高溫對(duì)家蠶血淋巴酚氧化酶活性的影響

楊偉克

摘要 本文對(duì)家蠶血淋巴酚氧化酶活性在高溫條件下的變化情況進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，36 ℃高溫引起家蠶血淋巴酚氧化酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其中高溫處理3 h的處理組血淋巴酚氧化酶活性上升幅度高于高溫處理1 h的處理組。

關(guān)鍵詞 高溫；家蠶；酚氧化酶；活性

中圖分類號(hào) S881 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）21-0222-01

酚氧化酶作為一類細(xì)胞免疫因子，在絲氨酸蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)及黑化過程中扮演了重要角色[1-2]。昆蟲缺乏哺乳動(dòng)物復(fù)雜的免疫球蛋白，通過體液免疫和細(xì)胞免疫抵御外源病原微生物侵染時(shí)，體液免疫應(yīng)答主要是產(chǎn)生抗菌肽，而細(xì)胞免疫應(yīng)答包括吞噬作用和黑化包被等過程。由酚氧化酶參與的黑色素形成在昆蟲免疫過程中發(fā)揮了重要的作用，能夠包被和消除入侵的外源異物及在傷口處防止血淋巴的流失。酚氧化酶是無脊椎動(dòng)物氧化殺傷系統(tǒng)中的重要免疫因子，催化氧化酚類底物生成醌，醌再經(jīng)非酶促反應(yīng)最終生成黑色素，黑色素可直接參與殺傷、抑制和凝集病原等免疫活動(dòng)[3]。關(guān)于高溫條件下家蠶酚氧化酶活性變化規(guī)律鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)家蠶五齡第3天幼蟲進(jìn)行高溫處理，探究高溫條件下血淋巴酚氧化酶活性變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

家蠶932品系，于26℃恒溫培養(yǎng)箱中，用桑葉飼養(yǎng)至五齡第3天的幼蟲。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理，即選取家蠶五齡第3天幼蟲，置于36 ℃高溫條件下分別處理1 h和3 h，以26 ℃正常飼養(yǎng)的家蠶為對(duì)照（CK）。

1.3 試驗(yàn)方法

取高溫處理后0、12、24、48 h的家蠶幼蟲血淋巴，加入0.5 mL PBS緩沖液（0.2 mol /L，pH 7.0），在4 ℃、5 000 r/min離心10 min，上清液用于酶活測定。酶活測定參照文獻(xiàn)[4]的方法：取0.2 mL酶液，加入1.3 mL磷酸緩沖液（0.2 mol /L，pH 6.8）和1.5 mL鄰苯二酚（0.2 mol/L），在25 ℃水浴中震蕩反應(yīng)15 min，在波長420 nm下測定OD值。

2 結(jié)果與分析

高溫處理后，家蠶血淋巴酚氧化酶活性變化情況如圖1所示。36 ℃高溫處理1 h和3 h的處理組均引起家蠶血淋巴酚氧化酶活性出現(xiàn)先升高的趨勢，達(dá)到一個(gè)峰值，隨后逐漸降低至與對(duì)照接近。高溫處理1 h，血淋巴酚氧化酶活性在處理后12 h達(dá)到最高值（15.36 U/mg）；而高溫處理3 h，酶活性在處理后6 h即達(dá)到最高值（20.84 U/mg）。在測定的時(shí)間范圍內(nèi)，高溫處理時(shí)間越長，家蠶血淋巴酚氧化酶活性上升越快，上升幅度也越大。

3 結(jié)論與討論

酚氧化酶參與的黑色素形成在昆蟲體液免疫過程中發(fā)揮了重要的作用，能夠包被和消除入侵的外源異物及在傷口防止血淋巴的流失。昆蟲酚氧化酶的活性和含量常用來作為評(píng)價(jià)其免疫能力大小的指標(biāo)[5-6]。陳文柱等[7]測定了家蠶血淋巴酚氧化酶的活力分布，發(fā)現(xiàn)血淋巴酚氧化酶活力在各齡初期與末期較低，在齡中期相對(duì)較高，這與家蠶各個(gè)齡期的抗性規(guī)律一致，表明血淋巴酚氧化酶與家蠶抗性存在一定的關(guān)系。

本研究結(jié)果表明，36 ℃高溫處理家蠶，酚氧化酶活性顯著升高，高溫處理時(shí)間越長，酶活性上升越快且上升幅度越大。高溫條件下，家蠶酚氧化酶活性變化是蠶體對(duì)逆境脅迫的應(yīng)激反應(yīng)和自我保護(hù)的表現(xiàn)，解析高溫引起家蠶酚氧化酶活性變化規(guī)律，可以為培育抗逆新品種提供一定的參考。

4 參考文獻(xiàn)

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