sPLA2-ⅠB、PLA2R及PLA2R-AB在鑒別微小病變型腎病及特發(fā)性膜性腎病中的意義*

潘陽(yáng)彬， 萬(wàn)建新， 陶 璇， 鄒臻寰， 徐 卿， 劉亞惠， 楊麗燕， 柯鴻婷

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 1腎內(nèi)科 2病理科，福州 350005 3福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平第一醫(yī)院腎內(nèi)科，南平 353000

sPLA2-ⅠB、PLA2R及PLA2R-AB在鑒別微小病變型腎病及特發(fā)性膜性腎病中的意義*

潘陽(yáng)彬1， 萬(wàn)建新1， 陶 璇2， 鄒臻寰1， 徐 卿3， 劉亞惠1， 楊麗燕1， 柯鴻婷1

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1腎內(nèi)科2病理科，福州 3500053福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平第一醫(yī)院腎內(nèi)科，南平 353000

目的檢測(cè)分泌型磷脂酶A2-ⅠB(sPLA2-ⅠB)、M型磷脂酶A2受體(PLA2R)及抗M型磷脂酶A2受體抗體(PLA2R-AB)在微小病變型腎病(MCD)及特發(fā)性膜性腎病(IMN)中的表達(dá)，為臨床上鑒別兩類疾病尋找新的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)。方法收集臨床表現(xiàn)為腎病綜合征并經(jīng)腎穿刺病理檢查證實(shí)為MCD(16例)及IMN(29例)患者的血清、尿液及腎臟病理標(biāo)本。檢測(cè)血清各項(xiàng)生化指標(biāo)及尿蛋白定量，間接免疫熒光檢測(cè)血清PLA2R-AB表達(dá)水平，免疫熒光檢測(cè)腎小球PLA2R表達(dá)水平，ELISA檢測(cè)血清sPLA2-ⅠB表達(dá)水平，免疫組化檢測(cè)腎小球sPLA2-ⅠB表達(dá)水平。分析sPLA2-ⅠB、PLA2R及PLA2R-AB水平在MCD組及IMN組中的表達(dá)情況。結(jié)果IMN組患者血清PLA2R-AB陽(yáng)性率為69.0%，MCD組患者血清PLA2R-AB均為陰性(P<0.01)。IMN組腎小球足細(xì)胞PLA2R陽(yáng)性率為86.2%，MCD組腎小球足細(xì)胞PLA2R陽(yáng)性率為18.8%(P<0.01)。IMN組及MCD組血清sPLA2-ⅠB平均水平分別為(211.04±69.47)、(184.52±33.29)pg/mL(P>0.05)。IMN組和MCD組腎小球sPLA2-ⅠB的平均積分吸光度值分別為(1 849.90±506.07)、(1 143.63±323.68)(P<0.01)。結(jié)論sPLA2-ⅠB、PLA2R及PLA2R-AB在MCD及IMN中表達(dá)有明顯差異。聯(lián)合檢測(cè)sPLA2-ⅠB、PLA2R及PLA2R-AB有助于提高M(jìn)CD及IMN的鑒別診斷水平。

