微小RNA-1表達(dá)水平與高血壓左心室肥厚的關(guān)系

司煜安

（江蘇省江陰市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇江陰214400）

微小RNA-1表達(dá)水平與高血壓左心室肥厚的關(guān)系

司煜安

（江蘇省江陰市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇江陰214400）

目的探討微小RNA（microRNA，miRNA）與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性。方法選取50例高血壓患者及50例高血壓左心室肥厚患者，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)血漿中miRNA-1表達(dá)水平，分析miRNA-1表達(dá)水平與左心室相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性，應(yīng)用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評(píng)價(jià)miRNA-1對(duì)高血壓左心室肥厚的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果高血壓左心室心肥厚組室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑、左心室質(zhì)量指數(shù)及miRNA-1表達(dá)水平均顯著高于高血壓組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。miRNA-1表達(dá)水平與室間隔厚度（r=0.382，P=0.002）、左心室壁厚度（r=0.411，P=0.001）、左心室舒張末期內(nèi)徑（r=0.285，P=0.023）、左心室質(zhì)量指數(shù)（r=0.492，P=0.000）呈正相關(guān)。miRNA-1預(yù)測(cè)高血壓左心室肥厚的ROC曲線下面積為0.937（95%CI：0.875～0.962，P＜0.05）。結(jié)論miRNA-1表達(dá)與高血壓左心室肥厚發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，miRNA-1可能是高血壓左心室肥厚特異性診斷的潛在標(biāo)志物。

高血壓；微小RNA-1；左心室肥厚

左心室肥厚是高血壓常見(jiàn)靶器官損害之一，其發(fā)生率約為10%～40%。高血壓左心室肥厚可進(jìn)展為心力衰竭甚至猝死，嚴(yán)重威脅患者生命安全［1］。因此，開(kāi)展高血壓左心室肥厚早期診療對(duì)于改善患者的臨床預(yù)后具有十分重要的意義。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，其可通過(guò)與下游靶基因的 3′-非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）相結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)靶基因產(chǎn)生調(diào)控作用，從而參與一系列病理生理過(guò)程［2］。研究證實(shí)，miRNA的表達(dá)失調(diào)或功能異常在高血壓左心室肥厚的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［3］。miRNA-1是心肌特異性miRNA，其表達(dá)與心臟發(fā)育密切相關(guān)［4］。但miRNA-1與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探討miRNA-1對(duì)高血壓左心室肥厚的預(yù)測(cè)價(jià)值，以期為高血壓左心室肥厚的臨床診療提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2015年10月至2016年10月江陰市人民醫(yī)院收治的高血壓患者為研究對(duì)象，按超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果分為高血壓左心室肥厚組和高血壓組：左心室肥厚組50例，男24例，女26例，年齡（69.9±10.2）歲；高血壓組50例，男22例，女28例，年齡（72.3±13.5）歲。兩組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.161，P=0.688；t=0.202，P=0.850）。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90 mmHg。左心室肥厚診斷標(biāo)準(zhǔn)：左心室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）＞125 g/m2（男）和＞110 g/m2（女）。

1.2 血樣采集與檢測(cè)

抽取患者清晨空腹肘靜脈血5 mL，采用日立全自動(dòng)生化分析儀7600檢測(cè)總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triacylglycerol，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、血肌酐（creatinine，Cr）、尿酸（uric acid，UA）。

1.3 超聲心動(dòng)圖檢查方法

采用飛利浦IE33型彩色超聲儀，探頭頻率設(shè)置為2.5～3.5 MHz，由同一超聲科醫(yī)師測(cè)量室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑，左心室質(zhì)量=0.8×1.04×［（室間隔厚度+左心室壁厚度+左心室舒張末期內(nèi)徑）3-左心室舒張末期內(nèi)徑3］+0.6，LVMI=左心室質(zhì)量/體表面積。

