高效液相色譜法測定食用油中苯并（a）芘

陳冬蘭 石葉蓉 陳曉嵐

摘要 采用苯并（a）芘分子印跡柱做固相微萃取，用二氯甲烷洗脫食用油中苯并（a）芘，用帶有熒光檢測器的高效液相色譜（激發(fā)波長292 nm，發(fā)射波長410 nm）檢測食用油中苯并（a）芘含量。結(jié)果表明，苯并（a）芘在0.5～20.0 ng/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 91，在空白樣品中添加3 個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)品，回收率在96.8%～99.1% 之間。該法洗脫效果良好、操作簡易、靈敏度高、回收率穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜法；苯并（a）芘；食用油；分子印跡柱；熒光檢測器

中圖分類號 TS227 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號 1007-5739（2018）21-0254-01

Determination of Benzo（a）pyrene in Edible Oil by High Performance Liquid Chromatography

CHEN Dong-lan SHI Ye-rong CHEN Xiao-lan

（Rugao Comprehensive Testing Center in Jiangsu Province，Rugao Jiangsu 226500）

Abstract The benzo（a）pyrene molecularly imprinted column was used for solid phase microextraction.The benzo（a）pyrene in edible oil was eluted with dichloromethane.The excitation wavelength was 292 nm with high performance liquid chromatography with fluorescence detector.The emission wavelength was 410 nm，and the benzo（a）pyrene content in the edible oil was measured.The results showed that the linear relationship of be-nzo（a）pyrene in the concentration range of 0.5-20.0 ng/mL was good，the correlation coefficient was 0.999 91，and three levels of standard were added to the blank sample.The recovery rate was between 96.8% and 99.1%.The method had good elution effect，with the characteristics of simple operation，high sensitivity and stable recovery rate.

Key words high performance liquid chromatography； benzo（a）pyrene；edible oil；molecularly imprinted column；fluorescence detector

苯并（a）芘，英文縮寫為BaP，是一種常見的高活性間接致癌物和突變原[1]，由一個(gè)苯環(huán)和一個(gè)芘分子結(jié)合而成的多環(huán)芳烴類化合物。已經(jīng)檢查出的逾400種主要致癌物中，50%以上是屬于多環(huán)芳烴一類的化合物。食用油脂本身并不含有或很少含有此類物質(zhì)，但在種植、加工、運(yùn)輸和烹調(diào)過程中往往受到污染。世界各國規(guī)定了食用油脂中苯并（a）芘的最大殘留限量，歐盟208/2005號文件規(guī)定食用油脂中苯并（a）芘的最大限量為2 μg/kg，我國《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2716—2005）規(guī)定苯并（a）芘最大限量為10 μg/kg。

1 材料與方法

主要儀器有Agilent 1260 高效液相色譜儀（配熒光檢測器）、Agilent 固相萃取裝置、分析天平（0.000 1 g）、氮吹儀、渦旋振蕩器、Agela苯并（a）芘分子印跡柱（500 mg/6 mL）、孔徑0.45 μm的有機(jī)系微孔濾膜、棕色容量瓶等。主要試劑有純化水（HPLC級）、乙腈（HPLC級）、二氯甲烷（AR級）、正己烷（AR級）、苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mg/L，O2si公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。①標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1 μg/mL）配制：吸取0.10 mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL），用乙腈定容到10 mL。②苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg/mL）分別用乙腈稀釋得到校準(zhǔn)曲線溶液（0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL），臨用現(xiàn)配[2]。③檢測限標(biāo)液配制：配制0.2 ng/mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，臨用現(xiàn)配。

1.2.2 樣品前處理。精確稱取0.400 g試樣，加入5 mL正己烷，旋渦混合0.5 min，待凈化。將苯并（a）芘分子印跡柱固定到固相萃取裝置上，關(guān)閉閥門加入5 mL二氯甲烷靜置5 min，打開閥門，二氯甲烷自然流出，待液面降至柱床時(shí)，加入5 mL正己烷活化柱子[3]。液面降至柱床時(shí)關(guān)閉閥門。將待凈化液轉(zhuǎn)移進(jìn)柱子，打開閥門，待液面降至柱床時(shí)用6 mL正己烷淋洗柱子，棄去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。設(shè)置氮吹儀溫度40 ℃、氮?dú)饬魉? mL/min，將凈化液吹干。準(zhǔn)確吸取0.4 mL乙腈渦旋復(fù)溶0.5 min。用孔徑0.45 μm的有機(jī)系微孔濾膜過濾至液相樣品瓶[4-6]。

1.2.3 儀器分析條件。Agilent 1260 型高效液相色譜儀熒光檢測器，Poroshell 120EC-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，4 μm）；流動(dòng)相為乙腈∶水=88∶12；流速為1 mL/min；柱溫為35 ℃；激發(fā)波長為292 nm，發(fā)射波長為410 nm；進(jìn)樣量為20 μL；運(yùn)行時(shí)間為8 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 校正曲線繪制

待儀器基線穩(wěn)定后，編輯序列，將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照濃度從低到高的順序依次進(jìn)樣，采用峰面積外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得回歸方程Y=2.368 1X+0.301 7，相關(guān)系數(shù)為0.999 91。如圖1所示，在此濃度范圍內(nèi)苯并（a）芘的峰面積和濃度線性關(guān)系良好。如圖2所示，同時(shí)測得苯并（a）芘在此方法下的出峰時(shí)間為5.6 min。

2.2 精密度測定

分別進(jìn)6針0.5、5.0、20.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過6次平行樣的峰面積計(jì)算精密度如表1所示，重現(xiàn)性較好。

2.3 檢測限測定

分別按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定》（GB 5009.27—2016）方法[2]（圖3）及本試驗(yàn)方法（圖4）測定0.2 ng/mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算信噪比。GB 5009.27—2016方法測得信噪比為17.7，本試驗(yàn)方法測試信噪比結(jié)果為783，顯著高于GB 5009.27—2016方法，靈敏度較高。

2.4 加標(biāo)回收率測定

如表2所示，稱取0.4 g空白試樣3 份，添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)水平分別達(dá)到 0.04、1.60、16.0 μg/kg，充分混勻，按照本試驗(yàn)建立的方法進(jìn)行測定，3個(gè)添加水平的回收率在96.8%～99.1%之間，可以滿足分析要求。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用激發(fā)波長292 nm、發(fā)射波長410 nm檢測器參數(shù)，靈敏度高，重現(xiàn)性良好。利用苯并（a）芘分子印記柱處理樣品操作簡便、洗脫效果良好、回收率穩(wěn)定。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 劉寧，沈明浩.食品毒理學(xué)[M].北京：中國輕工業(yè)出版社，2007.

[2] 食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：GB 2716-2005[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005.

[3]食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定：GB 5009.27-2016[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[4] 董廣彬，李鵬，顧鑫榮，等.反相高效液相色譜法測定動(dòng)植物油脂中苯并（a）芘含量[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（7）：1529-1530.

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