膜性腎小球腎炎； 微小病變型腎??； 磷脂酶A2； 鑒別診斷

腎小球足細(xì)胞病包括微小病變型腎病(minimal changed disease，MCD)、膜性腎病(membranous nephropathy，MN)及局灶節(jié)段性腎小球硬化腎病(focal segmental glomerulosclerosis，F(xiàn)SGS)等。膜性腎病又包括特發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)及繼發(fā)性膜性腎病(secondary membranous nephropathy，SMN)。既往鑒別腎小球足細(xì)胞病均需通過(guò)腎穿刺病理檢查。然而，自Beck等[1]發(fā)現(xiàn)抗M型磷脂酶A2受體抗體(M-type phospholipase A2 receptor antibody，PLA2R-AB)是IMN患者體內(nèi)的主要自身抗體以來(lái)，鑒別IMN就多了一個(gè)檢測(cè)手段，即可以通過(guò)檢測(cè)血清PLA2R-AB來(lái)幫助鑒別IMN及其他類型腎病。遺憾的是，僅僅通過(guò)檢測(cè)PLA2R-AB仍然不能確診IMN。有研究發(fā)現(xiàn)M型磷脂酶A2受體(M-type phospholipase A2 receptor，PLA2R)在IMN腎小球足細(xì)胞表達(dá)增加[2]，分泌型磷脂酶A2-ⅠB(secretory phospholipase A2-ⅠB，sPLA2-ⅠB)在慢性腎衰竭患者體內(nèi)也表達(dá)增加[3]，sPLA2-ⅠB是否在IMN中也具有特異性表達(dá)增加，目前尚未見報(bào)道。PLA2R、sPLA2-ⅠB及PLA2R-AB三者結(jié)合檢測(cè)是否能鑒別IMN與其他類型腎病也未見報(bào)道。而早期IMN與MCD更加難以鑒別，故本研究擬檢測(cè)IMN與MCD患者PLA2R、sPLA2-ⅠB及PLA2R-AB，探討3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)以上2種腎病的鑒別診斷是否有意義。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2016年1月至2017年5月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院經(jīng)腎活檢診斷為IMN及MCD的成人患者45例，其中IMN 29例，MCD 16例。將患者分為IMN組及MCD組。IMN組男性16例，女性13例，平均年齡(51.24±13.25)歲。MCD組男性8例，女性8例，平均年齡(48.75±18.89)歲。所有患者均符合以下要求：①臨床表現(xiàn)為腎病綜合征，初診或就診前期未接受過(guò)激素及免疫抑制劑治療；②腎穿刺病理檢查前無(wú)急性腎損傷發(fā)生；③腎臟病理類型均經(jīng)腎穿刺病理檢查確診；④排除繼發(fā)性腎臟疾病如高血壓腎病、糖尿病腎病、狼瘡性腎炎等；⑤無(wú)腎毒性藥物及毒物接觸史，并排除合并有嚴(yán)重血液系統(tǒng)、心、腦、肺等疾病。本研究所遵循的程序符合倫理學(xué)要求，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有參試者均簽署知情同意書。

1.2 一般臨床資料的收集

包括年齡、性別、身高、體重、血壓、現(xiàn)病史、既往史等。并收集實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括血常規(guī)、尿常規(guī)、24 h尿蛋白量、腎功能、肝功能、血脂、血糖、腫瘤指標(biāo)、免疫學(xué)指標(biāo)等資料。

1.3 腎臟病理標(biāo)本收集及檢測(cè)

B型超聲引導(dǎo)下行腎穿刺活檢，腎活檢組織分別行光鏡、免疫熒光及免疫組化檢測(cè)。

1.3.1 光鏡下檢測(cè) 光鏡標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，切片厚2 μm，分別行HE、PAS、PASM染色。

1.3.2 免疫熒光下檢測(cè) ①直接免疫熒光法檢測(cè)IgG、IgA、IgM、C3、C1q表達(dá)：將冰凍切片置于抽濕機(jī)器旁室溫干燥30 min后滴加標(biāo)記熒光抗體，將切片置于濕盒內(nèi)。37℃孵育1.5 h、4℃過(guò)夜。PBS輕洗3次，每次2 min。防淬滅熒光封片劑封片，于4℃冰箱避光放置。用熒光顯微鏡(日本OLYMPUS)觀察。②間接免疫熒光法檢測(cè)腎組織PLA2R表達(dá)：將冰凍切片置于抽濕機(jī)旁室溫干燥30 min。滴加一抗將切片置于濕盒內(nèi)(一抗?jié)舛?∶100，英國(guó)Abcam公司)。37℃孵育1.5 h。PBS輕洗3次，每次2 min。滴加熒光素標(biāo)記的二抗IgG抗體。37℃孵育1.5 h。PBS輕洗3次，每次2 min。防淬滅熒光封片劑封片，于4℃冰箱避光放置。用熒光顯微鏡觀察腎組織PLA2R表達(dá)水平。

1.3.3 免疫組化檢測(cè) 所有腎活檢標(biāo)本均采用免疫組織化學(xué)法行sPLA2-ⅠB檢測(cè)。腎穿刺標(biāo)本經(jīng)烤片，脫蠟，水化,切片，高壓修復(fù)后，3% H2O2去離子水室溫孵育8 min，PBS沖洗3次，滴加一抗sPLA2-ⅠB抗體(一抗?jié)舛?∶200，美國(guó)Sigma-Aldrich公司)，4℃過(guò)夜。次日37℃烤箱內(nèi)復(fù)溫30 min后PBS液漂洗5 min×3次，將玻片重新置入濕盒內(nèi)。滴加二抗(1∶5 000)于37℃靜置30 min后PBS液漂洗5 min×3次。滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，于37℃靜置15 min后PBS漂洗5 min×3次。再經(jīng)DAB顯色、蘇木精復(fù)染、鹽酸乙醇分化、梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，中性樹膠封片并室溫晾干后于顯微鏡下觀察并攝片。Image-pro plus軟件分析免疫組化積分吸光度值。

