TRPC1在兒童肝母細(xì)胞瘤中的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

黃召， 李勇， 劉登輝， 肖雅玲

臨床研究

TRPC1在兒童肝母細(xì)胞瘤中的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

黃召， 李勇， 劉登輝， 肖雅玲

目的檢測(cè)TRPC1在兒童肝母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)，分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法收集湖南省兒童醫(yī)院普外科自2008年1月至2015年12月行肝臟腫塊切除的16例肝母細(xì)胞瘤患兒的病理資料和臨床資料，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TRPC1在兒童肝母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征(腫瘤組織與非腫瘤組織、腫瘤的大小)的關(guān)系，隨訪3～5年分析其與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果TRPC1在16例肝母細(xì)胞瘤患兒癌組織中表達(dá)程度不同，高表達(dá)占62.5%(10/16)，低表達(dá)占37.5%(6/16)。TRPC1高表達(dá)與肝母細(xì)胞瘤臨床病理特征中的腫瘤組織與非腫瘤組織、腫瘤大小比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；患兒3年生存率為72.73%(8/11)，5年生存率為50%(3/6)。TRPC1表達(dá)與3年、5年生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論TRPC1表達(dá)可能與兒童肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但不一定與預(yù)后有關(guān)。

肝母細(xì)胞瘤； TRPC1； 免疫組織化學(xué)； 臨床病理特征； 預(yù)后； 兒童

肝母細(xì)胞瘤是兒童最常見(jiàn)的肝臟惡性腫瘤，約占15歲以下兒童惡性腫瘤的l%和肝臟原發(fā)惡性腫瘤的79%；肝母細(xì)胞瘤總的發(fā)病率是(0.5～1.5)/1 000 000，男孩多見(jiàn)，男女比例為1.2～3.6∶1[1]。現(xiàn)在針對(duì)肝母細(xì)胞瘤的治療方案是根據(jù)PRETEXT分期系統(tǒng)對(duì)腫瘤進(jìn)行分期，聯(lián)合手術(shù)、化療(輔助和新輔助)和肝移植、放射治療、免疫、生物治療等綜合治療[2-4]。

TRPC1是一種廣泛分布于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中的非選擇性Ca2+通道蛋白，于1995年由Wes等[5]首次確認(rèn)其位于人染色體3q11，并與當(dāng)時(shí)已知的其他TRP家族基因有至少38%以上的同源性。TRPC1基因編碼的TRPC1蛋白主要表達(dá)在胎兒的大腦、肝臟和腎臟，成人的心臟、肌肉、大腦睪丸及卵巢。TRPC1通道單獨(dú)或與其他離子通道共同參與的細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化與機(jī)體多種生理功能密切相關(guān)，如神經(jīng)信號(hào)的傳遞、肌肉的發(fā)育、心肌自律性、細(xì)胞分化信號(hào)的調(diào)控等。TRPC1的異常表達(dá)可能與相關(guān)疾病的發(fā)生有關(guān)。

TRPC1與兒童肝母細(xì)胞瘤的關(guān)系目前未見(jiàn)相關(guān)研究及報(bào)道，本研究的目的主要是通過(guò)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)TRPC1分子在16例兒童肝母細(xì)胞瘤患者病理標(biāo)本的癌組織中的表達(dá)，并進(jìn)一步分析其表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，對(duì)TRPC1在兒童肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后過(guò)程中可能的作用進(jìn)行了初步探討和分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月至2015年12月湖南省兒童醫(yī)院行肝葉切除術(shù)的肝母細(xì)胞瘤患兒16例，其中男9例，女7例；年齡1～7歲，平均(4.0±0.3)歲。所有病理診斷均為肝母細(xì)胞瘤，同時(shí)收集了腫瘤組織及腫瘤組織邊緣2 cm的正常組織，以及所選病例的相關(guān)病理資料和臨床資料，并進(jìn)行隨訪3～5年。

