電針對電刺激硬腦膜偏頭痛大鼠模型5-HT1B受體的調(diào)節(jié)作用

朱玉璞 裴 培 劉 璐 趙洛鵬 曲正陽 王麟鵬

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010)

電針對電刺激硬腦膜偏頭痛大鼠模型5-HT1B受體的調(diào)節(jié)作用

朱玉璞 裴 培 劉 璐 趙洛鵬 曲正陽 王麟鵬

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010)

目的：探討電針對電刺激硬腦膜大鼠偏頭痛模型5-HT1B受體的調(diào)節(jié)作用。方法：選取成年雄性SD大鼠40只，隨機分為5組，每組8只，對照組(C，只進(jìn)行手術(shù)，不進(jìn)行硬腦膜電刺激)、模型組(M，造模不給予電針)、單穴組(EA1，造模并給予電針風(fēng)池穴)、雙穴組(EA2，造模并給予電針風(fēng)池穴、陽陵泉穴)和假穴組(SA，造模并給予電針假穴)。實驗前檢測面部機械痛閾基線，實驗第2、4、6天分別測定大鼠足面部的機械痛閾。實驗第7天取三叉神經(jīng)脊束核、三叉神經(jīng)核，用相對定量實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測定5-HT1B受體基因相對表達(dá)水平，用蛋白印跡法測定5-HT1B受體蛋白相對表達(dá)水平。結(jié)果：與模型組比較，單穴組和雙穴組的痛閾顯著提高(P<0.05)，且雙穴組高于單穴組(P<0.05)；單穴組和雙穴組5-HT1B受體基因表達(dá)和蛋白表達(dá)比模型組顯著提高(P<0.05)，且雙穴組高于單穴組(P<0.05)。結(jié)論：電針對偏頭痛大鼠模型有治療作用,且雙穴組優(yōu)于單穴組。

電針；偏頭痛；電刺激硬腦膜；5-HT1B受體

偏頭痛是一種多因素神經(jīng)血管紊亂疾病，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性頭痛，并伴有神經(jīng)、胃腸道及自主神經(jīng)功能紊亂癥狀[1]。在2012年由《柳葉刀》發(fā)起的全球疾病負(fù)擔(dān)調(diào)查中，偏頭痛排第8位[2]。而且，偏頭痛在世界范圍內(nèi)已成為第6大致殘性疾病[3]，但治療卻缺乏完整有效的手段[1]。偏頭痛久治不愈，可能會發(fā)展為慢性偏頭痛最終致殘，此類患者在中國占9.3%[4]，在美國占12%[5]。目前，對于偏頭痛的病理生理學(xué)機制仍然知之甚少，現(xiàn)代研究認(rèn)為多與三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)有關(guān)[6-9]。經(jīng)典疼痛傳導(dǎo)通路由三叉神經(jīng)節(jié)(Trigeminal Ganglia，TG)、三叉神經(jīng)脊束核尾核(Trigeminal Nucleus Caudalis，TNC)和丘腦組成。同時，有學(xué)者認(rèn)為5-HT1B受體在腦血管平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞、TG以及TNC上均有分布[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)TG內(nèi)的神經(jīng)元具有5-HT1B受體[11]?？梢源_定5-HT1B存在于TG和TNC部位。目前，曲普坦類是臨床治療偏頭痛的一線用藥，從藥理學(xué)上分析，曲普坦類是5-HT1B受體激動劑，其抗偏頭痛作用的機制是收縮顱血管[12]和阻滯三叉神經(jīng)引起的硬腦膜血漿蛋白滲出[13]。由此可見，5-HT1B受體在偏頭痛的發(fā)生過程中扮演了非常重要的角色，同時也是偏頭痛治療當(dāng)中非常重要的靶點。在最近幾十年里，西方國家將針灸應(yīng)用于包括偏頭痛在內(nèi)的各種疾病的治療[14-15]。但是，目前對于電針治療偏頭痛的機制尚不明確。所以，本實驗采用電刺激硬腦膜的方法建立大鼠偏頭痛模型，應(yīng)用面部機械痛測定、相對定量實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測定和蛋白印跡法(Western blot)分別從行為學(xué)、基因以及蛋白方面對電針治療偏頭痛的機制進(jìn)行闡述，以期望能夠揭示電針治療偏頭痛的相關(guān)機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 成年雄性SD大鼠40只，200～220 g，由北京維通利華公司提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，飼養(yǎng)環(huán)境：安靜，12∶12 h明暗光照環(huán)境中(8:00AM-8:00PM)，單籠喂養(yǎng)。