1.4 血清標(biāo)本收集及檢測(cè)

收集腎穿刺當(dāng)日清晨空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min，離心10 min，取上清液保存在-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.1 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清sPLA2-ⅠB水平 在空白孔中加入100 μL樣品稀釋液，其余孔分別加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品。覆膜，37℃孵育90 min。棄去液體，甩干，每孔中加入Detection Ab 100 μL工作液，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1 h。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，約350 μL /孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。每孔加入HRP Conjugate 100 μL工作液，加上覆膜，于37℃溫育30 min。棄去孔內(nèi)液體并甩干，洗板5次。每孔加入90 μL底物溶液，酶標(biāo)板加上覆膜于37℃避光孵育15 min。加入終止液終止反應(yīng)后立即使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光度(A)值。

1.4.2 采用間接免疫熒光法檢測(cè)血清PLA2R-AB水平 采用德國(guó)EUROIMMUN生物技術(shù)有限公司提供的抗PLA2R-AB檢查試劑盒，按以下程序進(jìn)行操作：血清稀釋后加入試劑盒抗原基質(zhì)片，于室溫孵育30 min后清洗5 min，然后加入FITC標(biāo)記的羊抗人IgG，室溫避光孵育30 min，清洗5 min，加甘油封片后熒光顯微鏡下判讀結(jié)果，以抗體滴度≥1∶10為弱陽(yáng)性(+)，抗體滴度≥1∶320為強(qiáng)陽(yáng)性()，介于兩者之間者為陽(yáng)性()。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布計(jì)量資料以M(1/4，3/4)表示，正態(tài)分布資料比較采用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布資料采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分比表示，無(wú)序分類變量采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法檢驗(yàn)，有序分類變量采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IMN組及MCD組臨床資料比較

與IMN組患者比較，MCD組患者雖然年齡較小，但兩組腎臟病患者間年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，納入的IMN組中男性16例，女性13例，MCD組中男性8例，女性8例，兩組間血壓、血清白蛋白、膽固醇、三酰甘油、肌酐及尿蛋白定量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2 IMN組及MCD組病理資料比較

IMN組基底膜增厚比例較MCD組明顯較多(P<0.01)，IMN組嗜復(fù)紅蛋白沉積較多，腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化及間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較MCD組明顯(均P<0.05)。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示IMN組IgG及C3沉積強(qiáng)度較MCD組明顯增強(qiáng)(均P<0.01)。但系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生、腎小球節(jié)段硬化、毛細(xì)血管內(nèi)細(xì)胞增生比例兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖1及表2。

2.3 IMN組及MCD組血清PLA2R-AB水平和腎穿刺活檢病理組織PLA2R水平的比較

29例病理診斷為IMN的患者中20例血清PLA2R-AB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為69.0%，16例病理診斷為MCD的患者中血清PLA2R-AB均為陰性，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。IMN組腎小球足細(xì)胞PLA2R免疫熒光檢測(cè)有25例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為86.2%，MCD組腎小球足細(xì)胞PLA2R免疫熒光檢測(cè)有3例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為18.8%(P<0.01)。見表1及圖1。

2.4 IMN組及MCD組血清sPLA2-ⅠB水平和腎穿刺活檢病理組織sPLA2-ⅠB水平的比較

ELISA檢測(cè)顯示，IMN組及MCD組血清sPLA2-ⅠB平均水平分別為(211.04±69.47)、(184.52±33.29)pg/mL，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化染色顯示，IMN組腎小球sPLA2-ⅠB的平均積分吸光度值為(1 849.90±506.07)，MCD組腎小球sPLA2-ⅠB平均積分吸光度值為(1 143.63±323.68)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1及圖1。

表1 兩組臨床資料及PLA2R、PLA2R-AB、sPLA2-ⅠB的表達(dá)水平比較Table 1 Clinical data of two groups and the levels of PLA2R，PLA2R-AB and sPLA2-ⅠB (±s)

