菜籽餅固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的研究

王明潔，李進(jìn)一，何 榮，章 鋮，史冰清，楊竺紅，袁 建

南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 (南京 210023)

菜籽餅固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的研究

王明潔，李進(jìn)一，何 榮，章 鋮，史冰清，楊竺紅，袁 建

南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 (南京 210023)

在菜籽餅固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽肽小試研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)混菌固態(tài)發(fā)酵菜籽餅的中試發(fā)酵工藝，研究了發(fā)酵前后菜籽餅中抗?fàn)I養(yǎng)因子硫甙、異硫氰酸酯(ITC)、惡唑烷硫酮(OZT)等含量的變化規(guī)律以及營(yíng)養(yǎng)成分粗蛋白、水溶性蛋白、多肽等含量的變化規(guī)律。并且通過高效凝膠過濾色譜法與基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF-MS/MS)對(duì)發(fā)酵菜籽多肽的相對(duì)分子質(zhì)量和氨基酸序列的分析，這使得對(duì)發(fā)酵菜籽餅產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有了更深刻的認(rèn)識(shí)。

菜籽餅；固態(tài)發(fā)酵；蛋白

我國(guó)是一個(gè)傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)大國(guó)，油菜籽產(chǎn)量極高，而且其種植面積、油菜籽產(chǎn)量都位列世界第一。2016年我國(guó)油菜籽的播種面積達(dá)到710萬hm2，單位產(chǎn)量為1.972 t/hm2，2016年我國(guó)油菜籽產(chǎn)量約為1 400萬t。菜籽餅粕是一種重要的植物蛋白資源，菜籽餅粕所含營(yíng)養(yǎng)成分主要包括多種維生素、碳水化合物、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)[1]，對(duì)于蛋白質(zhì)飼料而言，是一種重要的蛋白補(bǔ)充資源，其粗蛋白含量一般在35%～40%。而且碳水化合物20%～25%，鈣0.61%，磷0.95%，消化能10.46～12.55 kJ/kg。和豆粕對(duì)比而言，菜籽餅粕含有較高的蛋白質(zhì)，而且還有豐富的氨基酸，但是菜籽餅粕除粗纖維外，還含有單寧、硫甙等抗?fàn)I養(yǎng)因子，影響其作為飼料的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率、安全性。

微生物發(fā)酵法可以有效降解硫甙等抗?fàn)I養(yǎng)因子，將大分子菜籽蛋白酶解成低分子肽，并盡可能提升蛋白質(zhì)的利用率[2]。微生物發(fā)酵法安全，高效，應(yīng)用范圍廣，同時(shí)微生物固態(tài)發(fā)酵的環(huán)境要求不高，工藝流程容易實(shí)現(xiàn)，不會(huì)破壞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[3]。本實(shí)驗(yàn)在菜籽餅固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽肽小試研究的基礎(chǔ)上，確定30 L固態(tài)發(fā)酵罐的中試發(fā)酵工藝，并對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，比較發(fā)酵前后菜籽餅營(yíng)養(yǎng)價(jià)值變化，為發(fā)酵飼料放大試驗(yàn)與應(yīng)用提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菌種：Bacillus subtilis 20030、Actinomucor elegans 40252 ,購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心；菜籽餅，粗蛋白質(zhì)含量38.78%，水分10.24%，粗脂肪含量13.22%，硫甙含量50.39 μmol/g，購(gòu)于南通如東縣躍洋貿(mào)易商行；牛血清蛋白、細(xì)胞色素C(馬心)、蛋白酶抑制劑、桿菌肽、谷胱甘肽(還原型)，北京索萊寶科技有限公司；乙腈，色譜純；其他試劑均為分析純。

1.2 培養(yǎng)基

枯草芽孢桿菌采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨5.0 g，牛肉膏3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂15.0 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0，121 ℃滅菌20 min，不加瓊脂作液體培養(yǎng)基使用。

雅致放射毛霉采用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)。

發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基：菜籽餅95%，麩皮5%，料液比1∶1.35，葡萄糖添加量0.5%，KH2PO4添加量0.36%。