1.1.2 主要試劑 Trizol(美國Invitrogen公司)；M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(寶生物工程(大連)有限公司)；DNase I(美國Fermentas(MBI)公司)；6×Loading Buffer(美國Fermentas(MBI)公司)；dNTP(10 mM)(寶生物工程(大連)有限公司)；2×Ex TaqMix(寶生物工程(大連)有限公司)；RNase-free H2O(韓國Walgene公司)；Eva_green(美國Biotium公司)；5-HT1B多克隆抗體(1∶1000)(美國SANTA CRUZ公司)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 選取40只成年雄性SD大鼠，隨機分為5組，每組8只，對照組(C，只進(jìn)行手術(shù)，不進(jìn)行硬腦膜電刺激)、模型組(M，造模不給予電針)、單穴組(EA1，造模并給予電針風(fēng)池)、雙穴組(EA2，造模并給予電針風(fēng)池、陽陵泉)和假穴組(SA，造模并給予電針假穴)。模型的建立參照先前的實驗方法 1)安置電極：用10%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射，待大鼠完全麻醉后，剔除頭正中部毛發(fā)，俯臥位置于腦立體定位儀上，并將耳桿插入大鼠耳道內(nèi)。皮膚消毒，逐層切開皮膚、肌肉等組織，用蘸有雙氧水的棉簽擦去骨膜，顱骨徹底暴露后，以顱中線冠狀縫交叉點前4 mm為前界，顱中線冠狀縫交叉點后6 mm為后界，用臺式牙科鉆小心鉆開2個直徑約1 mm的圓孔，鉆孔時使用4 ℃生理鹽水以降低鉆及孔的溫度，防止灼傷硬膜；暴露上矢狀竇旁硬腦膜后，將雙極電極放置于鉆好的刺激孔中(除電極外均應(yīng)是絕緣)，輕柔接觸硬膜，以502膠水和牙托粉將電極固定于顱骨骨面，僅留電極接頭于皮膚外，并在孔內(nèi)插入電極保護帽，以防止外刺激孔堵塞。以上所有操作均在無菌條件下進(jìn)行。術(shù)后分籠單獨飼養(yǎng)，溫度為(24±1)℃，麻醉清醒后自由攝取水和食物，常規(guī)使用慶大霉素(0.04 million IU/100 g)，密切觀察生命體征和傷口愈合情況，實驗嚴(yán)格按照國際疼痛學(xué)會(International Association for the Study of Pain，IASP)關(guān)于動物進(jìn)行疼痛研究的倫理綱要進(jìn)行操作，電極脫落或死亡的大鼠予以剔除。2)反復(fù)電刺激：大鼠安置電極后恢復(fù)一周，恢復(fù)后開始電刺激硬腦膜，正式刺激前以1Hz進(jìn)行預(yù)刺激5～10 s，觀察到大鼠1次/s的節(jié)律性點頭動作表示電極安放成功，確定電極安放成功后給予正式電刺激。電刺激參數(shù)：刺激頻率：20 Hz，電流強度：1.8～2.0 mA，脈寬:0.5 ms，波形：方波，刺激時間：15 min，在實驗第1、3、5 d進(jìn)行電刺激。對照組僅安置電極不進(jìn)行電刺激。

1.2.2 電針治療 “穴位”電針：參照《實驗針灸學(xué)》的方法取穴，單穴組取大鼠雙側(cè)“風(fēng)池”穴(GB20)，雙穴組取大鼠雙側(cè)“陽陵泉”穴(GB34)。假穴組取腰部非穴位點。在實驗第1、3、5天進(jìn)行電針治療。電針(直徑0.16 mm)進(jìn)針2～3 mm，連接HANS電針儀，電針參數(shù)：疏密波2/15 Hz,0.5～1 mA，強度以大鼠耳郭輕度抖動或局部肌肉收縮為度，刺激10 min。

