痛麻杞寧口服液對實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠的降糖作用研究*

王 琳 孟慶巖 曹秀蓮 甄亞欽 劉 姣(唐山 064100)

河北省玉田縣中醫(yī)院

方藥研究

痛麻杞寧口服液對實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠的降糖作用研究*

王 琳 孟慶巖 曹秀蓮 甄亞欽 劉 姣△(唐山 064100)

河北省玉田縣中醫(yī)院

目的：研究痛麻杞寧口服液對實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠的影響。方法：通過腹腔注射四氧嘧啶復(fù)制小鼠糖尿病模型。選取血糖為10～25 mmol/L的小鼠隨機(jī)分為5組，分別為模型組、陽性藥組、痛麻杞寧口服液高劑量組、中劑量組和低劑量組，每組10只，另設(shè)空白組10只，連續(xù)給藥(水)6周。給藥期間每周測體質(zhì)量1次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，以代謝籠記錄小鼠的進(jìn)食量及飲水量，檢測小鼠的空腹血糖值、糖耐量、糖化血紅蛋白(HbA1c)及空腹血清胰島素(FINS)水平。結(jié)果：結(jié)果顯示，給藥各組小鼠精神狀態(tài)明顯優(yōu)于模型組。從第4周開始，高劑量組小鼠體質(zhì)量明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)；從第5周開始，中劑量組小鼠體質(zhì)量明顯高于模型組(P<0.05)。高劑量組小鼠的飲食量、飲水量、空腹血糖值、糖耐量及HbA1c值明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)，F(xiàn)INS水平明顯高于模型組(P<0.05)。結(jié)論：痛麻杞寧口服液有較好的降血糖作用，并能改善糖耐量，其作用與改善胰島功能，促進(jìn)胰島素的釋放有關(guān)。

痛麻杞寧口服液；糖尿??；消渴；痹癥；降血糖；益氣養(yǎng)陰化瘀；四氧嘧啶；二甲雙胍

痛麻杞寧口服液為河北省玉田縣中醫(yī)院院內(nèi)制劑，是在傳統(tǒng)經(jīng)方黃芪桂枝五物湯基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代研究成果和臨床經(jīng)驗(yàn)研制而成，由黃芪、熟地黃、丹參、當(dāng)歸、桃仁、紅花、赤芍、雞血藤、牛膝、白芍、蒼術(shù)、黃柏、桂枝、枸杞子、桑寄生等組成，具有益氣養(yǎng)陰、化瘀止痛功效。[1]該藥臨床主要用于糖尿病周圍神經(jīng)病變的治療，療效顯著，但作用機(jī)制不明。本研究采用四氧嘧啶復(fù)制實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠模型，以痛麻杞寧口服液進(jìn)行干預(yù)，探究該藥的降血糖作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 KM小鼠，清潔級，雄性，體質(zhì)量18～22 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證 SYXK(冀)2016-0047，動物合格證號1704035。四氧嘧啶，購自美國Sigma公司；陽性藥鹽酸二甲雙胍片，0.25 g/片，江蘇方強(qiáng)制藥有限公司，生產(chǎn)批號20160116；痛麻杞寧口服液，10 mL/支，河北省玉田縣中醫(yī)院；強(qiáng)生穩(wěn)豪血糖試紙，強(qiáng)生醫(yī)療器械有限公司；糖化血紅蛋白(HbAlc)試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；胰島素放射免疫分析藥盒，北京北方生物技術(shù)研究所。強(qiáng)生穩(wěn)豪血糖儀，強(qiáng)生醫(yī)療器械有限公司。

1.2 方法

1.2.1 模型的制備：取KM小鼠50只，禁食24 h后，腹腔注射四氧嘧啶250 mg/kg體質(zhì)量。第5 d小鼠禁食4 h后，尾部取血，檢測血糖，選取空腹血糖值為10～25 mmol/L的小鼠用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 分組與處理: 取KM小鼠10只，作為正常空白對照組。將造模成功的小鼠50只按血糖隨機(jī)分為5組，分別為模型對照組、痛麻杞寧口服液高劑量組(20 mL原液/kg體質(zhì)量)、中劑量組(10 mL原液/kg體質(zhì)量)、低劑量組(5 mL原液/kg體質(zhì)量)及陽性藥二甲雙胍組(200 mg/kg體質(zhì)量)，每組10只。灌胃給藥(或蒸餾水)，連續(xù)6周。實(shí)驗(yàn)過程中，各組小鼠每周測體質(zhì)量1次，同時觀察小鼠的精神狀態(tài)和大小便情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，以代謝籠記錄小鼠的進(jìn)食量及飲水量。

1.2.3 葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(GTT):末次給藥后，各組小鼠禁食12 h，灌胃葡萄糖2 g/kg體質(zhì)量，尾部取血，用血糖儀測定0、0.5、2 h的血糖值，并按下式計算血糖-時間曲線下面積(AUC)，AUC(mmol·h/L)=血糖曲線下面積=1/2×(0 h血糖值+ 0.5 h血糖值)×0.5+1/2×(2 h血糖值+ 0.5 h血糖值)×1.5=0.25×(0 h血糖值+4×0.5 h血糖值+3×2 h血糖值)。

