玫瑰花水煎劑對小鼠耐缺氧和抗疲勞的實驗研究

劉華，何帥，黃芳俊，趙季軍， 王明友，周芳名，買文麗

(1.川北醫(yī)學院生理教研室；2.川北醫(yī)學院機能中心；3.川北醫(yī)學院2015級臨床醫(yī)學系；4.川北醫(yī)學院2014級臨床醫(yī)學系，四川 南充 637000)

玫瑰花水煎劑對小鼠耐缺氧和抗疲勞的實驗研究

劉華1,2，何帥3，黃芳俊3，趙季軍3， 王明友3，周芳名4，買文麗1

(1.川北醫(yī)學院生理教研室；2.川北醫(yī)學院機能中心；3.川北醫(yī)學院2015級臨床醫(yī)學系；4.川北醫(yī)學院2014級臨床醫(yī)學系，四川 南充 637000)

目的觀察不同濃度的玫瑰花水煎劑對小鼠耐缺氧和抗疲勞的影響。方法昆明小鼠共60只，隨機分為空白對照組(蒸餾水)、玫瑰花水煎劑低劑量組(0.25 g/kg)、玫瑰花水煎劑高劑量組(0.50 g/kg)，灌胃給藥28 d。檢測各組小鼠常溫常壓耐缺氧時間、負重游泳時間、血中血紅蛋白的含量和負重游泳后乳酸含量。結果與空白對照組相比，高、低劑量組常溫常壓耐缺氧時間延長，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；高、低劑量組小鼠負重游泳時間均延長，但低劑量組無顯著性差異(P>0.05)，高劑量組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；高、低劑量組血紅蛋白含量均增多，高劑量組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異(P>0.05)；負重游泳后，高、低劑量組血乳酸含量均減少，高劑量組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異(P>0.05)。結論玫瑰花水煎劑能明顯提高小鼠耐缺氧和抗疲勞能力。

玫瑰花水煎劑；耐缺氧；抗疲勞

玫瑰花為薔薇科薔薇屬多年生灌木植物玫瑰的花蕾，玫瑰花藥用價值極高。歷代本草均有玫瑰花在藥用方面的記載,具有行氣解郁、和血、止痛等功效，主治用于肝胃氣痛、食少嘔惡、月經(jīng)不調(diào)、跌撲傷痛[1]。近年來研究證實玫瑰花具有清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、擴張血管、解毒、利膽等作用[2-5]，可能與玫瑰花成分有關，玫瑰花富含黃酮和多酚類化合物、可溶性多糖和糖蛋白復合物[6]、氨基酸[7]以及多種微量元素[8]有關。但有文獻報道[9-10]，玫瑰花中的多酚可提高小鼠機體運動耐力，延遲疲勞出現(xiàn)的時間，但是玫瑰花水煎液耐缺氧和抗疲勞的作用以及機制的研究較少，本課題通過觀察玫瑰花水煎劑對小鼠常溫常壓耐缺氧時間、負重游泳時間、血中血紅蛋白的含量和負重游泳后乳酸含量的影響，研究玫瑰花在人體抗疲勞和耐缺氧方面的藥理價值，為其開發(fā)及利用提供可靠的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明小鼠60只(健康級)，雄性，體重(20±2)g，鼠齡6周，購自川北醫(yī)學院實驗動物中心，合格證好：SOXK(川)2013-18，許可證號：SYXK(川)2013-076，飼養(yǎng)于通風清潔級動物房，標準鼠籠喂養(yǎng)，自由飲食，22～26 ℃，相對濕度50%～70%，通風良好。

1.2 藥物與試劑

1.2.1 藥物 玫瑰花，原產(chǎn)地新疆(湖南省博士康中醫(yī)藥股份有限公司提供)，凈選玫瑰花，粉碎成粗粉，水煎提取，制成100%濃度(相當于1 mL含 l g 生藥)的水煎液備用。

1.2.2 試劑 小鼠乳酸測定試劑盒(合肥萊爾科技有限公司,批號：201708)；小鼠血紅蛋白測定試劑盒(合肥萊爾科技有限公司，批號：201708)；紅細胞裂解液(上海橋星貿(mào)易有限公司, 批號：67057250)。

