氧化苦參堿磷脂復合物對四氯化碳致小鼠慢性腎損傷的保護作用

穆慶迪 陳新梅 杜 月 岳志敏 徐溢明

(山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東 濟南 250355；*山東大學臨床醫(yī)學院，山東 濟南 250012)

氧化苦參堿(Oxymatrine，OM)是從豆科植物苦參、苦豆子中提取得到的一種生物堿?？鄥⒆鳛樗幉氖褂檬驾d于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有清熱燥濕，殺蟲，利尿之功，現(xiàn)代醫(yī)學表明其有抗炎、抗病毒、抗肝纖維化和免疫調(diào)節(jié)、抗癌、抗腫瘤、升高白細胞、抗心率失常等多種藥理作用，且不良反應較少[1,2]。磷脂復合物 (Phytosome)是藥物和磷脂分子通過電荷遷移作用而形成的較為穩(wěn)定的化合物或絡合物。中藥活性成分與磷脂形成磷脂復合物后，可使藥物親脂性顯著增強，作用時間延長，不良反應降低[3]。氧化苦參堿，制成磷脂復合物后會大大提高生物利用度，增強療效。目前關于氧化苦參堿在治療腎損傷方面的研究較少，但是已有研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿在抑制腎纖維化方面可產(chǎn)生與苯那普利同等效果[4]，并且前期本課題組的研究同樣發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿對大鼠CCl4腎損傷具有一定的保護作用[5]，本實驗將氧化苦參堿制成磷脂復合物，考察不同劑量的氧化苦參堿磷脂復合物對腎損傷的保護作用。

1 材 料

1.1 試劑與儀器

氧化苦參堿(陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司，批號: US150415)；四氯化碳(天津市富宇精細化工有限公司，批號20160411)；大豆磷脂(上海太偉藥業(yè)有限公司，批號20150701)；橄欖油(上海嘉里食品工業(yè)有限公司，批號20150624)；氧化苦參堿磷脂復合物(本實驗室自制)；JY1002 分析天平 ( 上海精密科學儀器有限公司)；B320A型醫(yī)用低速離心機(安徽縣白洋離心機場)；5821型AU5800全自動生化分析儀(BECKMAN COULTER) 。

1.2 動物

雄性昆明小鼠，體重18～22 g，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供(動物許可證號SCXK(魯)2014-0007)。

2 方 法

2.1 動物分組

昆明小鼠72只，實驗室適應性飼養(yǎng)5 d后隨機分為6組：空白對照組、CCl4模型組、氧化苦參堿組(78 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復合物低劑量組(39 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復合物中劑量組(78 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復合物高劑量組(156 mg/kg)，每組12只。實驗過程中每日給予普通飼料及正常飲水。

2.2 模型制備及給藥

實驗過程中，除空白對照組外，其余各組均灌0.5%CCl4橄欖油溶液10 mL/kg，每周兩次，空白對照組給等量橄欖油?？瞻讓φ战M和CCl4模型組給生理鹽水，其余各組按照劑量給氧化苦參堿或磷脂復合物，給藥量為0.1 mL/10 g，每日兩次，連續(xù)8周。

2.3 體重和攝食量測定

實驗期間，每天記錄各組小鼠的攝食量，每周稱量一次小鼠體重并記錄。

2.4 血液中尿素氮和肌酐含量測定

末次給藥后，小鼠禁食12 h，正常飲水。摘眼球取血，離心，3 000 r/min×10 min，吸取上層血清，采用全自動生化分析儀檢測尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)的含量。

2.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)均采用(x±s)表示，兩組間均數(shù)比較，采用t檢驗，以p<0.05為有統(tǒng)計學差異。

