白介素-35對風濕免疫性疾病診斷和治療的影響

吳秀華，魏 蔚

白細胞介素-35(Interleukin-35, IL-35)是IL-12家族新成員，主要由調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Tregs)分泌，是由α鏈p35和β鏈EB病毒誘導基因3(epstein-barr virus-induced gene3，EBI3)組成的異源二聚體。IL-35具有免疫調(diào)節(jié)功能，能夠誘導生成Tregs和調(diào)節(jié)性B細胞(regula-tory B cells, Bregs)，抑制輔助性T細胞17(T-helper cell,Th17)分化和單核細胞源性樹突狀細胞的成熟，抑制炎性部位樹突狀細胞和巨噬細胞的浸潤。風濕免疫性疾病是一組病因不明的慢性炎性反應性疾病，發(fā)病機制尚未完全闡明，目前認為在遺傳和環(huán)境因素影響下，固有免疫和適應性免疫功能紊亂參與其發(fā)病?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)IL-35在多種風濕免疫性疾病中表達異常，在誘導疾病特定的臨床表現(xiàn)中有一定的作用，本文就IL-35的生物學特點及其在風濕免疫性疾病的研究進展進行綜述，為探討風濕免疫性疾病的診斷標記和潛在的治療靶點提供新思路。

1 IL-35的生物學特點及表達

2007年Niedbala等[1]和Collison等[2]兩個研究小組首次同時報道由EBI3和p35組成的異源二聚體結(jié)構(gòu)，命名為IL-35，屬于IL-12家族成員，是一種新型的能夠抑制免疫反應的抗炎因子。EBI3亞基是EB病毒感染后由B淋巴細胞產(chǎn)生，位于人類第17對染色體，能夠編碼相對分子質(zhì)量為34 000的糖蛋白[3]，主要表達在造血細胞，而p35亞基在人類組織中廣泛表達[1]。IL-12家族成員包括IL-12、IL-23、IL-27和IL-35，均為由α鏈(p19，p28，p35)和β鏈(p40，EBI3)組成的二聚體結(jié)構(gòu)，發(fā)揮不同功能[4]。 IL-12(p35/p40)、IL-23(p19/p40)能夠促進炎性反應，IL-27(p28/EBI3)既能夠促進炎性反應，又能夠發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[4]。IL-35主要由CD4+Foxp3+Tregs產(chǎn)生[2]，也可由活化的B細胞產(chǎn)生[5]，在骨髓、胸腺、血液和肝臟組織中高表達[6-7]。IL-35受體由IL-12R β2和gp130組成[8]，IL-12Rβ2主要在活化T細胞和自然殺傷細胞表達，尤其在Th1細胞高表達[9]，在樹突狀細胞和B細胞亦有表達[6，10]，gp130在組織器官廣泛表達。IL-35與IL-12Rβ2:gp130異質(zhì)二聚體或亞基同源二聚體結(jié)合后能夠促使信號轉(zhuǎn)錄子與轉(zhuǎn)錄激活子1(signal transducers and activators of transcription1, STAT1)和STAT4磷酸化，發(fā)揮抑制炎性反應和免疫調(diào)節(jié)作用[8，11]。

2 IL-35的生物學功能

IL-35通過作用于多種適應性免疫和固有免疫細胞發(fā)揮強大的免疫抑制作用。IL35能夠誘導人類和小鼠初始T細胞轉(zhuǎn)化為新型的Foxp3-Tregs，命名為iTr35細胞。iTr35細胞不表達Foxp3，高表達EBI3和p35 mRNA，通過分泌IL-35發(fā)揮免疫抑制作用[12]。IL-35能夠限制早期T細胞G1期細胞分裂而抑制Th1和Th17細胞的增殖，從而發(fā)揮抗炎作用[13]。Hou等[14]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)IL-35注射后的小鼠IL-10、TGF-β釋放增加，而IFN-γ、IL-12和IL-17的表達減少。IL-35亦能夠通過抑制GATA3和IL-4的表達而限制Th2細胞的增殖，并調(diào)控Th2細胞向Tregs細胞轉(zhuǎn)變[15]。此外，Wang等[7]研究發(fā)現(xiàn)IL-35能夠激活STAT1信號通路誘導B細胞向Bregs細胞轉(zhuǎn)化，形成IL35+Bregs細胞，IL35+Bregs細胞與CD19+B細胞共培養(yǎng)后，B細胞增殖受到抑制，從而發(fā)揮免疫調(diào)控作用。