1.2.3 大鼠面部機械痛閾(Mechanical Withdrawal Threshold，MWT)的測定 本研究中大鼠面部機械刺激反應(yīng)閾值同樣采用測定。原理是利用不同壓力作用于大鼠面部眶周，引起大鼠的躲避反應(yīng)，以引起躲避反應(yīng)的壓力表示大鼠的機械反應(yīng)閾值。安靜環(huán)境中，將大鼠置于半透明有機玻璃籠中，靠近大鼠頭部的兩側(cè)籠壁上有1 cm×5 cm孔徑。測試前大鼠適應(yīng)環(huán)境15～30 min，用電子von-Frey測痛儀直刺激大鼠面部眶周，大鼠出現(xiàn)躲避行為視為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。每次刺激持續(xù)時間2 s，間隔15 s，出現(xiàn)陽性反應(yīng)的力度即記為面部機械反應(yīng)閾值。在實驗前進(jìn)行面部的痛閾Baseline的測定，在第2、4、6天分別進(jìn)行痛閾測定。

1.2.4 取材 實驗大鼠在第7天取材。PCR取材用10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射麻醉大鼠，剪開胸部，將灌注針由左心室穿入主動脈升部，注入生理鹽水灌注30 min后，取TG和TNC迅速放入液氮中冷凍，凍實后備用。Western blot取材用10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射麻醉大鼠，剪開胸部，將灌注針由左心室穿入主動脈升部，注入生理鹽水，灌注20 min后，取出腦組織后，取TG和TNC迅速放入液氮中冷凍，凍實后備用。

1.2.5 5-HT1B受體基因的相對表達(dá)測定 用相對定量RT-PCR測定。取組織后迅速放液氮中冷凍，凍實后置于研缽中研磨，用Trizol法抽提總RNA，取少量組織用分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳測定RNA質(zhì)量。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒要求，將1 μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。配置PCR反應(yīng)體系25 μL備用，包含2×PCR Taq Mix 12.5 μL，10 μmol/L下游引物各0.5 μL，cDNA模板1 μL，并用滅菌ddH20補足至25 μL。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min，94 ℃變性20 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，擴增40個循環(huán)，最后溶解曲線65～90 ℃。實驗結(jié)束即可得到目的基因與內(nèi)參基因的擴增曲線和溶解曲線。目的基因和內(nèi)參基因均設(shè)置3個復(fù)孔，以表示5-HT1B受體基因的相對表達(dá)量。ΔCt(Ct值目的基因-Ct值內(nèi)參基因)實驗組-ΔCt(Ct值目的基因-Ct值管家基因)對照組，2-(△△CT)=fold difference(實驗組/對照組)其中CT值為PCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)次數(shù)。

1.2.6 5-HT1B受體基因蛋白的測定 實驗步驟嚴(yán)格遵照試劑盒說明書進(jìn)行。將待測定的腦組織從液氮中取出，在冰生理鹽水中洗凈，吸干水分后稱重，加裂解液后在冰上進(jìn)行勻漿，提前預(yù)冷(4 ℃)離心機后進(jìn)行離心(13 000 r/min，20 min)。每等分樣品取1/2上清液，測定其蛋白濃度，將10 g蛋白與上樣緩沖液充分混勻，并煮沸加熱5 min,置于SDS變性聚丙烯胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉1 h，加一抗和單克隆抗β-actin，洗膜，加二抗孵育1 h(抗兔IgG抗體)，再次洗膜，顯影，Gelpro軟件分析可視帶的密度。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠面部機械痛閾(Mechanical Withdrawal Threshold，MWT)水平比較 Von frey測試顯示，模型組、單穴組、雙穴組和假穴組的大鼠面部痛域在實驗第2、4、6天都有下降。在實驗前，各組大鼠面部痛閾值對照組(32.80±2.33)g，模型組(31.92±7.98)g，單穴組(32.96±7.76)g，雙穴組(31.86±4.65)g，假穴組(29.33±4.90)g，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗第2天，模型組(7.82±1.57)g與對照組(37.50±9.51)g比較，痛閾有顯著下降(P<0.001)；單穴組(24.27±5.72)g相較于模型組(7.82±1.57)g痛閾顯著升高(P<0.05)，雙穴組(27.53±7.7)g痛閾相較于模型組(7.82±1.57)g痛閾顯著升高(P<0.05)，同時，雙穴組(27.53±7.7)g痛閾高于單穴組(24.27±5.72)g(P<0.05)；模型組(7.82±1.57)g與假穴組(6.44±1.95)g比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗第4天，模型組(6.74±2.58)g與對照組(32.61±7.71)g比較，痛閾有顯著下降(P<0.001)；單穴組(20.51±3.89)g相較于模型組(6.74±2.58)g痛閾顯著升高(P<0.05)，雙穴組(27.33±7.96)g痛閾相較于模型組(6.74±2.58)g痛閾顯著升高(P<0.01)，同時，雙穴組(27.33±7.96)g痛閾高于單穴組(20.51±3.89)g(P<0.05)；模型組(6.74±2.58)g與假穴組(9.87±3.16)g比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗第6天，模型組(7.14±1.34)g與對照組(33.91±6.43)g比較，痛閾有顯著下降(P<0.05)；單穴組(21.63±1.08)g相較于模型組(7.14±1.34)g痛閾顯著升高(P<0.05)，雙穴組(23.94±3.77)g痛閾相較于模型組(7.14±1.34)g痛閾顯著升高(P<0.05)，同時，雙穴組痛(23.94±3.77)g閾高于單穴組(21.63±1.08)g(P<0.01)；模型組(7.14±1.34)g與假穴組(13.28±2.76)g比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 各組5-HT1B受體基因相對表達(dá)水平比較 實驗結(jié)果顯示，5-HT1B受體基因在各組TNC和TG中均有表達(dá)，模型組5-HT1B受體基因相對表達(dá)水平明顯高于對照組(P<0.05)。與模型組比較，單穴組和雙穴組在TNC和TG基因相對表達(dá)明顯較高(P<0.05)。與假穴組比較，單穴組和雙穴組在TNC和TG的基因相對表達(dá)也呈現(xiàn)高表達(dá)態(tài)勢(P<0.05)。同時，單穴組在TNC和TG的基因相對表達(dá)水平低于雙穴組(P<0.05)。單穴組和雙穴組在TNC和TG的基因相對表達(dá)水平高于假穴組(P<0.05)。在TNC和TG，假穴組與模型組比較基因相對表達(dá)水平，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 各組大鼠TNC和TG中5-HT1B受體基因相對表達(dá)量