1.3 實驗儀器

賽默飛Sorvall Legend micro 17微量離心機，產(chǎn)地德國；可控調(diào)溫電爐；EMax Plus Microplate Reader酶標儀,Molecular Devices公司；游泳箱直徑1.5 m×高0.5 m,成都泰盟科技有限公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 分組與給藥 將60只小鼠隨機分為正常對照組、低劑量組(0.25 g/kg)、高劑量組(0.50 g/kg)，每組20只。各劑量組連續(xù)灌胃28 d，每日1次。正常對照組給予等容積蒸餾水。

1.4.2 常溫常壓耐缺氧實驗 末次給藥30 min后，將3組小鼠每組10只，分別放入盛有5.0 g鈉石灰、容量為500 mL的廣口瓶內(nèi)，加蓋并瓶口用凡士林密封并記時， 觀察并記錄小鼠在瓶內(nèi)的呼吸情況和死亡時間，死亡時間以胸廓起伏運動完全停止作為判斷標準。

1.4.3 小鼠負重游泳實驗 游泳箱加水至水深30 cm，水溫保持在(25±1)℃。隨機挑選每組10只小鼠，用質(zhì)量為小鼠體重10%的鉛皮固定于小鼠尾根部，放于水池內(nèi)讓其自由游泳，記錄小鼠從游泳開始至下沉時間(將小鼠口鼻沉入水下6 s，不能浮出水面作為力竭指標)，作為其負重游泳時間。

1.4.4 小鼠血乳酸含量的測定 小鼠負重游泳3 min后，腹腔注射1%肝素(0.2 mL)，5 min 內(nèi)摘眼球取抗凝血于500 μL于1 mL EP管內(nèi)。置于離心機中以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心30 min，分離血漿和血細胞。按試劑盒說明書測定血漿中乳酸的含量。

1.4.5 小鼠血紅蛋白含量的測定 往1.4.4中血細胞內(nèi)加入8倍體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解 2 min。然后將其置于離心機以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，取紅色上清液。按試劑盒說明書測定血液中血紅蛋白的含量。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 小鼠一般情況

實驗喂養(yǎng)期間各組小鼠表現(xiàn)狀況良好，未觀察到任何異常，小鼠正常生長。

2.2 玫瑰花水煎劑對小鼠常溫常壓耐缺氧的影響

常溫常壓耐缺氧實驗結果顯示，高、低劑量組的耐缺氧時間均高于空白組，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 玫瑰花水煎劑對小鼠溫常壓耐耐缺氧的影響(n=10)

*P<0.05，與空白組比較。

2.3 玫瑰花水煎劑對小鼠抗疲勞的影響

由表2可以看出，與空白組對照，灌服玫瑰花水煎液的高、低劑量組負重游泳時間均高于空白組，其中高劑量組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異(P>0.05)。血乳酸檢測結果顯示，高、低劑量組血中的乳酸含量均低于空白組，高劑量組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異。

表2 玫瑰花水煎劑對小鼠抗疲勞指標的影響(n=10)

*P<0.05，與空白組比較。

2.4 玫瑰花水煎劑對小鼠血紅蛋白含量的影響

血紅蛋白檢測結果顯示，高、低劑量組血中的血紅蛋白均高于空白組，高劑量組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

表3 玫瑰花水煎劑對小鼠血紅蛋白含量的影響(n=10)

*P<0.05，與空白組比較。

3 討論

疲勞是一種普遍的生理現(xiàn)象，主要包括精神疲勞和軀體疲勞兩種。在我國因為過度疲勞致病甚至致死的病例數(shù)逐年增加，全球調(diào)查顯示35%人群處于疲勞狀態(tài)。在運動過程中，當生理過程不能繼續(xù)維持在特定水平上或不能維持預訂的運動強度時，既稱之為運動性疲勞。運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最直接的表現(xiàn)[11]，小鼠疲勞狀況和運動耐力的常用實驗方法為小鼠負重游泳實驗。本研究以非耐力訓練的小鼠為研究對象，實驗結果表明，玫瑰花水煎劑高、低劑量組均不同程度地延長小鼠的負重游泳時間，高劑量組可以把負重游泳時間從(1 085±94)s提高(1 260±119)s，說明玫瑰花水煎劑可以提高小鼠的運動耐力，具有良好的抗疲勞作用。劇烈的運動將導致機體相對缺氧、糖酵解加快，進而產(chǎn)生大量的乳酸，乳酸過多導致機體內(nèi)環(huán)境的破壞，誘發(fā)疲勞，因此，乳酸可作為反映機體的有氧代謝能力和疲勞程度的重要指標[12]。本研究顯示玫瑰花水煎劑可以降低小鼠血液中的乳酸含量，從而減輕乳酸的堆積。我們推測，玫瑰花水煎劑可通過降低乳酸生成來降低肌肉中的氫離子濃度，恢復鈣離子的生理活性，提升肌肉的收縮力量，對抗疲勞。