A：IMN腎小球PASM染色，見基底膜增厚(×400)；B：IMN腎小球PLA2R免疫熒光染色，見PLA2R沿基底膜呈陽(yáng)性表達(dá)(×400)；C：IMN腎小球sPLA2-ⅠB免疫組化染色，見sPLA2-ⅠB強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(×400)；D：MCD腎小球PASM染色，見基底膜無(wú)明顯增厚(×400)；E：MCD腎小球PLA2R免疫熒光染色，未見PLA2R陽(yáng)性表達(dá)(×400)；F：MCD腎小球sPLA2-ⅠB免疫組化染色，見sPLA2-ⅠB弱陽(yáng)性表達(dá)(×400)圖1 微小病變腎病及特發(fā)性膜性腎病病理特征及PLA2R、sPLA2-ⅠB表達(dá)水平Fig.1 The pathological feature of IMN and MCD and the levels of PLA2R and sPLA2-ⅠB of two groups

2.5 腎組織sPLA2-ⅠB水平與血清白蛋白及24 h尿蛋白定量間相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，IMN組腎組織sPLA2-ⅠB水平與血清白蛋白間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.380，P=0.042)，與24 h尿蛋白定量間無(wú)相關(guān)性(r=0.305，P=0.108)；MCD組腎組織sPLA2-ⅠB水平與血清白蛋白及24 h尿蛋白定量間均無(wú)相關(guān)性(r=-0.141，P=0.602；r=0.374，P=0.154)。相關(guān)性分析散點(diǎn)圖見圖2。

表2 微小病變腎病及特發(fā)性膜性腎病患者腎活檢病理特征比較[例(%)]Table 2 Pathological data of IMN patients and MCD patients[n(%)]

A：IMN腎小球sPLA2-ⅠB積分吸光度值與血清白蛋白(Alb)水平相關(guān)性散點(diǎn)圖(P<0.05)；B：IMN腎小球sPLA2-ⅠB積分吸光度值與24 h尿蛋白(Upro)水平相關(guān)性散點(diǎn)圖(P>0.05)；C：MCD腎小球sPLA2-ⅠB積分吸光度值與血清白蛋白(Alb)水平相關(guān)性散點(diǎn)圖(P>0.05)；D：MCD腎小球sPLA2-ⅠB積分吸光度值與24 h尿蛋白(Upro)水平相關(guān)性散點(diǎn)圖(P>0.05)圖2 微小病變型腎病及特發(fā)型膜性腎小球sPLA2-ⅠB與血清白蛋白、尿蛋白水平相關(guān)性散點(diǎn)圖Fig.2 The scatter diagram of association of sPLA2-ⅠB with albumin or urine protein in the two groups

3 討論

腎臟病理檢查的應(yīng)用使IMN與MCD的診斷準(zhǔn)確率獲得很大提高，但即使如此，早期IMN與MCD仍難以完全鑒別，臨床上仍出現(xiàn)早期腎臟病理表現(xiàn)為MCD而發(fā)展為IMN的情況。故探討采用腎臟病理檢查之外的生物學(xué)指標(biāo)來(lái)鑒別兩類疾病顯得尤為重要。

M型PLA2R作為IMN患者體內(nèi)的特異性靶抗原，近年來(lái)已有較多研究證明其可用于IMN與其他腎小球疾病的鑒別。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)腎小球中PLA2R陽(yáng)性表達(dá)對(duì)診斷IMN的靈敏度為75%，特異度為83%[4]。國(guó)內(nèi)的一項(xiàng)回顧性研究發(fā)現(xiàn)，102例IMN患者中腎小球PLA2R陽(yáng)性率為84%[5]。我們的研究發(fā)現(xiàn)29例IMN患者中腎小球PLA2R陽(yáng)性率為86.2%，而16例MCD患者腎小球PLA2R陽(yáng)性率為18.8%。PLA2R在鑒別IMN患者方面顯示出較強(qiáng)的特異性。

雖然目前PLA2R已被認(rèn)為是鑒別IMN與其他腎小球疾病重要的生物學(xué)指標(biāo)，但仍有部分IMN患者PLA2R及其血清抗體均陰性。而且近來(lái)發(fā)現(xiàn)在部分乙肝相關(guān)性腎炎中PLA2R陽(yáng)性率高達(dá)64%，在少部分狼瘡性腎炎中PLA2R也陽(yáng)性表達(dá)[5]。此外，Tomas等[6]發(fā)現(xiàn)1型血小板反應(yīng)蛋白7A域(THSD7A)，在PLA2R-AB陰性的IMN患者血清樣本中篩選出抗1型血小板反應(yīng)蛋白7A域抗體(THSD7A-AB)，最終證明約2.5%～5.0%IMN患者存在THSD7A-AB。在此之后，日本的一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)IMN患者腎小球中THSD7A陽(yáng)性率達(dá)9.1%，且THSD7A在其他腎小球疾病及SMN中均未見表達(dá)[7]。以上研究證明PLA2R并非是IMN患者的唯一腎小球靶抗原，也證明并非只有IMN患者表達(dá)PLA2R。正因?yàn)槿绱?，目前臨床上鑒別IMN及其他腎小球疾病仍主要通過(guò)腎穿刺病理檢查來(lái)確診。

