工廠化栽培草菇適宜優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株的篩選與分析

曲玲+任海霞+萬魯長+謝紅艷+郭惠東+沈秀芬+任鵬飛

摘要：山東省草菇栽培面積大，工廠化生產(chǎn)發(fā)展較快，但是適宜的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株相對(duì)缺乏，常規(guī)菌株種性退化嚴(yán)重。本試驗(yàn)對(duì)初篩的6個(gè)草菇菌株以玉米芯為主要栽培基質(zhì)進(jìn)行品比優(yōu)選試驗(yàn)。結(jié)果表明：V1172、VSD-1岀菇較早，產(chǎn)量高，但子實(shí)體菌苞較薄，易開傘；V1296、V1295產(chǎn)量較高，長勢(shì)好，出菇期集中，子實(shí)體菌苞較厚，商品性好；V9715、V選育10產(chǎn)量明顯低于其它菌株，但V選育10子實(shí)體菌苞厚，耐儲(chǔ)存。綜合分析比較認(rèn)為：V1296、V1295表現(xiàn)最佳，適宜山東工廠化栽培推廣。

關(guān)鍵詞：草菇；菌株；篩選；高產(chǎn)；商品性

中圖分類號(hào)：S646.1+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2017）12-0029-04

Abstract The cultivated area of Volvaria volvacea in Shandong Province is very large， and its industrialized production is developing fast. However， the good-quality and high-yield strains suitable for industrialized production are relatively lacking， and the characteristics of conventional strains degrade seriously. Six Volvaria volvacea strains selected through preliminary test were further compared with corncob as main cultivation substrate. The results showed that strains V1172 and VSD-1 had the characteristics of earlier sporophore forming and high yield， but thinner biofilm and easily opened pileus. The strains V1296 and V1295 had higher yield， good growth vigor， concentrated fruiting period， thick biofilm and good commercial characteristics. The yield of V9715 and V Xuanyu10 were significantly lower than that of the other strains， and V Xuanyu10 had thicker biofilm， which indicated storage stability. By comprehensive analysis， the strains V1296 and V1295 performed optimal， so they were suitable for industrial cultivation and popularization.

Keywords Volvaria volvacea； Strain； Screening； High yield； Commercial characteristics

草菇（Volvariella volvacea）隸屬真菌門擔(dān)子菌綱傘菌目光柄菇科小包腳菇屬，又稱蘭花菇、美味草菇、中國蘑菇。據(jù)考證，草菇最早栽培于我國，距今已有200多年歷史。近年來，一些歐美國家也開始栽培，我國草菇生產(chǎn)量居世界首位。草菇不僅味道鮮美，而且營養(yǎng)價(jià)值很高，含人體必需的8種氨基酸，以及9.81%～18.4%的纖維素；草菇中核酸含量較高，還含有還原糖和轉(zhuǎn)化糖，都是人體的必需營養(yǎng)成分。此外，草菇中還含有一種叫做異種蛋白的物質(zhì)，可以增強(qiáng)機(jī)體的抗癌能力，其含氮浸出物嘌呤堿又能抑制癌細(xì)胞的生長。因此，草菇是一種營養(yǎng)豐富的“保健食品”。近幾年，國內(nèi)多家草菇工廠化企業(yè)已建成并投入生產(chǎn)，但工廠化配套栽培技術(shù)不完善，缺乏工廠化專用菌株。本研究對(duì)6個(gè)草菇菌株進(jìn)行栽培，通過對(duì)其菌絲體生長階段和子實(shí)體生長階段進(jìn)行比較，篩選適宜工廠化栽培的菌株，以期為工廠化草菇栽培提供菌種選擇依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌種為VSD-1、V選育10、V1172、V9715、V1295、V1296共6個(gè)草菇菌株，母種分別由福建農(nóng)林大學(xué)菌物研究中心和山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所提供。

母種培養(yǎng)基：加富PDA培養(yǎng)基；

原種培養(yǎng)基配方：玉米芯83%、麩皮10%、石灰5%、石膏2%；

栽培種培養(yǎng)基配方：玉米芯86%、稻草10%、石灰4%。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，每處理3次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。小區(qū)面積10 m2，共18個(gè)小區(qū)。在（30±2）℃、相對(duì)濕度65%～70%的條件下岀菇，由多年種植經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員進(jìn)行管理。試驗(yàn)前已對(duì)6個(gè)草菇菌種進(jìn)行活化、復(fù)壯、擴(kuò)大培養(yǎng)，使菌齡在同等水平下參加試驗(yàn)。