1.3 儀器與設(shè)備

超凈工作臺(tái)，蘇凈集團(tuán)安泰公司；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠；全溫立式振蕩培養(yǎng)箱，太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；實(shí)驗(yàn)室粉碎磨(JFSD-70)，嘉定糧油檢測(cè)儀器公司；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋，國(guó)華電器有限公司；冷凍離心機(jī)(Beckman Coulter J6)， Beckman Coulter公司；多功能酶標(biāo)儀(SpectraMax M2e)，美國(guó)Molecular Devices公司；PQX型多段可編程培養(yǎng)箱，寧波東南儀器有限公司；Waters 2998高效液相色譜儀，waters公司；30 L固體發(fā)酵罐，上海保興生物設(shè)備工程有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1試驗(yàn)菌種及其種子液的制備

菌種活化：將原始菌株接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，備用。

一級(jí)種子液的制備：枯草芽孢桿菌：取一活化的菌種，接入裝量為50 mL種子培養(yǎng)基的三角瓶中，30 ℃，150 r/min培養(yǎng)24 h。

發(fā)酵種子液的制備：枯草芽孢桿菌：從上述培養(yǎng)好的一級(jí)種子液中，接取2 mL種子液(接種量為2%，v/v)到裝量為100 mL種子培養(yǎng)基的三角瓶中，30 ℃，150 r/min培養(yǎng)24 h，制成發(fā)酵種子液。雅致放射毛霉：從試管斜面里取出毛霉，接于毛霉種子培養(yǎng)液里，30 ℃，150 r/min培養(yǎng)48 h，即成毛霉菌懸液。

1.4.2中試試驗(yàn)方法

中試發(fā)酵方法：參照混菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菜籽肽的優(yōu)化條件[4]，釆用雅致放射毛霉和枯草芽孢桿菌混菌。在30 L固態(tài)發(fā)酵罐內(nèi)對(duì)發(fā)酵混合物進(jìn)行蒸汽滅菌，間隔50 min對(duì)發(fā)酵混合物進(jìn)行約1 min的正反攪拌，持續(xù)通入無菌空氣以保證有氧環(huán)境，發(fā)酵溫度保持在32.0 ℃，發(fā)酵一定時(shí)間后取樣保存在零下4 ℃，以進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行干燥處理。

發(fā)酵混合物組成為：菜籽餅3 800 g、麩皮200 g，固液比1∶1.35，葡萄糖添加量為固液總質(zhì)量的0.5%，KH2PO4添加量為固液總質(zhì)量的0.36%，枯草芽孢桿菌接種量為600 mL，雅致放射毛霉接種量為150 mL(兩菌接種體積比4∶1)，混勻。

1.4.3發(fā)酵基質(zhì)的處理

取5.0 g發(fā)酵后的固態(tài)基質(zhì)，加50mL蒸餾水，磁力攪拌30 min，4 ℃條件下6 000×g離心20 min，收集上清液。用0.22 μm微孔濾膜過濾上清液，除去不溶物和細(xì)菌，備用。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1硫甙含量的測(cè)定

硫甙含量的測(cè)定采用氯化鈀法[5]。硫甙的降解率按以下公式計(jì)算：

(1)

1.5.2異硫氰酸酯(ITC)和惡唑烷硫酮(OZT)含量的測(cè)定

ITC采用硫脲比色法，NY/T 1596—2008。

OZT采用紫外分光光度法，NY/T 1799—2009。

計(jì)算公式如下：

(2)

(3)

1.5.3單寧含量的測(cè)定

單寧含量的測(cè)定，采用鄰二氮菲-鐵(Ⅲ)分光光度法測(cè)定[6]。

1.5.4植酸含量的測(cè)定

植酸含量的測(cè)定，采用三氯化鐵比色法[7]。

1.5.5粗纖維含量的測(cè)定

粗纖維含量的測(cè)定，根據(jù)GB/T 6434—2006。

1.5.6粗蛋白和水溶性蛋白含量的測(cè)定

凱氏定氮法，GB/T 5511。其中，氮溶解指數(shù)(%)按以下公式計(jì)算：

(4)

1.5.7粗脂肪和灰分含量的測(cè)定

粗脂肪和灰分分別采用GB/T 6433—2006和GB/T 6438—2007測(cè)定。

1.5.8蛋白酶活力的測(cè)定

蛋白酶活力的測(cè)定采用福林法，GB/T 23527—2009。

其中，蛋白酶活力標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

(5)

1.5.9多肽含量測(cè)定

根據(jù)魯偉[8]，王雪峰[9]的蛋白水解液中多肽含量的測(cè)定方法。

其中，以Gly-Gly-Tyr-Arg四肽作為標(biāo)準(zhǔn)品制作多肽標(biāo)準(zhǔn)曲線：

(6)