Chen等[16]研究發(fā)現(xiàn)在體外IL-35能夠抑制單核細胞源性樹突狀細胞的成熟，表現(xiàn)為共刺激分子CD83、HLA-DR表達顯著下調(diào)及促炎因子IL-12p70、 IFN-γ和 TNF-α分泌減少，這可能由于STAT1/STAT3異?；罨?，且p38 MAPK/NF-κB信號通路受到抑制。此外，IL-35能夠抑制炎性部位樹突狀細胞的形成和聚集[17]。巨噬細胞根據(jù)表型和分泌細胞因子的差異分為經(jīng)典活化的巨噬細胞(M1型)和替代活化的巨噬細胞(M2型)，分別發(fā)揮促炎和抗炎作用[18]。在銀屑病小鼠模型中，IL-35能夠減少脾臟及炎性皮膚部位的巨噬細胞浸潤，且M1型巨噬細胞顯著減少，而M2型巨噬細胞明顯增多[19]。

3 IL-35與風濕免疫性疾病

3.1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡

與健康人和非活動性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(syste-mic lupus erythematosus,SLE)患者相比，活動性SLE患者血清IL-35表達顯著降低，與SLE疾病活動評分(SLEDAI-2 k)、抗dsDNA抗體和血沉顯著負相關(guān)，甲強龍治療后IL-35水平升高，提示IL-35可能作為評價疾病活動性的生物學標記[20-21]。然而，另有研究報道不同的結(jié)果[22-24]。Cai等[24]研究發(fā)現(xiàn)與健康人相比，SLE患者血清IL-35和可溶性受體gp130表達增加，但gp130在CD4+Th細胞上的表達減少，以致IL-35不能夠誘導生成CD4+CD25highCD127-Tregs，抑制炎性介質(zhì)的釋放。這可能由于研究組患者使用不同的治療藥物而導致研究結(jié)果不同。此外，新近He等[21]研究發(fā)現(xiàn)，與SLE無腎炎患者相比，SLE腎炎患者血清IL-35水平顯著降低，且與肌酐、尿素氮和同型半胱氨酸水平呈負相關(guān)，與腎小球濾過率呈正相關(guān)，這表明IL-35可能為辨別SLE腎臟受累的潛在生物學標記。Cai等[25]使用MRL/lpr狼瘡腎炎小鼠模型探索了IL-35的免疫調(diào)節(jié)功能。研究發(fā)現(xiàn)，與PBS治療相比，IL-35治療MRL/lpr小鼠后狼瘡腎炎得到明顯緩解，尤其在重度活動狼瘡小鼠，表現(xiàn)為蛋白尿、白細胞尿、狼瘡復發(fā)、腎小球腎炎、間質(zhì)性腎炎以及血管浸潤評分明顯好轉(zhuǎn)，血清抗ANA抗體、抗dsDNA抗體濃度顯著下降。這可能由于IL-35治療MRL/lpr狼瘡腎炎小鼠后血漿和脾臟中IL35和IL35R水平明顯升高，誘導脾臟CD4+Th細胞向iTreg和Th2細胞分化，且CD4+CD25+Foxp3+Tregs和IL10+Bregs細胞數(shù)目增多，以致抗炎細胞因子分泌增加、促炎細胞因子分泌減少，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

3.2 類風濕關(guān)節(jié)炎

與健康人相比，類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者IL-35水平顯著降低，并與患者年齡、類風濕因子、中性粒細胞百分比呈負相關(guān)。與非侵襲性關(guān)節(jié)炎相比，侵襲性關(guān)節(jié)炎患者IL-35表達減少，表明IL-35可能對RA起保護作用[26]。IL-35能夠通過多種機制抑制RA進展。Nakano等[27]報道IL-35治療能夠抑制炎性細胞因子IL-17和IFN-γ釋放，抑制效應T細胞的增殖。IL-35亦能夠抑制膠原誘導小鼠的RANKL表達，增加OPG表達[28]，抑制血管內(nèi)皮生長因子和其受體(Flt-1 和Flk-1)[29]，抑制成纖維樣滑膜細胞的增殖并促進其凋亡，改善膠原誘導關(guān)節(jié)炎小鼠癥狀[30]。Jiang等[31]報道IL-35能夠通過下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子、生成血管生成素2誘導的MMP2、MMP9、IL-6和IL-8生成，從而抑制RA血管生成和炎性反應。另有研究發(fā)現(xiàn)IL-35可通過激活STAT1信號通路，抑制成纖維滑膜細胞中血管生成介質(zhì)VEGF, FGF-2, TNF-α 和IL-6的表達[32]。