從Beck等[1]發(fā)現(xiàn)PLA2R-AB是IMN患者體內(nèi)的主要自身抗體以來(lái)，PLA2R-AB就成為IMN研究的熱點(diǎn)。目前對(duì)血清PLA2R-AB診斷IMN的敏感性報(bào)道有一定差異，國(guó)外研究顯示靈敏度為48%～82%[8-9]。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，血清PLA2R-AB水平在IMN患者中的陽(yáng)性率為82%。我們的研究發(fā)現(xiàn)29例IMN患者中有20例血清PLA2R-AB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為69.0%，而16例MCD患者中無(wú)一例血清PLA2R-AB陽(yáng)性。PLA2R-AB在鑒別是否IMN方面也顯示出較高的特異性。然而，研究者同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在乙肝相關(guān)性腎炎、Ⅴ型狼瘡性腎炎患者中PLA2R-AB也有一定的陽(yáng)性率，兩種疾病的陽(yáng)性率分別為6.3%、5%[10]。Meta分析顯示，對(duì)于IMN與SMN的鑒別診斷，血清PLA2R-AB靈敏度為68%，特異度達(dá)97%，提示PLA2R-AB血清學(xué)檢測(cè)有重要的臨床價(jià)值。但當(dāng)血清PLA2R-AB檢測(cè)陰性的患者仍需根據(jù)病理診斷來(lái)確診[11]。因此，仍需在PLA2R及PLA2R-AB之外尋找能鑒別IMN及其他腎小球疾病的生物學(xué)指標(biāo)。

sPLA2-ⅠB對(duì)PLA2R具有高度特異性親和力。sPLA2-ⅠB可被視為PLA2R的天然配體。除其消化功能外，sPLA2-ⅠB與其PLA2R結(jié)合后影響細(xì)胞的多種生物功能，包括細(xì)胞增殖、脂肪介質(zhì)的釋放等等。研究發(fā)現(xiàn)在PLA2R敲除的小鼠中內(nèi)毒素休克病情減輕，而PLA2R在內(nèi)毒素休克進(jìn)程中的促炎癥介質(zhì)釋放功能起著關(guān)鍵作用[12]。

PLA2R結(jié)合sPLA2-ⅠB后可將其內(nèi)吞入細(xì)胞，在其細(xì)胞外配體內(nèi)化的過(guò)程中產(chǎn)生重要作用。這種內(nèi)化作用可能是sPLA2-ⅠB產(chǎn)生生物效應(yīng)的觸發(fā)因素。另有研究表明，使用PLA2R的特異競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑Me-indoxam，可顯著降低sPLA2-ⅠB與PLA2R的親和力，并指出sPLA2-ⅠB導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡及活動(dòng)能力下降并非由炎癥因子介導(dǎo)[13]。分泌型磷脂酶A2(sPLA2)，包括sPLA2-ⅠB，通常被認(rèn)為是控制脂質(zhì)介質(zhì)釋放的關(guān)鍵酶，然而，由于sPLA2還是PLA2R的配體，故其生物活性并不局限于催化功能[14]。在人成纖維細(xì)胞中，PLA2R能加速?gòu)?fù)制性細(xì)胞衰老的發(fā)生，部分原因是引起活性氧族的產(chǎn)生增加并導(dǎo)致DNA損傷[15]。