注：M組與C組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；M組與EA2組比較，△P<0.05，△△P<0.01，△△△P<0.001；EA2組與EA1組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01，▲▲▲P<0.001；EA1組與M組比較，□P<0.05，□□P<0.01，□□□P<0.001

2.3 各組5-HT1B受體基因蛋白表達(dá)水平比較 模型組5-HT1B受體蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組(P<0.05)。與模型組比較，單穴組和雙穴組在TNC和TG蛋白表達(dá)明顯較高(P<0.05)。與假穴組比較，單穴組和雙穴組蛋白表達(dá)也呈現(xiàn)高表達(dá)態(tài)勢(P<0.05)；同時，單穴組的表達(dá)低于雙穴組(P<0.05)。在TNC和TG，單穴組和雙穴組的蛋白水平大于假穴組(P<0.05)。假穴組與模型組比較，5-HT1B受體蛋白水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

3 討論

偏頭痛作為臨床常見疾病，具有反復(fù)發(fā)作，遷延難愈，疼痛劇烈的特點，其發(fā)病機制尚未完全闡明，目前主要流行的學(xué)說有血管源學(xué)說、神經(jīng)學(xué)說、三叉神經(jīng)血管學(xué)說、遺傳學(xué)說及離子學(xué)說等。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為偏頭痛屬于“頭痛”范疇，亦稱“偏頭風(fēng)”，風(fēng)池穴是電針治療偏頭痛的常用穴位。本課題組的早前調(diào)查表明，風(fēng)池穴是目前偏頭痛動物實驗中較為常用的穴位[16]。本實驗利用行為學(xué)、5-HT1B受體基因相對表達(dá)水平以及5-HT1B受體基因蛋白表達(dá)水平等多種指標(biāo)對假說進(jìn)行了驗證。von Frey測痛數(shù)據(jù)顯示，在實驗第2、4、6天，對照組痛閾高于模型組(P<0.05)，說明造模成功。與模型組比較，在實驗第2、4、6天，單穴組和雙穴組顯著偏高(P<0.05)，且單穴組和雙穴組高于假穴組(P<0.05)，同時，雙穴組高于單穴組(P<0.05)。5-HT1B受體在TNC和TG均有分布。其中，對照組中5-HT1B的表達(dá)水平高于模型組(P<0.05)，說明造模成功。與模型組比較，在單穴組和雙穴組中5-HT1B受體表現(xiàn)為高表達(dá)(P<0.05)，且雙穴組高于單穴組(P<0.05)。這說明電針對偏頭痛可以通過激活5-HT1B起到治療作用，并且局遠(yuǎn)配穴治療方案要優(yōu)于局部單穴治療。在TNC和TG，單穴組和雙穴組的蛋白水平大于假穴組(P<0.05)。假穴組與模型組比較蛋白水平差異統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這說明治療作用是由刺激特定穴位起作用的。