1.2 主要試劑 TRPC1抗體采用兔抗人多克隆抗體(Santa Cruz CA，Cat.No.sc-50414)，對(duì)應(yīng)二抗采用免疫組織化學(xué)SP法二抗試劑盒(Gene Tech，Real EnvisionTMDetection Kit,Rabbit/Mouse. Code No.GK500705)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 免疫組織化學(xué)檢測(cè)：石蠟塊標(biāo)本連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)SP法。一抗?jié)舛葹?∶100。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 TRPC1分子主要表達(dá)是在肝細(xì)胞膜及胞漿，陽(yáng)性染色為出現(xiàn)黃色、棕黃色、棕褐色著色顆粒，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%判為TRPC1為高表達(dá)，<10%為低表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRPC1表達(dá)與組織病理學(xué)特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。

表1 TRPC1表達(dá)與組織病理學(xué)特征的關(guān)系[n(%)]

注：與腫瘤旁組織比較，aP=0.029；與腫瘤直徑≥5 cm比較，bP=0.036。

表1可見(jiàn)，TRPC1在肝母細(xì)胞瘤組織的高表達(dá)顯著多于腫瘤旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；TRPC1在直徑≥5 cm肝母細(xì)胞瘤組織中的高表達(dá)顯著高于直徑<5 cm腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 TRPC1表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 見(jiàn)表2。

表2 TRPC1表達(dá)與3年、5年生存率的關(guān)系[n(%)]

本研究16例患兒完成3年隨訪的有11例，其中死亡3例，生存率為72.73%(8/11)。完成5年隨訪的僅6例，生存率為50.0%(3/6)。TRPC1表達(dá)與3年、5年生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

兒童肝母細(xì)胞瘤從胚胎期至發(fā)病一般需2年時(shí)間，故發(fā)病通常在1～3歲，90%血清甲胎蛋白水平明顯增高，10%～20%病例轉(zhuǎn)移至肺、肝門、腦和骨[6]。由于其具體發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前的治療效果并不理想。歐洲小兒肝臟腫瘤研究者(SIOPEL)報(bào)導(dǎo)手術(shù)切除率80%，3年生存率85%，5年生存率70%，無(wú)瘤生存率67%[7]。國(guó)內(nèi)由于就診晚，治療不規(guī)范，手術(shù)完整切除率低，3年生存率低于50%[8]。

一般認(rèn)為，肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生，發(fā)展，轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及多個(gè)因素，多個(gè)環(huán)節(jié)的復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，有關(guān)生物學(xué)治療的研究成為了肝母細(xì)胞瘤診治的熱點(diǎn)及新的突破口。人們?cè)噲D通過(guò)研究細(xì)胞的生物學(xué)行為，在分子水平解釋其發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)活動(dòng)機(jī)制，以參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程的關(guān)鍵分子作為靶點(diǎn)，通過(guò)靶向藥物或其他手段特異性地將其殺傷，從而達(dá)到抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的目的[9]。

瞬時(shí)受體電位(transient receptor potential，TRP)通道是位于細(xì)胞膜上的一類重要的非電壓依賴性陽(yáng)離子通道，被激活時(shí)允許包括鈣離子在內(nèi)的陽(yáng)離子進(jìn)行跨膜運(yùn)輸[10]。TRP在多種哺乳動(dòng)物組織中廣泛表達(dá)，主要有TRPA、TRPC、TRPV、TRPM、TRPP、TRPN、TRPML 7個(gè)亞族[11]。TRP基因編碼的蛋白是一種能通透Ca2+的陽(yáng)離子通道，參與機(jī)體多種生理功能，如鈣的平衡、痛溫覺(jué)的感知等，在維持機(jī)體生理功能中發(fā)揮著重要作用。TRPC1是TRPC亞族的一種，是一種非選擇性的Ca2+通道，屬于儲(chǔ)存控制型通道[12]。Ca2+在信號(hào)轉(zhuǎn)到過(guò)程中作為第二信使發(fā)揮著廣泛作用，尤其在細(xì)胞體積、肌肉收縮、細(xì)胞周期調(diào)控及細(xì)胞凋亡、神經(jīng)傳遞、酶和激素分泌等多種生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞增殖的各個(gè)階段都有鈣離子的參與[13]。