1.5.10菜籽多肽相對(duì)分子量分布的測(cè)定

高效凝膠過濾色譜法：采用Waters 2998高效液相色譜儀，測(cè)定菜籽多肽相對(duì)分子量分布。

色譜柱，TSK gel G2000SWXL，300 mm×7.8 mm；流動(dòng)相，乙腈∶水=20∶80，并添加0.1%的三氟乙酸；流速0.5 mL/min；進(jìn)樣體積20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；柱溫：室溫。

分子量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品：牛血清蛋白(Mw68000)、細(xì)胞色素C(Mw12384)、蛋白酶抑制劑(Mw6511.51)、桿菌肽(Mw1422)、還原型谷胱甘肽(Mw307)。以相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)(lgMw)對(duì)洗脫體積作圖得到分子校正曲線。

1.5.11發(fā)酵菜籽餅中多肽氨基酸序列分析

(1)色譜條件

色譜柱，TSK gel G2000SWXL，300 mm×7.8 mm；流動(dòng)相，A：乙腈，B：水+0.1%甲酸；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；流速0.4 mL/min；進(jìn)樣體積10 μL；柱溫：室溫；洗脫條件：等度洗脫45 min，20%A+80%B。

(2)質(zhì)譜條件

破碎電壓1.0 V；正離子模式；自動(dòng)MS/MS(n)；質(zhì)量掃描范圍 100～2 000 M/Z。

將發(fā)酵處理液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，進(jìn)樣，數(shù)據(jù)采集結(jié)束后，得到總離子流圖，液相圖，一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖，用PEAKS軟件(Version 6.0)解析串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

測(cè)試多個(gè)樣品，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，平均值之間的差異由Duncan的多范圍檢驗(yàn)進(jìn)行處理，顯著性定義為p <0.05。圖表由Graph Pad Prism 7繪制。

2 結(jié)果與討論

2.1 菜籽餅中試發(fā)酵結(jié)果與分析

2.1.1發(fā)酵前后菜籽餅抗?fàn)I養(yǎng)因子含量變化

菜籽餅抗?fàn)I養(yǎng)因子含量隨發(fā)酵天數(shù)變化結(jié)果見表1，發(fā)酵后菜籽餅抗?fàn)I養(yǎng)因子除了單寧的含量由0.64%提高到1.48%外，其余抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量顯著降低，其中硫甙的含量由50.39 μmol/g降低到32.61 μmol/g，硫甙降解率為35.28%；ITC與OZT的含量在發(fā)酵4 d后分別降低了42.01%與61.84%，第5 d起ITC與OZT的含量極低，儀器未檢出；植酸與粗纖維分別下降了31.87%與15.53%。

如圖1所示，隨著發(fā)酵的進(jìn)行，在2～3 d時(shí)硫甙被大量降解，而硫甙降解率在發(fā)酵第4 d后趨于穩(wěn)定，表明發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)并沒有對(duì)硫甙降解率產(chǎn)生太大影響，與鞠興榮等[10]小試研究結(jié)論相似。分析其原因可能是，在混菌發(fā)酵中，枯草芽孢桿菌是分泌芥子酶的主要微生物，在發(fā)酵前72 h，枯草芽孢桿菌快速繁殖，產(chǎn)生大量芥子酶系降解硫甙；在發(fā)酵后期，枯草芽孢桿菌進(jìn)入衰亡期，菌落大量死亡，因此發(fā)酵5 d后硫甙降解率趨于穩(wěn)定。

表1 發(fā)酵前后菜籽餅抗?fàn)I養(yǎng)因子含量變化(干基)

注：數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，不同的小寫字母表示同一列中存在顯著差異(p<0.05)。

圖1 不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)硫甙降解率和蛋白酶活的影響

隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，菜籽餅中單寧含量不斷增加。 李丹等[11]在分析不同大豆原料中單寧含量差別時(shí)，同樣發(fā)現(xiàn)與普通豆粕、膨化豆粕和膨化大豆相比，發(fā)酵豆粕中單寧含量最高。其原因可能是在發(fā)酵過程中，原本表面光滑，排列緊密，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)清晰的菜籽餅在微生物的作用下網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失，粗糙，孔隙增多[12]，致使菜籽餅內(nèi)單寧大量游離出來所以單寧含量不斷增加。