圖2 各組大鼠TNC和TG中5-HT1B受體蛋白表達(dá)水平

目前在偏頭痛的藥物治療當(dāng)中，5-HT1B受體激動劑仍然屬于一線用藥，因此這提示我們5-HT1B受體在抑制偏頭痛的發(fā)作過程當(dāng)中具有重要意義。相關(guān)研究顯示，5-HT1B受體和舒馬曲坦引起的腦血管收縮有關(guān)[17]，這一作用在偏頭痛的發(fā)病機制當(dāng)中占有一席之地，因此，電針對偏頭痛的的治療作用可能部分是通過激活5-HT1B受體來起作用。有研究顯示，針刺風(fēng)池穴可以提高腦內(nèi)的5-HT水平[18]。臨床應(yīng)用當(dāng)中，曲普坦類藥物的縮血管作用所引起的不良反應(yīng)阻礙了其在心血管疾病患者中的應(yīng)用。而相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，5-HT在偏頭痛病理生理機制當(dāng)中，可能不僅作為其血管活性物質(zhì)起作用，還可能具有神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)作用[19]。最近數(shù)據(jù)表明偏頭痛患者的5-HT系統(tǒng)的5-HT轉(zhuǎn)運蛋白基因發(fā)生了改變[20]。因此，電針上調(diào)5-HT表達(dá)水平不僅起到縮血管作用，同時調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌的作用，而這一作用并非像曲普坦類藥物一樣作用于全身，而是直接作用于神經(jīng)系統(tǒng)，因此可避免藥物治療帶來的不良反應(yīng)，使得電針治療更加具有廣泛的應(yīng)用前景。此外，本實驗中沒有利用5-HT1B受體激動劑和抑制劑進(jìn)行驗證，是本實驗的不足，同時也是未來繼續(xù)進(jìn)行實驗研究的方向。同時本實驗未能在電生理方面進(jìn)行驗證。

[1]Lionetto L，Casolla B，Mastropietri F，et al.Pharmacokinetic evaluation of zolmitriptan for the treatment of migraines[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol，2012,8(8):1043-1050.

[2]Murray CJ，Vos T，Lozano R，et al.Disability-adjusted life years(DALYs)for 291 diseases and injuries in 21 regions，1990-2010：a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010[J].Lancet，2012,380(9859):2197-2223.

[3]Steiner TJ,Stovner LJ,Vos T.GBD 2015:migraine is the third cause of disability in under 50s[J].J Headache Pain，2016.17(1)：104.

[4]Liu R，Yu S，He M，et al.Health-care utilization for primary headache disorders in China：a population-based door-to-door survey[J].J Headache Pain，2013,14:47.

[5]Hepp Z，Bloudek LM，Varon SF.Systematic review of migraine prophylaxis adherence and persistence[J].J Manag Care Pharm，2014,20(1):22-33.

[6]Santos JA，López-Díaz TM，García-Fernández MC，et al.Characterization and extracellular activity of psychrotrophic bacteria isolated from Villalón cheese(fresh variety of Spanish sheep′s milk cheese)[J].Int J Food Microbiol，1996,33(2-3):301-306.

[7]Bernstein C，Burstein R.Sensitization of the trigeminovascular pathway：perspective and implications to migraine pathophysiology[J].J Clin Neurol，2012,8(2):89-99.

[8]Noseda R，Burstein R.Migraine pathophysiology：anatomy of the trigeminovascular pathway and associated neurological symptoms，cortical spreading depression，sensitization，and modulation of pain[J].Pain，2013,154 Suppl 1:S44-53.

[9]Pietrobon D，Moskowitz MA.Pathophysiology of migraine[J].Annu Rev Physiol，2013,75:365-391.

[10]Bouchelet I，Cohen Z，Case B，et al.Differential expression of sumatriptan-sensitive 5-hydroxytryptamine receptors in human trigeminal ganglia and cerebral blood vessels[J].Mol Pharmacol，1996,50(2):219-223.

[11]Liu Y，Xu S，Woodruff AL，et al.Structural basis of glycan specificity of P[19] VP8*：Implications for rotavirus zoonosis and evolution[J].PLoS Pathog，2017,13(11):e1006707.

[12]Feniuk W，Humphrey PP，Perren MJ，et al.Rationale for the use of 5-HT1-like agonists in the treatment of migraine[J].J Neurol，1991,238 Suppl 1:S57-61.

