麻風(fēng)樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及皮膚安全性的實(shí)驗(yàn)研究

錢 江，陳錦珊，文 磊，洪小蘭，田雅蘭

·論 著·

麻風(fēng)樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及皮膚安全性的實(shí)驗(yàn)研究

錢 江，陳錦珊，文 磊，洪小蘭，田雅蘭

目的探討麻風(fēng)樹葉治療蠕形螨病的應(yīng)用價(jià)值。方法用80%乙醇熱回流提取法提取麻風(fēng)樹葉提取液。取蠕形螨感染者面部皮脂，分離并鑒定蠕形螨備用。設(shè)不同濃度麻風(fēng)樹葉實(shí)驗(yàn)組、2%濃度的甲硝唑?qū)φ战M和生理鹽水對(duì)照組，進(jìn)行體外抗螨實(shí)驗(yàn)。pH儀測(cè)定不同濃度麻風(fēng)樹葉提取物pH值。設(shè)麻風(fēng)樹葉實(shí)驗(yàn)組和75%乙醇對(duì)照組，用健康家兔進(jìn)行皮膚刺激實(shí)驗(yàn)和急性皮膚毒性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果50、25、12 mg/ml麻風(fēng)樹葉組與2%甲硝唑組毛囊蠕形螨死亡時(shí)間分別為（1.55±0.67）min、（1.61±0.67）min、（2.47±0.80）min和（1.20±0.48）min。50、25 mg/ml麻風(fēng)樹葉組以及2%甲硝唑組兩兩之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。50、25、12 mg/ml麻風(fēng)樹葉提取液pH值分別為6.07±0.73、6.27±0.82、6.35±0.83，對(duì)家兔完整皮膚及破損皮膚刺激評(píng)分均為0，且無明顯毒性。結(jié)論麻風(fēng)樹葉提取物具有較強(qiáng)的體外抗蠕形螨活性且具有皮膚安全性。

麻風(fēng)樹葉；蠕形螨；抗螨

人體蠕形螨病多表現(xiàn)為面部皮膚病，治療多采用依維菌素、甲硝唑等化學(xué)藥物[1]，但治療效果不穩(wěn)定。麻風(fēng)樹大量野生于我國(guó)南方，是民間常用藥物，全身均可入藥，根、莖、皮及葉外用能起到止血、消腫散淤、殺蟲止癢的作用。已有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)樹提取物具有體外抗病毒和殺菌的作用，麻風(fēng)樹全株有殺滅釘螺作用[2-3]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)麻風(fēng)樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及其皮膚安全性進(jìn)行了初步研究。

1 對(duì)象與方法

1.1 蠕形螨的獲取 選4周內(nèi)未經(jīng)任何抗螨治療的中、重度蠕形螨感染患者，在室溫（25～30℃）適應(yīng)1 h，經(jīng)常規(guī)消毒后，用一次性刺血針鈍端用擠壓刮拭法刮取患者面部皮脂并置于潔凈載玻片上。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源 選取廈門大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的成年、健康、無皮膚性疾病的清潔級(jí)家兔（體質(zhì)量2.0～2.5 kg）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 材料與試劑 載玻片（25.4mm×75.6mm，1.0～1.2mm）、蓋玻片（24mm×24mm，0.13～0.17mm）均為鹽城市弘達(dá)醫(yī)學(xué)器材有限公司產(chǎn)品，一次性刺血針為重慶華鴻醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。95%乙醇（江西草珊瑚消毒用品有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20150917）。pH計(jì)為貝爾分析儀器（大連）有限公司BPH-210型實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)。麻風(fēng)樹葉由漳州市林業(yè)局苗圃培育中心收集提供，并均經(jīng)廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中藥教研室鑒定。

1.4 麻風(fēng)樹葉提取物的制備 取麻風(fēng)樹葉20 g，清洗后分別干燥、粉碎，用80%乙醇熱回流提取的方法制備提取物，減壓回收至乙醇無醇味。制成200 mg/ml藥液。無菌生理鹽水將麻風(fēng)樹提取液稀釋為50、25、12 mg/ml 3個(gè)濃度備用。甲硝唑制成2%濃度的甲硝唑溶液。

1.5 藥液pH值測(cè)定 分別提取10次麻風(fēng)樹葉提取物，在20℃、70%濕度下測(cè)定50、25、12 mg/ml濃度麻風(fēng)樹葉的pH值，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，數(shù)值用±s表示。同樣方法測(cè)定對(duì)照組75%乙醇的pH值。

1.6 體外抗螨實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)組為麻風(fēng)樹葉提取液50、25、12 mg/ml濃度組，陰性對(duì)照為生理鹽水組，陽性對(duì)照為2%甲硝唑藥物組。每組各觀察蠕形螨15只。在（28±1）℃室溫進(jìn)行。首先將刮取的皮脂均勻涂于各載玻片上，將光學(xué)顯微鏡（40×）下鑒定活動(dòng)良好的蠕形螨，調(diào)至視野中央，滴加等量藥液與皮脂混勻，使之與蟲體充分接觸，加蓋玻片，然后跟蹤觀察并詳細(xì)記錄其活動(dòng)變化和死亡的時(shí)間（從蠕形螨接觸藥液開始至死亡經(jīng)歷的時(shí)間）。蠕形螨顎體、足及末體停止活動(dòng)超過1 min即判為死亡。