1.4 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)miRNA- 1方法

取適量血漿樣本，按TRIzol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，DEPC水溶解，取1 μLRNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性，采用Bio-Rad檢測(cè)RNA純度及濃度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系為20 μL，冰上依次加入以下試劑：1 μmol/L逆轉(zhuǎn)錄特異性引物3 μL、10×RT buffer 1.5 μL、100 mmol/L dNTPs 0.15 μL、50 U/μL MultiScribeTMReverse Transcriptase 1.0 μL、20 U/μL RNA 酶抑制劑 0.19 μL、總 RNA 1 μL，加DEPC水補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件：16℃反應(yīng)30 min，42℃反應(yīng)30 min，85℃反應(yīng)5 s，產(chǎn)物-20℃保存?zhèn)溆谩iRNA-1逆轉(zhuǎn)錄引物序列：5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACATACAC-3′；U6逆轉(zhuǎn)錄引物序列：5′-CGCTTC ACGAATTTGCGTGTCAT-3′。按照聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為20 μL，冰上依次加入以下試劑：逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 1 μL、引物1 μL、TaqMan GEx MASTER Mix 10 μL，加雙蒸水補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件：95℃反應(yīng)10 min，92℃反應(yīng)15 s，60℃反應(yīng)1 min，共40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，ΔCt值=miR-320Ct值-U6Ct值。MiRNA-1引物序列：正向 5′-CGGCGGTGGAATGTAAAGAAGT-3′，反向5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；U6引物序列：正向5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（）表示，組間比較用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用［n（%）］表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用Spearman相關(guān)分析來(lái)分析miRNA-1與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性，以受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評(píng)價(jià)miRNA-1對(duì)高血壓左心室肥厚的預(yù)測(cè)價(jià)值。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較

兩組性別、年齡、SBP、DBP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Cr、UA、空腹血糖比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 兩組基線資料比較 ［n=50，±s］

表1 兩組基線資料比較 ［n=50，±s］

組別高血壓左心室心肥厚組高血壓組t值P值SBP（mmHg）155.1±21.3 157.8±17.4 0.049 0.978 DBP（mmHg）88.2±14.9 87.3±11.5 0.062 0.963 TC（mmol/L）5.1±1.8 5.4±2.0 0.113 0.924 TG（mmol/L）2.5±1.6 2.4±1.4 0.058 0.964 HDL-C（mmol/L）2.1±0.9 2.2±0.8 0.127 0.919 LDL-C（mmol/L）3.0±1.1 2.9±1.0 0.113 0.924 Cr（μmol/L）108.3±54.6 105.4±59.7 0.212 0.843 UA（mmol/L）248.5±82.6 244.7±88.4 0.197 0.843空腹血糖（mmol/L）4.9±0.8 5.0±0.7 0.225 0.821

2.2 兩組左心室相關(guān)指標(biāo)及miRNA- 1表達(dá)水平比較

高血壓左心室肥厚組室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑、LVMI及miRNA-1表達(dá)水平均顯著高于高血壓組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 兩組左心室相關(guān)指標(biāo)及miRNA-1表達(dá)水平比較 ［n=50，±s］

表2 兩組左心室相關(guān)指標(biāo)及miRNA-1表達(dá)水平比較 ［n=50，±s］

組別高血壓左室心肥厚組高血壓組t值P值室間隔厚度（mm）11.2±1.4 8.8±0.7 3.245 0.028左心室壁厚度（mm）11.6±1.0 8.7±1.2 3.281 0.025左心室舒張末期內(nèi)徑（mm）35.7±4.0 31.1±2.8 3.011 0.040 LVMI（g/m2）136.5±14.2 112.4±8.9 4.358 0.007 miRNA-1 1.3±0.4 0.8±0.3 3.085 0.037

2.3 miRNA- 1表達(dá)水平與左心室相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，miRNA-1表達(dá)水平與室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑、LVMI呈正相關(guān)（P＜0.05），詳見(jiàn)表3。

表3 miRNA-1表達(dá)水平與左心室相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4 miRNA- 1對(duì)高血壓左心室肥厚的預(yù)測(cè)價(jià)值

建立ROC曲線，以miRNA-1為檢測(cè)變量，以是否出現(xiàn)左心室肥厚為狀態(tài)變量（定義為1），分析miRNA-1對(duì)高血壓左心室肥厚的預(yù)測(cè)價(jià)值，結(jié)果顯示曲下面積（AUC）為 0.937（95%CI：0.875～0.962，P＜0.05）。