2.1.2發(fā)酵前后菜籽餅營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量變化

菜籽餅營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量隨發(fā)酵天數(shù)變化結(jié)果見表2，粗蛋白和水溶性蛋白含量分別由38.78%、2.89%增加到44.23%、18.72%；多肽含量在發(fā)酵6 d后增加到8.87%，提高了303.18%；粗脂肪的含量降低了35.4%。

表2 發(fā)酵前后菜籽餅營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量變化(干基)%

枯草芽孢桿菌和雅致放射毛霉是中性蛋白酶的重要生產(chǎn)菌，利用這兩種菌固態(tài)發(fā)酵菜籽餅，不僅可以降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，而且可以增加多肽的含量。經(jīng)研究表明，在三角瓶小試階段，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，肽得率不斷增加，在發(fā)酵第4～5 d，多肽含量達(dá)到最大值并趨于穩(wěn)定。

本研究發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵罐中試階段，如圖2所示，肽得率和氮溶解指數(shù)在發(fā)酵5 d后仍顯著上升，在第8 d達(dá)到最大值并趨于穩(wěn)定。由圖2可知，在發(fā)酵第7 d時(shí)蛋白酶活力才達(dá)到最大。分析其原因有以下兩方面，一是在中試階段，隨著發(fā)酵菜籽餅的量大大增加，枯草芽孢桿菌和雅致放射毛霉與菜籽餅接觸不充分，其胞外蛋白酶與菜籽餅的作用時(shí)間將延長(zhǎng)；二是枯草芽孢桿菌與雅致放射毛霉生長(zhǎng)周期不同步，在發(fā)酵第5 d，枯草芽孢桿菌進(jìn)入衰亡期，而此時(shí)雅致放射毛霉仍然生長(zhǎng)旺盛，產(chǎn)酶量較多，因此蛋白酶活性在發(fā)酵第5 d后依然增加。但是，在發(fā)酵6 d后，發(fā)酵菜籽餅出現(xiàn)較為強(qiáng)烈的氨味。因此，在發(fā)酵罐中試階段，混菌發(fā)酵菜籽餅的最佳時(shí)間為5～6 d。

圖2 不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵指標(biāo)的影響

2.2 混菌發(fā)酵處理液中菜籽蛋白肽的分子量分布

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

得到標(biāo)準(zhǔn)品凝膠過濾色譜圖，如圖3所示。

圖3 混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)凝膠過濾色譜圖

峰號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品洗脫體積/mL相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)/lgM1牛血清蛋白11．468680004．8332細(xì)胞色素C12．257123844．0933抑肽酶14．5326511．513．8144桿菌肽17．19814223．1535還原型谷胱甘肽20．3163072．487

表3是各標(biāo)準(zhǔn)品的洗脫體積、相對(duì)分子質(zhì)量和相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)的對(duì)應(yīng)關(guān)系。以相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)(lgMw)對(duì)洗脫體積V做線性回歸，得到線性回歸方程：lgMw=-0.239 94V+7.311 87，R2=0.951 77。

2.2.2發(fā)酵前后菜籽蛋白肽的分子量分布結(jié)果分析

動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)及氨基酸的消化利用率是評(píng)判飼料蛋白質(zhì)品質(zhì)的主要標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵微生物可以將大分子菜籽蛋白分解為小分子多肽，多肽易于被消化道吸收且具有調(diào)節(jié)生理功能、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)氨基酸吸收等作用，而其生理活性取決于多肽分子量大小及氨基酸序列。

發(fā)酵前菜籽蛋白肽的洗脫曲線如圖4，發(fā)酵第1 d、3 d和5 d發(fā)酵處理液中菜籽蛋白多肽的洗脫曲線如圖5，使用GPC軟件對(duì)色譜圖處理得到發(fā)酵前后多肽的分子量分布，結(jié)果見表4。

圖4 發(fā)酵前菜籽蛋白肽的分子量分布

圖5 發(fā)酵處理液中菜籽蛋白肽的分子量分布

發(fā)酵前菜籽多肽含量很少，多肽的相對(duì)分子質(zhì)量主要分布在1 000 Da以下，相對(duì)分子質(zhì)量在500～1 000 Da范圍的含量約為9.14%，相對(duì)分子質(zhì)量比較集中在500 Da以下，含量約為60%，還有約20%的組分為游離氨基酸以及具有有不飽和雙鍵結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)?？莶菅挎邨U菌和雅致放射毛霉混菌固態(tài)發(fā)酵菜籽餅，產(chǎn)生胞外中性蛋白酶，將大分子蛋白質(zhì)分子逐漸酶解為多肽，并進(jìn)一步裂解為小分子多肽和氨基酸殘基。發(fā)酵第5 d時(shí)，發(fā)酵處理液中菜籽多肽相對(duì)分子質(zhì)量在5 000～10 000 Da的組分含量約為8.38%，寡肽含量比較豐富，約占重量的75%，其中相對(duì)分子質(zhì)量在1 000 Da左右的組分約為26.45%，相對(duì)分子質(zhì)量在100～500 Da組分約為26.16%。將圖5發(fā)酵第1 d、第3 d與第5 d進(jìn)行比較，可以看出，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵處理液中多肽含量增加并且小分子多肽含量占比逐漸增大。