1.7 皮膚刺激實(shí)驗(yàn) 按照文獻(xiàn)[4-5]方法進(jìn)行。

1.7.1 皮膚準(zhǔn)備 家兔分為4組，每組8只，雌雄各半，適應(yīng)環(huán)境2 d，標(biāo)記后分籠飼養(yǎng)。于給藥前24 h，先用手術(shù)剪刀在家兔背部?jī)蓚?cè)各剪出2.5cm×2.5cm面積的皮膚，再用備皮刀剃凈兔毛，不可損傷表皮。無毛區(qū)左右對(duì)稱，一側(cè)用刺血針作“井”字形劃痕的“破損皮膚”，以劃破皮膚、滲血為度。另一側(cè)為完好無破損的“完整皮膚”。

1.7.2 給藥 取的濃度為50、25、12 mg/ml麻風(fēng)樹葉提取液各0.2 ml，分別涂抹于“完整皮膚”和“破損皮膚”的2.5cm×2.5cm的面積區(qū)內(nèi)，涂藥后濕巾覆蓋，用無刺激膠布固定，重復(fù)施藥，24 h內(nèi)共施藥4次，每次0.2 ml，保證濕巾濕潤(rùn)。給藥24 h后觀察結(jié)果。以75%乙醇作陽性對(duì)照。

1.7.3 結(jié)果觀察 分別用溫開水除去受試藥物后，于1、24、48 h觀察受試部位有無紅斑、水腫等變化，根據(jù)皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（表1）進(jìn)行評(píng)分，并計(jì)算積分，積分值=（Σ1＋Σ2）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。然后依皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)表（表2）評(píng)價(jià)麻風(fēng)樹葉提取物對(duì)皮膚的刺激強(qiáng)度。

1.8 急性皮膚毒性實(shí)驗(yàn) 按照文獻(xiàn)[6]方法進(jìn)行。

1.8.1 皮膚準(zhǔn)備及給藥 家兔分為4組，每組8只，雌雄各半，去毛及給藥方法同皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Scoring standard of dermal irritation

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)Table 2 Evaluation form of skin stimulus intensity

1.8.2 結(jié)果觀察 貼敷24 h后用溫開水除去殘留藥物。給藥后詳細(xì)觀察并記錄動(dòng)物的行為表現(xiàn)和死亡情況，包括皮膚、毛發(fā)、黏膜及眼睛的改變，循環(huán)、呼吸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)、自主活動(dòng)及行為方式等相關(guān)變化，尤其注意有無流涎、震顫、驚厥、嗜睡、昏迷、腹瀉等現(xiàn)象，連續(xù)觀察2周。實(shí)驗(yàn)過程中死亡的動(dòng)物和/或有出現(xiàn)毒性反應(yīng)的動(dòng)物均進(jìn)行病理組織學(xué)鏡檢。以75%乙醇作為對(duì)照。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示。采用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較，SNK法進(jìn)行兩兩組間比較。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 pH值測(cè)定 見表3。

2.2 體外抗螨實(shí)驗(yàn) 如表4所示，麻風(fēng)樹葉組蠕形螨死亡時(shí)間明顯短于生理鹽水組。50、25、12 mg/ml麻風(fēng)樹葉組與2%甲硝唑組蠕形螨死亡時(shí)間分別為（1.55±0.67）min、（1.61±0.67）min、（2.47±0.80）min和（1.20±0.48）min，50、25 mg/ml麻風(fēng)樹葉組之間以及與2%甲硝唑組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。12 mg/ml麻風(fēng)樹葉組與50、25 mg/ml麻風(fēng)樹葉組、2%甲硝唑組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。生理鹽水組死亡時(shí)間均＞120 min。蠕形螨死亡記錄顯示：麻風(fēng)樹葉提取物作用于蠕形螨后，螨的體位逐漸固定，足和螯肢停止活動(dòng)。死亡后可見螨體收縮或破裂，破裂后外周有油滴樣堆積物。

表4 不同藥物作用下抗毛囊蠕形螨死亡時(shí)間（min）Table 4 Survival time of follicle mites under the action of different drugs (min)

2.3 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 麻風(fēng)樹葉提取物對(duì)家兔的完整皮膚和破損皮膚均無刺激性（表5）。

表5 皮膚刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 5 The result of skin irritation test

2.4 急性皮膚毒性實(shí)驗(yàn) 給藥后2周內(nèi)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)家兔活動(dòng)正常，皮膚、毛發(fā)、黏膜、眼睛無明顯改變，循環(huán)、呼吸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等方面未見異常變化，初步顯示麻風(fēng)樹葉提取物經(jīng)皮膚短期接觸吸收后未產(chǎn)生急性毒性作用。