3 討論

隨著高血壓病程的持續(xù)，心肌細(xì)胞在血壓波動(dòng)的長(zhǎng)期刺激下可誘發(fā)肥厚性生長(zhǎng)應(yīng)答，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大、心肌纖維化及胞質(zhì)蛋白合成增強(qiáng)等，從而導(dǎo)致左心室心肌肥厚，造成心肌供血、供氧不足，影響心臟收縮及舒張，并最終發(fā)展為心力衰竭甚至死亡［7］。開(kāi)展高血壓左心室肥厚的早期鑒別診斷是逆轉(zhuǎn)病變的有利措施。

本研究結(jié)果顯示，高血壓左心室肥厚患者室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑、LVMI及miRNA-1表達(dá)水平均顯著高于高血壓患者（P＜0.05）。進(jìn)一步分析證實(shí)，miRNA-1表達(dá)水平與室間隔厚度、左心室壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑、LVMI呈正相關(guān)（P＜0.05）。提示miRNA-1參與高血壓左心室肥厚的發(fā)生與發(fā)展。大量研究證實(shí)，miRNA在心臟發(fā)育及心肌細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的調(diào)控作用［8-9］。因此，深入探究miRNA與心血管疾病的相關(guān)性，對(duì)于心血管疾病的臨床診療具有重要的指導(dǎo)意義。miRNA-1屬于心肌特異性miRNA，其在心肌發(fā)育過(guò)程中持續(xù)表達(dá)，直至心臟發(fā)育成熟，并維持高度表達(dá)，廣泛參與了心臟相關(guān)病理生理過(guò)程［10-11］。鄧海燕等［12］通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，慢病毒轉(zhuǎn)染miRNA-1可促使大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）向心肌樣細(xì)胞分化，而調(diào)控Notch信號(hào)通路是其可能的作用機(jī)制。黃穎等［13］研究表明，利用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默miRNA-1，可顯著降低自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚心肌組織中miRNA-1表達(dá)水平，并提高自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚心肌組織中內(nèi)向整流鉀通道2.1（inward rectifier K channel，Kir2.1）蛋白表達(dá)，提示miRNA-1可通過(guò)靶向Kir2.1調(diào)控靜息膜電位，從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞電重構(gòu)。上述研究證實(shí)，miRNA-1與心肌細(xì)胞分化及心肌細(xì)胞電重構(gòu)密切相關(guān)，而這也可能是其參與高血壓左心室肥厚的主要機(jī)制。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，miRNA-1預(yù)測(cè)高血壓左心室肥厚的曲線下面積為0.937（95%CI：0.875～0.962，P＜0.05），提示miRNA-1對(duì)高血壓左心室肥厚具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值，這也為高血壓左心室肥厚的早期鑒別診斷提供了新思路。

綜上所述，miRNA-1表達(dá)與高血壓左心室肥厚發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，miRNA-1可能是高血壓左心室肥厚特異性診斷的潛在標(biāo)志物。但由于本研究納入樣本較少，且未全面排除個(gè)體差異影響，故要明確miRNA-1在高血壓左心室肥厚中的作用及機(jī)制，仍有待開(kāi)展大樣本、多種族、多中心的隨機(jī)對(duì)照研究。

［1］RIPLEY D P，NEGROU K，OLIVER J J，et al.Aortic remodelling following the treatment and regression of hypertensive left ventricular hypertrophy：a cardiovascular magnetic resonance study［J］.Clin Experim Hypert，2015，37（4）：1-9.

［2］GRAY C，LI M，PATEL R，et al.Let-7 miRNA profiles are associated with the reversal of left ventricular hypertrophy and hypertension in adult male off spring from mothers under nourished uring pregnancy after preweaning growth hormone treatment［J］.Endocrinol，2014，155（12）：567-568.

［3］MONKEVICIUTE，AISTE.Analysis of microRNA role in the development of left ventricular hypertrophy in the stroke-prone spontaneously hypertensive rat［J］.World Health Organiz Aids Techn Bull，2014，2（11）：106-107.

