度RSD為1.84% （n=5），表明供試品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.1 實(shí)驗(yàn)方法

大鼠稱重，麻醉后加以固定。沿大鼠腹部中線打開腹腔，在十二指腸上部和回腸下部各切一小口，插入直徑為0.3cm的塑料管，結(jié)扎，并洗去腸管內(nèi)容物至凈。將腸管兩端的塑料管與膠管連接成回路。

用37℃的K-R試液以5mL·min-1流速循環(huán)10min后，然后用TET原料藥循環(huán)液以5mL·min-1流速循環(huán)5min后，將流速調(diào)節(jié)為2.5mL·min-1，立即取樣兩份（1mL和0.5mL各一份）分別作為TET和酚紅零時(shí)間樣品，另向燒瓶中補(bǔ)充酚紅K-R循環(huán)液2.0mL，每隔15min，按同法取樣及補(bǔ)加酚紅K-R循環(huán)液，共取樣9次，停止循環(huán)。

2.4.2 樣品測定

TET使用HPLC按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定；酚紅使用UV在555nm波長處測定吸收度。

2.4.3 數(shù)據(jù)處理

通過求算出漢防己甲素的濃度及酚紅的濃度按一級(jí)速率方程計(jì)算各吸收參數(shù)。

2.4.4 結(jié)果和結(jié)論

根據(jù)測定漢防己甲素在6只SD大鼠小腸內(nèi)各時(shí)間段的藥物濃度，計(jì)算出吸收常數(shù)值如表1。

漢防己甲素在大鼠小腸內(nèi)ka為0.7080h-1，t1/2為0.9790h，R%為26.51%，P%為36.75%。說明其吸收率較低。在之后的研究中，可嘗試通過改變藥物劑型、加入藥物促吸劑等方法提高藥物的吸收率。

參考文獻(xiàn)：

田代華主編.實(shí)用中藥辭典（上卷）.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.801

CHEN Yu-Jen.Potential role of tetrandrine in cancer therapy.ActaPharmacol Si n，2002， 23 （ 12） ：1102-1106

常新全，丁麗霞.中藥活性成分分析手冊.北京：學(xué)苑出版社，2002，961

Chen K，Chen AL.The alkaloids of Han-Fang-Chi.JBiol Chem，1935，109：681-685

張怡，屈勇. 丹參素的大鼠在體腸吸收動(dòng)力學(xué)研究[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2013，12：1295-1299.

馮碧敏，葉云，張昊.高效液相色譜法測定防己中粉防己堿含量[J].中國藥業(yè)，2005，11：36-37.endprint