1.2.1 不同草菇菌株菌絲體階段比較 （1）母種階段菌絲生長情況比較。按照供試母種培養(yǎng)基配方制備母種培養(yǎng)基，采用培養(yǎng)皿（90 mm×18 mm）分裝30 mL培養(yǎng)基，121℃滅菌40 min，冷卻后備用，按照常規(guī)方法接種、培養(yǎng)，在菌絲生長期間對(duì)母種生長情況記錄。（2）原種階段菌絲生長情況比較。干料先混合均勻，再加水調(diào)至含水量70%。把配好的料堆成高1.5 m的梯形堆，發(fā)酵3 d。按常規(guī)方法裝瓶（罐頭瓶），經(jīng)0.15 MPa高壓滅菌3 h，冷卻后，在無菌條件下對(duì)6個(gè)草菇菌株進(jìn)行接種，每個(gè)菌株接20瓶。菌絲生長期間對(duì)原種進(jìn)行生長情況的調(diào)查與記錄。endprint

1.2.2 不同草菇菌株子實(shí)體階段比較 （1）子實(shí)體農(nóng)藝性狀比較。每個(gè)處理第一潮菇的子實(shí)體采收時(shí)，每小區(qū)隨機(jī)選取子實(shí)體，用游標(biāo)卡尺測量子實(shí)體菌苞厚度、大小等。（2）子實(shí)體產(chǎn)量比較。記錄每潮菇產(chǎn)量，岀菇結(jié)束后統(tǒng)計(jì)每個(gè)處理總產(chǎn)量。

1.2.3 草菇菌株基因組的SRAP-PCR 通過對(duì)6個(gè)草菇菌株基因組的SRAP-PCR檢測，清晰了解各品種之間親緣關(guān)系，區(qū)分有無同種異名現(xiàn)象，對(duì)工廠化生產(chǎn)選擇高產(chǎn)菌種起到快捷作用。提取草菇菌株的DNA，用引物（me6、em14）對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測和分析。

me6：5′-TGAGTCCAAACCGGTAG-3′； em14：5′-GACTGCGTACGAATTCAG-3′。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同草菇菌株菌絲體階段比較

2.1.1 母種菌絲生長情況比較 由表1可見，在母種培養(yǎng)基上，V1295、V1296、V9715菌絲生長速度較快，分別為15.0、14.9、14.9 mm/d，V選育10菌絲生長速度最慢，為13.1 mm/d； V選育10菌絲顏色為白色、菌絲濃密度為較濃密、邊緣整齊度為較整齊，明顯不同于其他菌株，其他5個(gè)菌株在菌絲顏色、菌絲濃密度、邊緣整齊度上基本無差別。

2.1.2 原種階段菌絲生長情況比較 由表2可見，V1172菌絲長速較快，3 d長速為2.3 cm，VSD-1長勢(shì)最慢，僅1.6 cm，除VSD-1外，其他菌株原種菌絲生長速度差異不顯著，但極顯著高于VSD-1。V1172、V9715有厚垣孢子形成，其他供試菌株均不產(chǎn)生厚垣孢子。V9715、V選育10菌絲生長濃密，V1296、V1295、V1172菌絲較稀疏。

2.2 不同草菇菌株子實(shí)體階段比較

2.2.1 子實(shí)體農(nóng)藝性狀比較 由表3可以看出，6個(gè)草菇菌株生長方式為叢生，菌苞厚度略有差異，VSD-1、V1172菌苞相對(duì)較薄，分別為1.1、1.3 mm，V選育10菌苞最厚，為3.0 mm。6個(gè)草菇菌株子實(shí)體在形狀上略有差異，VSD-1、V1172為錐形，V選育10為球形，V1296、V1295、V9715為橢圓形。VSD-1子實(shí)體灰黑色，顏色較深于其他菌株，V1296、V選育10顏色略淺，VSD-1、V1172錐形、菌苞較薄，V選育10球形、菌苞較厚；V1296、V1295、V9715橢圓形、菌苞厚薄中等。