TRPC1通道激活開(kāi)放后，對(duì)鈣的進(jìn)出細(xì)胞過(guò)程產(chǎn)生影響，可能導(dǎo)致感受器細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高和細(xì)胞膜的去極化，促使動(dòng)作電位的發(fā)生及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而達(dá)到調(diào)控細(xì)胞生理功能的作用。TRPC1通道蛋白的異常表達(dá)，可能會(huì)影響機(jī)體的正常生理過(guò)程，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。

TRPC1在腫瘤中的研究已取得不少進(jìn)展，但與兒童肝母細(xì)胞瘤的關(guān)系目前未見(jiàn)相關(guān)研究及報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，TRPC1在肝母細(xì)胞瘤腫瘤組織及非腫瘤組織中，以及在直徑<5 cm和直徑≥5 cm的腫瘤組織中，表達(dá)程度均有顯著差異。因此我們推測(cè)，TRPC1的表達(dá)差異可能與兒童肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。其具體機(jī)制可能是TRPC1作為非選擇性Ca2+通道，通過(guò)調(diào)節(jié)作為第二信使的Ca2+進(jìn)出細(xì)胞，影響細(xì)胞體積變化以及增殖分化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。TRPC1的異常表達(dá)可能使得正常肝細(xì)胞的生理活動(dòng)改變，在其增殖、分化過(guò)程中變異，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

在有關(guān)預(yù)后的研究中，TRPC1表達(dá)與患兒術(shù)后生存率沒(méi)有顯著差異。我們不能認(rèn)為TRPC1表達(dá)程度影響了肝母細(xì)胞瘤的預(yù)后，但并不能斷定TRPC1與其無(wú)關(guān)。因?yàn)闃颖緮?shù)量較小、隨訪不滿意，而且研究方法簡(jiǎn)單，并不能完全說(shuō)明問(wèn)題，需進(jìn)一步研究以確定其相關(guān)性。

綜上所述，TRPC1表達(dá)可能與兒童肝母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但其與預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

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RelationshipoftheexpressionofTRPC1withclinicopathologicalparameterandprognosisofhepatoblastomainchildren

HUANGZhao，LIYong，LIUDenghui，XIAOYaling.

HunanChildren'sHospital,Changsha410007,China

ObjectiveTo defect the expression of TRPC1 in the tissues of hepatoblastoma and to analyze its relationship with clinicopathological features and prognosis.MethodsThe pathological data and clinical data of 16 children with hepatoblastoma(HB) were collected, who underwent hepatectorny in Hunan Children's Hospital from Jan. 2008 to Dec. 2015. The expression of transient receptor potential channel-related protein 1(TRPC1) in HB tissues was detected by immunohistochemistry, its relationship with clinicopathological features(neoplastic tissues and non-neoplastic tissues, the sizes of neoplasm) was analyzed, and its relationship with prognosis was analyzed in the 3 to 5 years of follow-up.ResultsThe expression of TRPC1 in the 16 HB children was different, with high expression accounting for 62.5%(10/16) and low expression 37.5%(6/16).The high expression of TRPC1 had statistical difference in the neoplastic and non-neoplastic tissues and in the sizes of neoplasms(P<0.05).The 3-year survival rate was 72.73%(8/11),and the 5-year was 50%(3/6).There was no statistical significance in TRPC1 expression comparing 3-year with 5-year survival rate(P>0.05).ConclusionThe expression of TRPC1 may be related to the development and progression of HB in children, but it may be irrelevant to prognosis.

Hepatocastoma; TRPC1; Immunohistochemistry; Clinicopathological festures; Prognosis; Child

410007 長(zhǎng)沙，湖南省兒童醫(yī)院普外二科

黃召(1986-)，男，醫(yī)學(xué)碩士，醫(yī)師。研究方向：小兒胃腸、肝膽、腫瘤疾病的診治

肖雅玲，E-mail：etyypwk@sina.com

10.3969/j.issn.1674-3865.2017.06.011

R725.7

A

1674-3865(2017)06-0495-03

2017-09-19)

吳迪)