[13]Moskowitz MA，Cutrer FM.SUMATRIPTAN：a receptor-targeted treatment for migraine[J].Annu Rev Med，1993,44:145-154.

[14]Melchart D,Linde K,Fischer P，et al.Acupuncture for recurrent headaches：a systematic review of randomized controlled trials[J].Cephalalgia，1999，19(9)：779-786.

[15]von PS，Ting W，Scrivani S，et al.Survey on the use of complementary and alternative medicine among patients with headache syndromes[J].Cephalalgia，2002,22(5):395-400.

[16]劉璐，裴培，王麟鵬.針刺治療實驗性偏頭痛模型大鼠機制的研究進(jìn)展[J].中國針灸，2016,36(3)：331-336.

[17]Bouchelet I，Case B，Olivier A，et al.No contractile effect for 5-HT1D and 5-HT1F receptor agonists in human and bovine cerebral arteries：similarity with human coronary artery[J].Br J Pharmacol，2000,129(3):501-508.

[18]Liu L，Pei P，Zhao LP，et al.Electroacupuncture Pretreatment at GB20 Exerts Antinociceptive Effects via Peripheral and Central Serotonin Mechanism in Conscious Migraine Rats[J].Evid Based Complement Alternat Med，2016,2016:1846296.

[19]Ramírez RMB，Labruijere S，Villalón CM，et al.Activation of 5-hydroxytryptamine1B/1D/1F receptors as a mechanism of action of antimigraine drugs[J].Expert Opin Pharmacother，2013,14(12):1599-1610.

[20]Dussor G.Serotonin，5HT1 agonists，and migraine：new data，but old questions still not answered[J].Curr Opin Support Palliat Care,2014，8(2):137-142.

RegulatingEffectof5-HT1BReceptorsinMigraineRatModelofElectricalStimulatingDuraMaterviaElectroacupuncture

Zhu Yupu, Pei Pei, Liu Lu, Zhao Luopeng, Qu Zhengyang, Wang Linpeng

(BeijingHospitalofTCM,Beijing100010,China)

Objective:To do research on the regulating effect of 5-HT1Breceptors in the migraine rat model of electrical stimulating dura mater via electroacupuncture.Methods40 male SD rats were divide into 5 groups, 8 for each group.Except control group, the electrical stimulation of the dura surrounding the superior sagittal sinus was carried out at the 1st, 3rd and 5th day.The control group

electrode implantation surgery only.At the 2nd, 4th and 6th day, single acupoint group and double acupoint group were received electroacupuncture as treatment.Sham acupuncture group received acupuncture at a non-acupuncture point following dural stimulation.The facial mechanical withdrawal threshold was taken at the 2nd, 4th and 6th day following dural stimulation.Eight rats from each group were decapitated, and the TG and TNC were removed and detected 5-HT1Breceptor mRNA expression by real-time quantitative PCR.5-HT1Breceptor protein was evaluated by western blot.ResultsCompared with the control group, the mechanical withdrawal threshold of model group was declined significantly (P<0.05).Compared with the model group, the mechanical withdrawal threshold of single acupoint group and double acupoint group was declined significantly (P<0.05).Compared with the model group, 5-HT1Breceptor mRNA and protein in TNC and TG tissue of rats in single control group was declined significantly (P<0.05).Compared with the model group, 5-HT1Breceptor mRNA and protein in TNC and TG tissue of rats in single acupoint group and double acupoint group was increased significantly (P<0.05).ConclusionThe electroacupuncture could significantly improve the damage of rat dura mater of superior sagittal sinus in following electrical stimulation by releasing neurotransmitter, which may be the mechanisms of migraine treatment.

Electroacupuncture; Migraine; Dura mater; 5-HT1Breceptor

R245

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.12.050

國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973計劃)項目(2014CB543203)；北京市醫(yī)院管理局臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展專項經(jīng)費資助項目(ZYLX201412);北京市自然科學(xué)基金資助項目(7154205)

朱玉璞(1992.06—)，男，北京中醫(yī)藥大學(xué)2015級在讀碩士研究生，研究方向:電針治療偏頭痛的臨床及機理研究,E-mail：zyp1992@bucm.edu.cn

王麟鵬(1955.05—)，男，本科，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中風(fēng)及痛癥的臨床與機理研究,E-mail：wlp5558@sina.com

(2016-07-07收稿 責(zé)任編輯：楊覺雄)