［4］CURCIO A，TORELLA D，IACONETTI C，et al.MicroRNA-1 downregulation increases connexin 43 displacement and induces ventricular tachyarrhythmias in rodent hypertrophic hearts［J］.Plos One，2013，8（7）：70158.

［5］中國(guó)高血壓防治指南修訂委員會(huì).中國(guó)高血壓防治指南2010［J］.中華心血管病雜志，2011，39（7）：579-616.

［6］SCHILLACI G，VERDECCHIA P，PORCELLATI C，et al.Continuous relation between left ventricular mass and cardiovascular risk in essential hypertension［J］.Hypertension，2000，35（2）：580-586.

［7］GABRIELLI L，WINTER J L，GODOY I，et al.Increased rhokinase activity in hypertensive patients with left ventricular hypertrophy［J］.Am J Hypert，2014，27（6）：838-845.

［8］MA Z，QI J，MENG S，et al.Swimming exercise training-induced left ventricular hypertrophy involves microRNAs and synergistic regulation of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway［J］.Eur J Appl Physiol，2013，113（10）：2473-2474.

［9］CHUNTAO W U，DONG S，YONGJUN L I.Effects of miRNA-455 on cardiac hypertrophy induced by pressure overload［J］.Int J Molec Med，2015，35（4）：893-900.

［10］ DUAN L，XIONG X，LIU Y，et al.miRNA-1：functional roles and dysregulation in heart disease［J］.Molec Bios，2014，10（11）：2775-2778.

［11］ KURA B，YIN C，F(xiàn)RIMMEL K，et al.Changes of microRNA-1，-15b and-21 levels in irradiated rat hearts after treatment with potentially radioprotective drugs［J］.Physiolog Res，2016，65（1）：129-137.

［12］鄧海燕，曾俊義，魏云峰，等.microRNA-1誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化過(guò)程中Notch信號(hào)分子的表達(dá)變化［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，34（9）：1204-1210.

［13］黃穎，伍偉鋒.微小RNA-1調(diào)控自發(fā)性高血壓大鼠肥厚左心室心肌組織Kir2.1蛋白的表達(dá)［J］.中華高血壓雜志，2011，19（6）：549-552.

Correlation of microRNA-1 expression with hypertensive left ventricular hypertrophy

SI Yu-an
（Jiangyin People′s Hospital of Jiangsu，Jiangyin，Jiangsu 214400，China）

ObjectivesTo evaluate the correlation of microRNA（miRNA-1）expression with hypertensive left ventricular hypertrophy.MethodsThere were 50 hypertensive patients and 50 hypertensive patients with left ventricular hypertrophy selected in this study.MiRNA-1 expression were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction（RT-PCR）.Correlations of miRNA-1 expression with left ventricular indexes were analyzed.Predictive value of miRNA-1 for hypertensive left ventricular hypertrophy were evaluated by receiver operating characteristic（ROC）curve.ResultsInterventricular septal thickness，left ventricular posterior wall thickness，left ventricular end diastolic dimension，left ventricular mass index and miRNA-1 expression of hypertensive patients with left ventricular hypertrophy were significantly higher than those of hypertensive patients（P＜0.05）.MiRNA-1 expression positively correlated with interventricular septal thickness（r=0.382，P=0.002），left ventricular posterior wall thickness（r=0.411，P=0.001），left ventricular end diastolic dimension（r=0.285，P=0.023）and left ventricular mass index（r=0.492，P=0.000）.Area under ROC curve of miRNA-1 forecasting hypertensive left ventricular hypertrophy was 0.937（95%CI：0.875-0.962，P＜0.05）.ConclusionsMiRNA-1 expression closely relates to hypertensive left ventricular hypertrophy，and it may be a specific diagnostic marker of left ventricular hypertrophy.

hypertension；microRNA-1；left ventricular hypertrophy

R544.1

A

1007-9688（2017）06-0751-04

10.3969/j.issn.1007-9688.2017.06.27

司煜安（1982-），女，主管技師，研究方向?yàn)獒t(yī)學(xué)檢驗(yàn)。

2017-02-07）