表4 發(fā)酵前后多肽的分子量分布

3.2.3發(fā)酵菜籽肽二級(jí)質(zhì)譜分析

圖6 發(fā)酵菜籽肽二級(jí)質(zhì)譜圖

如圖6(a)，M/Z的值為57.0，與分子量為75的G脫去一分子水相等，則M/Z的值為57.0的峰應(yīng)該是分子量為75的G；而M/Z的值為106.0的峰應(yīng)該是分子量為105的S與H+結(jié)合的正離子，則M/Z值為161.0的峰的氨基酸序列應(yīng)該是：-G-S-。

由圖6(b)可以推斷，M/Z的值為101.0，而分子量為120的T脫去一分子水為102.0，與101.0接近，則M/Z的值為101.0的峰應(yīng)該是分子量為120的T；M/Z的值為56.9的峰與分子量為57的G接近，則M/Z值為159的峰的氨基酸序列應(yīng)該是：-T-G-。

谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸縮合而成的活性三肽，具有清除自由基、延緩衰老、抵御細(xì)胞脂質(zhì)過氧化等生理功能，是一種天然的抗氧化肽[13]。章邵兵等[14]利用電噴霧質(zhì)譜測(cè)得一個(gè)菜籽抗氧化肽的結(jié)構(gòu)為T-P-L-T-G，其中活性最高的抗氧化肽的N端殘基為Tyr。因此，分析得出的-Gly-Ser-和-Thr-Gly-片段可能是菜籽抗氧化肽的殘基，也驗(yàn)證了菜籽肽具有抗氧化性[15]。

3 結(jié)論

根據(jù)混菌固態(tài)發(fā)酵菜籽餅的中試發(fā)酵工藝，研究發(fā)現(xiàn)菜籽餅發(fā)酵前后抗?fàn)I養(yǎng)因子除了單寧的含量提高外，硫甙、異硫氰酸酯(ITC)、惡唑烷硫酮(OZT)、植酸、粗纖維等抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量顯著降低。營(yíng)養(yǎng)因子粗蛋白和水溶性蛋白含量增加；粗脂肪的含量降低了；多肽含量顯著增加在第8天達(dá)到最大值。并且通過質(zhì)譜分析表明發(fā)酵菜籽肽的相對(duì)分子質(zhì)量大小范圍在1000Da以下；并且發(fā)酵菜籽餅中含有大量如-G-S-、-T-G-等的二肽，這使得對(duì)發(fā)酵菜籽餅產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有了更深刻的認(rèn)識(shí)。

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Studyofproteinfeedbysolid-statefermentationofrapeseedcake

Wang Mingjie, Li Jinyi, He Rong, Zhang Cheng, Shi Bingqing, Yang Zhuhong, Yuan Jian

College of Food Science and Engineering, Nanjing University of Finance & Economics (Nanjing 210023)

Based on the small-scale study on the production of rapeseed peptides by solid-state fermentation of rapeseed cake, according to the fermentation technology of fermented rapeseed cake, the changes of anti-nutritional factors such as glucosinolate, isothiocyanate (ITC) and oxazolidine thione (OZT) in rapeseed cake before and after fermentation were studied. In addition, the changes of crude protein, water-soluble protein, peptides and other changes were studied. The relative molecular mass and amino acid sequence of the rapeseed peptides were analyzed by high performance gel filtration chromatography and MALDI-TOF/TOF-MS/MS, which makes it a deeper understanding of the moment on the nutritive value of fermented rapeseed cake products.

rapeseed cake; pilot scale fermentation; protein

2017-09-30

南京市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(201505056)，六大人才高峰資助項(xiàng)目(NY-060)。

王明潔，女，1963年出生，副教授，主要研究方向農(nóng)產(chǎn)品加工與貯藏。

TS201

A

1672-5026(2017)06-078-07