盡管IL-35被證實是一種抑制炎性反應和免疫反應的細胞因子，但有些研究發(fā)現(xiàn)IL-35在RA的發(fā)病中發(fā)揮一定的促炎作用。Thiolat等[33]研究發(fā)現(xiàn)IL-35基因轉(zhuǎn)移至膠原誘導的關(guān)節(jié)炎小鼠后，脾臟Th17/Tregs比例增加，顯著增加疾病活動評分。與骨關(guān)節(jié)炎患者相比，初治早期RA患者血清和滑液IL-35表達增高，且滑液中IL-35表達與滑膜白細胞計數(shù)、血清C反應蛋白、DAS28評分呈正相關(guān)[34]。Filkov等[35]研究發(fā)現(xiàn)，與骨關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎相比，RA患者滑膜IL-35表達增加，主要表達在巨噬細胞、樹突狀細胞、滑膜成纖維細胞、T細胞和B細胞中，RA滑膜中IL-35受體亞基gp130亦高表達，而IL-12Rβ2亞基無明顯差異。IL-35能夠劑量依賴性的增加炎性細胞因子 IL-1β, IL-6 和 MCP-1的表達。由于IL-35可能對其他免疫細胞如自然殺傷細胞、γδ T細胞、CD8+T細胞、Th3等存在調(diào)節(jié)功能，因此IL-35的生物學效應以及其在RA中的作用機制仍有待進一步研究。

3.3 系統(tǒng)性硬化

與健康人相比，系統(tǒng)性硬化(systemic sclerosis,SSc)患者血清IL-35表達增加[36-37]，相比活動性晚期SSc患者，早期SSc患者血清IL-35表達明顯增高，表明IL-35與疾病病程呈負相關(guān)[36]。SSc患者皮膚和真皮成纖維細胞中IL-35表達亦明顯增加，并呈現(xiàn)TGF-β依賴性。TGF-β能夠誘導IL-35產(chǎn)生，反之IL-35能夠激活靜止的成纖維細胞，促進膠原蛋白的釋放，導致異常的TGF-β信號[36]。另外，Dantas等[37]研究發(fā)現(xiàn)與無肺纖維化SSc患者相比，伴有肺纖維化的SSc患者血清IL-35水平明顯增高，IL-35可能參與纖維化疾病的發(fā)生，但這有待進一步研究證明。

3.4 白塞綜合征

新近研究發(fā)現(xiàn)與健康人相比，白塞綜合征(Beh?et’s syndrom，BS)B患者血清中IL-35表達減少，且高疾病活動度患者IL-35表達水平低于低疾病活動度患者，這可能由于Th17和Tregs細胞比例隨著疾病活動狀態(tài)的不同而變化[38]。Lopalco等[39]研究發(fā)現(xiàn)相比單純皮膚黏膜受累的BS患者，皮膚黏膜伴有眼睛受累的BS患者血清IL-35高表達，這表明IL-35可能在誘導疾病特定的臨床表現(xiàn)中有一定的作用。

3.5 原發(fā)性膽汁性肝硬化

與健康人相比，原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary Biliary Cirrhosis,PBC)患者外周血單個核細胞IL-35亞基Ebi 3 mRNA水平降低，而亞基p35 mRNA水平無明顯差異，血漿IL-35表達減少，并與TGF-β水平呈正相關(guān)，與促炎因子IL-17、IL-23、IFN-γ以及肝功能指標谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶呈負相關(guān)。IL-35能夠促進Tregs細胞的抑制作用，表明IL-35可能參與PBC的發(fā)病，是診斷PBC潛在的生物標志物[40]。

3.6 原發(fā)性干燥綜合征

Fogel等[41]研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性干燥綜合征(pri-mary Sj?gren syndr-ome，pSS)患者IL-35水平顯著降低，尤其在活動性pSS患者，血細胞亞群分析，僅在B細胞中檢測到低水平的IL12p35和EBI3 mRNAs，表明血清IL-35水平與低疾病活動度相關(guān)，可能作為評價pSS疾病活動度的生物標記物。

3.7 多發(fā)性肌炎和皮肌炎

Yin等[42]報道了IL-35在多發(fā)性肌炎和皮肌炎(polymyositis and dermatomyositis,PM/DM)的表達，研究發(fā)現(xiàn)肌炎患者血清IL-35水平高于健康對照組，且伴有吞咽障礙的患者血清IL-35水平高于無吞咽障礙的患者，抗HMGCR和抗SRP抗體陽性的患者血清IL-35水平高于抗體陰性的患者。此外，血清IL-35水平與疾病病程呈負相關(guān)，與肌酸激酶、紅細胞沉降率、血清鐵蛋白以及乳酸脫氫酶水平呈正相關(guān)。這表明IL-35可作為評價疾病活動度標記物，也可作為肌炎胃腸道受累的危險因素。

4 小結(jié)

綜上所述，IL-35作為IL-12家族的一個新成員，通過作用于多種固有和適應性免疫細胞參與多種風濕免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，可能作為評價疾病活動度和疾病特定臨床表現(xiàn)的生物標記物。但是目前相關(guān)數(shù)據(jù)非常有限，IL-35對風濕免疫性疾病的促炎和抗炎作用仍存在爭議，尤其對類風濕關(guān)節(jié)炎。IL-35對自然殺傷細胞、γδ T細胞、CD8+T細胞、Th3等免疫細胞的調(diào)節(jié)作用尚未闡明，故需要進一步深入研究IL-35的生物學功能，為探討風濕免疫性疾病的發(fā)生機制和治療提供新思路。