缺氧是一種緊張性刺激，可引起機體產(chǎn)生各種應激反應，最終導致對生命活動的重要器官心、腦的危害而死亡，因此對缺氧耐受的研究具有十分重要的意義。常用的模型是小鼠常壓缺氧模型，實驗顯示，玫瑰花水煎液高、低劑量組在常壓下的缺氧存活時間均延長，說明起有顯著的抗常壓缺氧的作用。并且還證實高、低劑量組血紅蛋白的含量均增加，其中高劑量組有顯著性提高。

血紅蛋白的功能是增加血液中氧的攜帶量，可延長小鼠在常壓缺氧條件下的存活時間。本實驗結果顯示，玫瑰花水煎液可提高高、低劑量組血紅蛋白的含量，其中高劑量組有顯著性提高，其機制與增加氧的供給,從而增強組織細胞的有氧氧化能力，使組織內(nèi)三磷酸腺苷的濃度升高，減少糖酵解，降低血中乳酸含量有關[13]。同時，氧的供給增加還有助于加速乳酸的清除，也可以對抗疲勞。

因此本研究認為，玫瑰花水煎劑對通過延長小鼠負重游泳時間和常壓耐受存活試劑，降低乳酸水平，具有耐缺氧和抗疲勞的作用，其作用機制有待于進一步探討。

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Studyontheanoxia-resistantandanti-fatigueeffectofRosewaterdecoctiononmice

LIU Hua1,2,HE Shuai3,HUANG Fang-jun3,ZHAO Ji-jun3,WANG Ming-you3,ZHOU Fang-ming4，MAI Wen-li1

(1.PhysiologyDepartmentofNorthSichuanMedicalCollege;2.FunctionCenterofNorthSichuanMedicalCollege;3.DepartmentofClinicalMedicine,level2015,NorthSichuanMedicalCollege;4.DepartmentofClinicalMedicine,level2014,NorthSichuanMedicalCollege,Nanchong637000,Sichuan,China)

Objective：To investigate the anti-hypoxia and anti-fatigue effect of Rose water decoction in mice.Methods60 Kunming mices were randomly divided into high-dose group(0.50 g/kg ) ，low-dose group ((0.25 g/kg) and blank control group,and administered with drugs at certain doses by gastric perfusion for 28 d.The time of hypoxia tolerance and the time of weight-bearing swimming were measured in each group of mice.The content of hemoglobin in blood and the content of lactic acid after weight swimming were detected.ResultsCompared with the blank group,the high and low dose group had a significant difference in the prolonged hypoxia-resistance time in normal temperature(P<0.05).The weight-bearing swimming time of mice in high and low dose groups was prolonged,but there was no significant difference in the low dose group (P>0.05),and the high dose group had statistical significance (P<0.05).The hemoglobin content of high and low dose group was increased,the high dose group had significant difference (P<0.05),and the low dose group had no significant difference (P>0.05).The content of blood lactic acid decreased after weight-bearing swimming,and the change in high dose group was more than the low dose group.ConclusionThe decoction of rose water can remarkably improve the ability of anti-fatigue and anoxia-resistant in mice.

Rose water decoction；Anti-fatigue；Anoxia-resistant

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.06.011

四川省教育廳項目(16ZB0238)；省級大創(chuàng)課題(201610634050)；川北醫(yī)學院校級重點項目(CBY11-A-ZP17)

2017-06-30

劉華(1974-)，女，碩士，副教授。

買文麗，E-mail:4209991160@qq.com

時間： 2017-12-27 16∶44網(wǎng)絡出版地址http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171227.1643.022.html

1005-3697(2017)06-0849-03

R932

A

(學術編輯：鄭倩)