3 討 論

蠕形螨俗稱毛囊蟲，分毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨2種，通過直接與間接方式傳播，人群普遍易感。蠕形螨可破壞皮脂腺、毛囊，引起皮脂排出通道堵塞，造成局部皮膚病理損害，常繼發(fā)細(xì)菌感染，引起毛囊炎、酒渣鼻、痤瘡、脂溢性脫發(fā)等表現(xiàn)。從健康或者醫(yī)學(xué)美容的角度出發(fā)，蠕形螨的防治日益引起重視[7-9]。蠕形螨繁殖力強(qiáng)，迅速向臨近毛囊遷徙，至今尚無特效藥治療[10]。

麻風(fēng)樹又名小油桐、芙蓉樹、黃腫樹、假花生、嗎哄罕、亮桐、南洋油桐，屬大戟科麻風(fēng)樹屬植物，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，在我國(guó)分布于云南、貴州、廣東、四川、廣西、福建等省區(qū)?，F(xiàn)代藥理研究表明，麻瘋樹的莖、葉、皮的白色乳劑內(nèi)含有毒蛋白、酮類、氰氫酸與川芍嗪等成分；果仁含油、蛋白質(zhì)、多種氨基酸、萜類、酮類、醇類物質(zhì)及衍生物以及蛋白質(zhì)和多膚等物質(zhì)。具有營(yíng)養(yǎng)、抗菌、殺病毒、殺蟲、抗腫瘤、保健等作用。作為一種新興的資源植物，麻瘋樹在新藥開發(fā)方面具有巨大的研究?jī)r(jià)值。

本研究結(jié)果初步表明，麻風(fēng)樹葉提取物具有體外抗蠕形螨作用。50、25 mg/ml麻風(fēng)樹葉提取液的體外抗蠕形螨效果與2%甲硝唑無明顯差異。12 mg/ml麻風(fēng)樹葉提取液體外抗蠕形螨效果差于2%甲硝唑。初步表明麻風(fēng)樹葉提取液體的抗螨效果與其濃度相關(guān)。體外安全性實(shí)驗(yàn)顯示：麻風(fēng)樹葉提取物對(duì)家兔的破損皮膚和完整皮膚均未引起紅斑、水腫等過敏性反應(yīng)，提示麻風(fēng)樹葉提取物對(duì)皮膚無刺激性。麻風(fēng)樹葉提取物對(duì)家兔破損皮膚和完整皮膚均無急性皮膚毒性反應(yīng)，提示麻風(fēng)樹葉提取物短期作用不會(huì)產(chǎn)生毒性反應(yīng)。50、25、12 mg/ml麻風(fēng)樹葉提取液pH值完全符合適應(yīng)皮膚的最佳pH值范圍（4.5～6.6），不會(huì)破壞皮膚表面的弱酸環(huán)境對(duì)酸、堿的一定的緩沖能力，因此不會(huì)導(dǎo)致皮膚的衰老和損害[11]。

綜上所述，麻風(fēng)樹葉提取物具有較強(qiáng)的體外抗螨作用，且具有皮膚安全性，若能進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究，有望開發(fā)研制成新的抗螨藥物。

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Anti-demodecidosis activity and skin safety ofJatropha curcas.lleaves extractin vitro

QIAN Jiang,CHEN Jin-shan,WEN Lei,HONG Xiao-lan,TIAN Ya-lan
Department of Dermatology,175 Hospital of PLA/ Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University,Zhangzhou 363000,China

ObjectiveTo test the application value of the extract ofJatropha curcas.lleaves in treatment of demodecidosis.MethodsJatropha curcas.lleaves were extracted with 80% ethanol by using heat reflux method.Facial sebum specimen from demodecidosis-infected patients were used to isolate and identify demodecidosis.Different concentration groups ofJatropha curcas.lleaves,2% metronidazole control group and physiological saline control group were defined.The anti-demodecidosis experiment was performedin vitro.The pH value of different concentrations ofJatropha curcas.lleaves extract was determined.Skin irritation test and acute skin toxicity test were carried out in healthy rabbits,andJatropha curcas.lleaves and 75% ethanol served as experiment and control groups,respectively.ResultsThe mite-killing time was (1.55±0.67) min with 50 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,(1.61±0.67) min with 25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,(2.47±0.80) min with 12 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,and (1.20±0.48)min with 2% metronidazole.There was no significant different between 50,25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract groups and 2%metronidazole group (P＞0.05).The pH value was 6.07±0.73 of 50 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,6.27±0.82 of 25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract and 6.35±0.83 of 12 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract.Score for irritation to normal and wounded rabbit skin was both 0,and acute toxicity test showed no significant toxicity.ConclusionsJatropha curcas.lleaves extract shows a remarkable activity to demodecidosis with skin safetyin vitro.

Jatropha curcas.lleaves; demodecidosis; anti-demodecidosis

R757.3

A

1007-8134(2017)06-0355-03

10.3969/j.issn.1007-8134.2017.06.010

漳州市自然科學(xué)基金（ZZ2014J33）

363000 漳州，解放軍第一七五醫(yī)院 廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院皮膚科（錢江、陳錦珊、洪小蘭、田雅蘭）；361000，廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系（文磊）

（2017-09-26收稿 2017-10-25修回）

（本文編輯 張?jiān)戚x）