3 結 果

3.1 一般情況

實驗過程中，空白組小鼠體態(tài)正常，皮毛光滑濃密，動作敏捷。模型組小鼠精神萎靡，行動緩慢，皮毛蓬松。其余各組小鼠精神、皮毛狀況好于模型組。

3.2 體重與攝食量變化情況

飼養(yǎng)過程中，各組小鼠體重整體保持均勻增長趨勢，空白組小鼠體重一直高于其他各組，并且與模型組之間存在顯著性差異，其他各組體重差異不明顯。實驗初期，各組小鼠攝食量無顯著差異；實驗后期，低劑量組和高劑量組小鼠的攝食量明顯高于其他組，空白組與OM組、中劑量組攝食量相近。根據(jù)實驗記錄，每次造模后的第二天，各組小鼠攝食量會有明顯下降，CCl4造模會對小鼠攝食量產(chǎn)生影響。

3.3 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量測定

結果如表1所示，與空白組相比，模型組的BUN和SCr水平顯著升高，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。氧化苦參堿組的BUN和SCr水平與CCl4模型組之間均存在顯著性差異(P<0.01)，氧化苦參堿磷脂復合物低、中、高劑量組的BUN和SCr水平與CCl4模型組相比均下降且差異性顯著。氧化苦參堿組與CCl4模型組間的水平差異不如中劑量組與模型組間顯著，且兩組間差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量測定Table 1 Determination of urea nitrogen (BUN) and creatinine (SCr) in blood

注：與空白組相比，*表示P<0.05; 與模型組相比，#表示P<0.05,##表示P<0.01

4 討 論

CCl4是一種典型的肝毒物質(zhì)，有研究表明CCl4腎臟的損傷主要表現(xiàn)在腎組織蛋白質(zhì)的氧化損傷[6]。前期本課題組研究發(fā)現(xiàn)連續(xù)8周灌胃CCl4可以引起大鼠腎損傷[5]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)8周給予低濃度的CCl4可以導致小鼠血清中BUN及SCr含量明顯上升，對小鼠腎臟造成一定程度損傷，表明CCl4制備小鼠腎損傷模型是成功的。氧化苦參堿各組與CCl4模型組相比，BUN和SCr水平均有明顯降低，與前期本課題組的氧化苦參堿實驗結果一致，均說明了氧化苦參堿對腎損傷的保護作用是確實顯著的。

本實驗將氧化苦參堿磷脂復合物的劑量細化，分為低、中、高三個劑量組。本次實驗中，磷脂復合物低劑量組(39 mg/kg)已經(jīng)達到與氧化苦參堿組(78 mg/kg)同等效果，并且低劑量的氧化苦參堿磷脂復合物在三個磷脂復合物組中降低作用最顯著，初步推測低劑量的氧化苦參堿在制成磷脂復合物后可以達到與單純中劑量氧化苦參堿相同的療效。將氧化苦參堿制成磷脂復合物后，提高小鼠對氧化苦參堿的吸收，從而提高了對CCl4致慢性腎損傷腎臟的保護作用。磷脂復合物在藥物制劑方面應用逐漸增多[7]，具有廣闊的前景。

[1] 陳新梅，郭輝，劉彩云 等.氧化苦參堿研究概況[A];世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會中醫(yī)藥抗病毒研究專業(yè)委員會論文集[C]；山東煙臺，2015：157～159.

[2] 段章好，陳新梅. 抗乙肝病毒中藥活性成分的研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2016，18(11)：115～118.

[3] 陳晨，金玉.氧化苦參堿對阿奇霉素大鼠慢性腎纖維化組織中核因子-κB 表達的影響[J].南方醫(yī)科大學學報，2007，27( 3)：345～348.

[4] 鄭林，李毅，鄧盛齊 等.磷脂復合物對中藥制劑口服吸收的影響[J]，中國抗生素雜志，2015，40(6)：468～473.

[5] 崔英賢，陳新梅，郭輝 等.氧化苦參堿對四氯化致大鼠慢性腎損傷保護作用的初步研究[J].化工時刊，2016，30(3)：21～23.

[6] 黃慶紅,羅明英,王歧本.藤茶總黃酮對四氯化碳所致大鼠腎損傷保護作用的初步研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2009,13( 9):2 454～2 455.

[7] 郭輝，陳新梅.中藥活性成分磷脂復合物研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2016,18(8):161～163.