2.2.2 子實(shí)體產(chǎn)量比較 由表4可以看出，6個(gè)草菇菌株現(xiàn)蕾時(shí)間和采收時(shí)間差異不大。從子實(shí)體產(chǎn)量上看，V1172產(chǎn)量最高，VSD-1、V1296、V1295中等，V9715、V選育10較低。從不同草菇菌株岀菇特性上看，VSD-1、V1172子實(shí)體菌苞較薄，易開傘；V1296、V1295、V9715子實(shí)體菌苞中等；V選育10子實(shí)體菌苞較厚，耐運(yùn)輸。

2.3.3 不同草菇菌株基因組的SRAP-PCR圖譜比較 用一對(duì)引物（me6、em14）對(duì)6個(gè)草菇菌株的基因組進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過凝膠電泳檢測，結(jié)果（圖1）發(fā)現(xiàn)，6個(gè)菌株的DNA擴(kuò)增條帶有10條，分子量分別為2 500、1 800、1 400、1 000、850、500、450、300、200、100 bp。

其中V1295、V1296、V1172的DNA擴(kuò)增條帶有分子量1 800、1 400、1 000、850、500、450、200、100 bp的條帶；V9715有分子量2 500、1 800、1 400、1 000、850、500、450、200、100 bp的特異性擴(kuò)增條帶；VSD-1的DNA擴(kuò)增條帶有分子量450、300、100 bp的條帶；V選育10有分子量450、200、100 bp的特異性擴(kuò)增條帶。根據(jù)每個(gè)菌株擴(kuò)增條帶數(shù)目及分子量的大小可看出V1295、V1296、V1172親緣關(guān)系較近；V9715比V1295、V1296、V1172多一條2 500 bp的特異性條帶；VSD-1和V選育10都無大分子條帶。凝膠圖像在一定程度上也可以反應(yīng)草菇樣品的地理來源，V1295、V1296、V1172、V9715為南方菌株，擴(kuò)增條帶明顯與其他兩個(gè)菌株不同。

3 結(jié)論

在菌絲體階段，母種菌絲V1295生長速度最快；V1296、V9715沒有差異，生長速度為較快；V選育10菌絲生長速度最慢，但菌絲長勢(shì)較好，菌絲白色、較濃密、邊緣較整齊。原種菌絲V1172生長速度最快，V1295、V1296生長速度較快，VSD-1菌絲生長速度最慢，V選育10菌絲生長勢(shì)最好。

在子實(shí)體階段，VSD-1子實(shí)體灰黑色，V1296、V選育10子實(shí)體顏色略淺，其他菌株差異不顯著。VSD-1、V1172子實(shí)體錐形，V選育10子實(shí)體球形，V1296、V1295、V9715均為橢圓形。V1172、VSD-1子實(shí)體菌苞較薄，易開傘，V選育10子實(shí)體菌苞最厚，耐儲(chǔ)存、耐運(yùn)輸。V1296、V1295、V9715子實(shí)體菌苞厚薄中等。

子實(shí)體產(chǎn)量最高的為V1172，其次為VSD-1、V1296、V1295，子實(shí)體產(chǎn)量較低的為V9715、V選育10。

6個(gè)草菇菌株基因組擴(kuò)增條帶表明，V1295、V1296、V1172親緣關(guān)系較近，VSD-1和V選育10擴(kuò)增條帶明顯與其他菌株不同。草菇在一定程度上出現(xiàn)了地理分化，在不同地理環(huán)境下出現(xiàn)遺傳差異。

工廠化栽培的草菇品種很多，選擇適宜工廠化栽培的草菇品種主要包括高產(chǎn)、抗病性、商品性等方面，其中商品性包括子實(shí)體大小、顏色、菇形、是否易開傘等。本研究4月份通過初篩獲得適宜工廠化栽培6個(gè)草菇菌株，綜合本次試驗(yàn)結(jié)果，V1295、V1296兩個(gè)菌株在商品性等方面優(yōu)于其他品種，適宜工廠化栽培，有成為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌株的潛力。

參 考 文 獻(xiàn)：

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