板藍(lán)根藥材中3種核苷高效液相法測定含量分析

趙亞麗

（河南省安陽市第三人民醫(yī)院中藥房，河南 安陽 455000）

神州藥房

板藍(lán)根藥材中3種核苷高效液相法測定含量分析

趙亞麗

（河南省安陽市第三人民醫(yī)院中藥房，河南 安陽 455000）

R285.5

B

1004-2814（2017）12-1458-02

目的：分析板藍(lán)根藥材中3種核苷（尿苷、鳥苷、腺苷）高效液相法測定的含量。方法：用高效液相法測定板藍(lán)根中尿苷、鳥苷、腺苷的含量，保持柱溫在30℃，檢測波長為254nm，梯度洗脫，流速保持在每分鐘0.8mL。結(jié)果：尿苷在10.6～265.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，鳥苷在10.4 ～260.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。腺苷在10.8 ～270.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。平均回收率尿苷為101.2%，鳥苷為100.8%，腺苷為101.4%。測定精密度、重視性以及穩(wěn)定性全部良好。結(jié)論：高效液相法測定板藍(lán)根藥材中3種核苷快速并且靈敏，檢測方法簡單，重視性理想，能夠用于板藍(lán)根藥材的質(zhì)量控制。

板藍(lán)根；高效液相法測定；核苷

Objective：To analysis three kinds of nucleosides in Radix Isatidis （uridine, guanosine, adenosine）determined by HPLC method. Method: The content of uridine, guanosine and adenosine in Radix Isatidis was determined by HPLC,with keeping the column temperature in 30 degrees Celsius, the detection wavelength 254nm, gradient elution and the flow rate at 0.8ml per minute. Result: Uridine showed a good linear relationship at a range of 10.6 mg/L to 265.0 mg/L. Guanosine showed a good linear relationship at a range of 10.4 mg/L to 260.0 mg/L. Adenosine showed a good linear relationship at a range of 10.8 mg/L to 270.0 mg/L. The average recovery rate was 101.2% in uridine, 100.8% in guanosine and 101.4% in adenosine respectively.Precision of determination, reproducibility and stability are all good. Conclusion: for the three nuclear glycosides in Radix Isatidis and HPLC method is a fast determination method, with sensitive detection, simple operation mode, good reproducibility in determination of Radix Isatidis, which could be used for the quality control of Radix Isatidis.

Radix Isatidis；determination of HPLC；nucleoside

板藍(lán)根屬十字花科植物菘藍(lán)的干燥根，性寒味苦，有涼血消斑、清熱解毒功效，相關(guān)藥理研究顯示，板藍(lán)根有抗菌、抗內(nèi)毒素、抗病毒以及抗血小板聚集作用，可以提高機(jī)體免疫能力［1］。板藍(lán)根藥材和復(fù)制劑在臨床中獲得了比較廣泛的應(yīng)用，在早期對于板藍(lán)根藥材的質(zhì)量控制主要集中于板藍(lán)根藥材中的靛玉紅、有機(jī)酸、靛藍(lán)以及氨基酸的含量測定，但研究顯示，其藥材中存在的尿苷、鳥苷及腺苷等核苷類成分對病毒核酸有干擾合成的作用，通常為中成藥抗病毒活性成分，同時(shí)尿苷、鳥苷以及腺苷含量相對比較高，所以現(xiàn)在對于板藍(lán)根中藥的質(zhì)量控制著重于對核苷類成分含量的測定?；瘜W(xué)物質(zhì)組學(xué)中顯示，不管屬于有效化學(xué)物質(zhì)組或是有效化學(xué)成分群都對應(yīng)著獨(dú)有的功能主治以及某種疾病，所以對板藍(lán)根藥材中核苷類成分開展質(zhì)量控制能夠確保板藍(lán)根的抗病毒效果。高效液相法測定板藍(lán)根注射液中尿苷、鳥苷、腺苷含量，操作方式比較復(fù)雜，誤差率相對比較大，同時(shí)對于液相條件要求較為苛刻［2］。本研究對高效液相法測定板藍(lán)根藥材中3種核苷高效液相法測定其含量的方法以及價(jià)值分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

應(yīng)用儀器為高效液相色譜儀，其中包括DAD檢測器，柱溫箱，低壓四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器以及化學(xué)工作站，板藍(lán)根藥材購買自藥店，尿苷、鳥苷以及腺苷對照品。