基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，sPLA2-ⅠB與PLA2R結(jié)合后可激活胞漿型磷脂酶A2α(cPLA2α)，cPLA2α激活時(shí)，能夠利用N-末端中的鈣依賴磷脂結(jié)合結(jié)構(gòu)域(C2 domain)，驅(qū)動(dòng)其由胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到胞膜，進(jìn)而水解花生四烯酸(AA)[16]。磷酸化的cPLA2α能使其酶活性增加2～4倍。在許多細(xì)胞類型中，cPLA2α通過(guò)P42/44 MAPK和/或p38 MAPK途徑實(shí)現(xiàn)磷酸化的過(guò)程。我們前期研究也證實(shí)在足細(xì)胞中，sPLA2-ⅠB刺激足細(xì)胞后能激活P42/44 MAPK途徑，導(dǎo)致cPLA2α磷酸化，進(jìn)而引起足細(xì)胞凋亡率增加[17]。本臨床研究發(fā)現(xiàn)，雖然IMN與MCD血清中sPLA2-ⅠB水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但I(xiàn)MN患者腎臟組織中的sPLA2-ⅠB表達(dá)水平明顯高于MCD患者。此外，雖然IMN患者sPLA2-ⅠB與尿蛋白定量未顯示出相關(guān)性，但與IMN患者血清白蛋白水平呈負(fù)相關(guān)。而MCD患者腎臟組織中的sPLA2-ⅠB表達(dá)水平與患者尿蛋白定量及血清白蛋白水平均沒有相關(guān)性。顯示腎臟組織中sPLA2-ⅠB表達(dá)水平可作為鑒別IMN與MCD的生物學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，PLA2R及其抗體在鑒別IMN及MCD中有較高的敏感度及特異度，但仍不能完全憑PLA2R及其抗體的檢測(cè)來(lái)對(duì)二者進(jìn)行完全鑒別。腎臟組織中sPLA2-ⅠB表達(dá)水平在IMN中表達(dá)明顯較MCD中較高，sPLA2-ⅠB可以結(jié)合PLA2R及PLA2R-AB來(lái)提高對(duì)IMN和MCD的鑒別水平。當(dāng)然，本研究例數(shù)仍然較少，sPLA2-ⅠB結(jié)合PLA2R及PLA2R-AB鑒別IMN和MCD及其他腎小球疾病是否可靠，還需要大型多中心臨床研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證。

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RoleofsPLA2-ⅠB，PLA2RandPLA2R-antibodyinIdentificationofMCDandIMN

Pan Yangbin1，Wan Jianxin1，Tao Xuan2etal

1DepartmentofNephrology，2DepartmentofPathology，F(xiàn)irstAffiliatedHospitalofFujianMedicalUniversity，F(xiàn)uzhou350005，China

ObjectiveTo detect the levels of secretory phospholipase A2-ⅠB(sPLA2-ⅠB)，M-type phospholipase A2 receptor(PLA2R)and M-type phospholipase A2 receptor antibody(PLA2R-AB)in minimal changed disease(MCD)and idiopathic membranous nephropathy(IMN)and try to find new biological parameters for identifying the two diseases.MethodsTotally，45 renal disease patients diagnosed by renal biopsy were enrolled，consisting of 29 IMN and 16 MCD.Their clinical data of serum，urine and renal histopathological specimens were collected.Serum PLA2R-AB was detected by indirect immunofluorescence assay.PLA2R in glomeruli was detected by direct immunofluorescence assay.Serum sPLA2-ⅠB was measured by ELISA.And sPLA2-ⅠB in glomeruli was determined by immunohistochemistry.ResultsThe positive rate of serum PLA2R-AB was 69.0% in 29 IMN patients，while it was 0.0% in 16 MCD patients(P<0.01).Similarly，the positive rate of PLA2R in glomeruli was 86.2% in IMN patients，while it was 18.8% in MCD patients(P<0.01).Compared with the IMN patients，the MCD patients presented a significantly lower level of sPLA2-ⅠB IOD in glomeruli[(1 849.90±506.07)vs. (1 143.63±323.68),P<0.01].There was no difference in serum sPLA2-ⅠB level between the two groups[(211.04±69.47)pg/mLvs. (184.52±33.29)pg/mL,P>0.05].ConclusionThere are significant differences in sPLA2-ⅠB，PLA2R and PLA2R-AB between IMN patients and MCD patients.Joint detection of sPLA2-ⅠB，PLA2R and PLA2R-AB can help to identify IMN and MCD.

membranous glomerulonephritis； minimal changed disease； phospholipase A2； differential diagnosis

*國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81670635)；福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2016J01532)；福建省衛(wèi)生計(jì)生委中青年骨干人才培養(yǎng)項(xiàng)目(No.2016-ZQN-36)

潘陽(yáng)彬，男，1973年生，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，E-mail：panyb9999@126.com

R692.31

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.06.002

(2017-07-18 收稿)