1.2 方 法

采用0.1%冰醋酸-甲醇二元線性梯度洗脫，0～8min（95%冰醋酸∶5%甲醇），8～20min（90%冰醋酸∶10%甲醇），20～60min（60%冰醋酸∶40%甲醇），流速保持在1min0.8mL，檢測波長為254nm，柱溫保持30℃，尿苷理論塔板數(shù)為5600，鳥苷理論塔板數(shù)為8500，腺苷理論塔板數(shù)為8200，尿苷拖尾因子為0.96，鳥苷拖尾因子為0.99，腺苷拖尾因子為0.95，相鄰峰分離度保持大于1.5。尿苷、鳥苷、腺苷對照品精密稱取，加入甲醇溶液，制作每1mL含尿苷、鳥苷、腺苷分別為10μg的溶液，將其作為對照品溶液。選取板藍(lán)根注射液，應(yīng)用微孔濾膜進(jìn)行過濾，選取續(xù)濾液當(dāng)作供試品溶液。精密稱取尿苷、鳥苷、腺苷對照品，裝入10mL量瓶中，取50%甲醇溶液將其稀釋到刻度，搖勻，得到尿苷對照品貯存液濃度1.06 g/L、鳥苷對照品貯存液濃度1.04 g/L、腺苷對照品貯存液濃度1.08g/L。對照品貯備液裝入10mL量瓶中，取 50%甲醇溶解和稀釋達(dá)到刻度并搖勻，分別取10μg注入液相色譜儀，同時(shí)記錄色譜圖［3］。

2 結(jié) 果

尿苷在10.6～265.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，鳥苷在10.4～260.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，腺苷在10.8～270.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。用2.1色譜條件選取含量測定溶液開展測定，持續(xù)進(jìn)樣6次，尿苷峰面積RSD為2.3%，鳥苷峰面積RSD為2.6%，腺苷峰面積RSD為2.4%，顯示精密度情況良好。用同一批樣品，依照上述方法制定供試品溶液，同時(shí)按照2.1色譜條件實(shí)施測定，持續(xù)測定6次，尿苷平均含量為146.5mg/L，RSD為1.2%，鳥苷平均含量為94.4mg/L，RSD為1.4%，腺苷平均含量為148.9mg/L，RSD為1.6%。按加樣回收率測定法，取已知含量的樣品，在其中加入高劑量、中劑量以及低劑量對照品溶液，依照上述色譜條件實(shí)施測定，計(jì)算3種核苷平均回收率，結(jié)果顯示尿苷平均回收率為101.2%，鳥苷平均回收率為100.8%，腺苷平均回收率為101.4%，測定精密度、重視性以及穩(wěn)定性全部良好。精密量取對照品溶液以及供試品溶液分別10μg，注入液相色譜儀，依照外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，所得結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果 （mg/L）

3 討 論

依照藥典方法利用水提醇沉工藝考察板藍(lán)根藥材中核苷類成分的含量，操作比較復(fù)雜，測定步驟比較多，誤差率高，不能夠真實(shí)反應(yīng)板藍(lán)根核苷類成分含量［4］。加入甲醇溶液處理，操作簡單，產(chǎn)生的誤差比較小，可以真實(shí)反應(yīng)板藍(lán)根核苷類成分含量，并且可以有效控制板藍(lán)根的質(zhì)量。采取高效液相法測定板藍(lán)根核苷含量靈敏度比較高，回收率高，精密度好，操作方法簡單，且能夠縮短3種核苷類成分測定時(shí)間、降低試劑損耗。

［1］王鋼力，聶黎行，遲玉明，等.HPLC法測定板藍(lán)根和板藍(lán)根顆粒中RS-告伊春和腺苷［J］.中草藥，2015，25 （5）：507-508.

［2］S.P LI，P LI，C.M LAI，Y.X GONG，KELVIN K.W KAN，TINA T.X DONG,KARL W.K TSIM，Y.T Wang.Simultaneous determination of ergosterol, nucleosides and their bases from natural and cultured Cordyceps by pressurised liquid extraction and high-performance liquid chromatography［J］. Journal of Chromatography A，2013，20（6）：456-458.

［3］WEI-JUN KONG，YAN-LING ZHAO，XIAO-HE XIAO,CHENG JIN，ZU-LUN LI.Quantitative and chemical fingerprint analysis for quality control of Rhizoma Coptidischinensis based on UPLC-PAD combined with chemometrics methods［J］.Phytomedicine，2015，27（6）：742.

［4］H.FAN，S.P.LI，J.J.XIANG，C.M.LAI，F(xiàn).Q.YANG，J.L.GAO，Y.T.WANG.Qualitative and quantitative determination of nucleosides,bases and their analogues in natural and cultured Cordyceps by pressurized liquid extraction and high performance liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometry（HPLC–ESI–MS/MS)［J］.Analytica Chimica Acta，2016，26（1）：48-49.

2017-09-18