1.2.4 測定糖化血紅蛋白(HbA1c)及空腹血清胰島素(FINS)水平: 末次給藥后，各組小鼠禁食12 h，摘眼球取血，取部分全血以分光光度法測定HbA1c水平，結(jié)果以HbA1c與血紅蛋白(Hb)的百分比表示；剩余血液離心分離血清以放免法測定空腹FINS水平。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠一般情況的影響 實(shí)驗(yàn)過程中可見，空白組小鼠精神狀態(tài)良好，個體較大，皮毛整潔，墊料干燥；模型組小鼠精神萎靡，個體瘦小，皮毛濕污，皮膚如有傷口不易愈合，墊料濕，有爛蘋果味，需經(jīng)常更換；各給藥組小鼠，雖情況不佳，但好于模型組小鼠，可見精神狀態(tài)良好，較為活潑。

2.2 對小鼠體質(zhì)量的影響 實(shí)驗(yàn)初始，各組小鼠體質(zhì)量差異無顯著性(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)過程中，可見空白組小鼠體質(zhì)量持續(xù)增長。而糖尿病模型小鼠體質(zhì)量則無明顯變化，甚至個別小鼠出現(xiàn)體質(zhì)量降低；從第3周開始，模型組小鼠的體質(zhì)量顯著低于空白組(P<0.01)。各給藥組小鼠體質(zhì)量則出現(xiàn)緩慢增長，從第4周開始，高劑量組小鼠體質(zhì)量明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)；從第5周開始，中劑量組小鼠體質(zhì)量明顯高于模型組(P<0.05)。詳見表1。

組別第1周第2周第3周第4周第5周第6周空白組21.47±3.0125.56±2.6831.51±3.72**36.48±3.96**41.18±4.06**42.54±4.82**模型組20.89±2.9725.02±3.8224.84±5.1625.04±5.9726.25±5.5826.86±5.95陽性組21.95±2.3725.08±3.4126.46±5.6228.29±6.5529.28±6.9728.89±6.86高劑量組20.93±3.8724.93±2.9827.65±4.9431.47±7.07*33.64±6.51*35.27±6.02**中劑量組22.03±3.7125.01±3.5427.31±5.9229.16±6.0431.22±7.57*33.54±7.31*低劑量組21.67±2.9824.88±3.1825.28±5.8727.63±7.0128.12±7.7829.09±7.92

注：與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01

2.3 對小鼠24 h進(jìn)食量、飲水量的影響 糖尿病模型小鼠的進(jìn)食量及飲水量顯著高于空白組(P<0.01)，體現(xiàn)了糖尿病多飲、多食的特點(diǎn)，表明模型復(fù)制成功。與模型組相比，陽性組及痛麻杞寧口服液高劑量組小鼠進(jìn)食量明顯減少(P<0.05),中劑量組及低劑量組小鼠24 h進(jìn)食量也出現(xiàn)減少，但較模型組差異無顯著性(P>0.05)；陽性組及痛麻杞寧口服液高劑量組小鼠飲水量顯著減少(P<0.01)，中劑量組小鼠飲水量也明顯減少(P<0.05)，低劑量組小鼠飲水量與模型組相比雖差異無顯著性(P>0.05)，但也出現(xiàn)降低趨勢。詳見表2。

組別n進(jìn)食量(g)飲水量(mL)空白組107.42±3.21**7.23±4.08**模型組1013.21±4.1225.50±4.96陽性組109.38±3.97*18.00±5.77**高劑量組108.32±4.62*16.63±5.31**中劑量組1011.24±4.2719.57±4.78*低劑量組1011.94±5.0122.71±5.04

注：與模型組相比，*P<0.05， **P<0.01

2.4 對小鼠空腹血糖及糖耐量的影響 實(shí)驗(yàn)初始時，模型組及各給藥組小鼠空腹血糖值無明顯差異(P>0.05)，均較空白組小鼠血糖顯著升高(P<0.01)，說明造模成功。末次給藥后，與模型組相比，陽性組小鼠空腹血糖顯著降低(P<0.01)，痛麻杞寧口服液高劑量組小鼠空腹血糖也明顯降低(P<0.05)，中劑量及低劑量組小鼠空腹血糖值較模型組雖差異無顯著性(P>0.05)，但均出現(xiàn)了不同程度的降低。模型組小鼠的糖耐量顯著高于空白組(P<0.05)。與模型組相比，陽性組小鼠糖耐量顯著降低(P<0.01)，痛麻杞寧口服液高劑量組小鼠糖耐量明顯降低(P<0.05)，中劑量及低劑量組小鼠糖耐量也出現(xiàn)降低，但差異無顯著性(P>0.05)。詳見表3。

組別n初始血糖 (mmol/L) 末次空腹血糖(mmol/L)糖耐量空白組104.27±0.59**4.48±0.72**10.68±1.32**模型組1018.25±5.1923.20±7.8551.90±14.03陽性組1017.99±6.1411.56±7.49**22.30±7.48**高劑量組1018.14±6.2216.61±5.97*39.25±12.98*中劑量組1019.03±5.9117.68±6.3144.86±14.21低劑量組1018.86±4.3619.22±6.9547.33±17.56

注：與模型組相比，*P<0.05 ，**P<0.01

2.5 對小鼠血漿HbA1c及FINS水平影響 與空白組相比，糖尿病模型小鼠HbA1c水平顯著提高(P<0.01)，F(xiàn)INS水平顯著降低(P<0.01)，說明造模成功。與模型組相比，陽性組及痛麻杞寧口服液高劑量組小鼠HbA1c水平降低(P<0.05)，F(xiàn)INS水平升高(P<0.05)；中劑量組及低劑量組小鼠HbA1c及FINS水平與模型組相比差異無顯著性(P>0.05)。詳見表4。

組別nHbA1c(%) FINS(mU/L)空白組104.37±1.98**37.24±9.34**模型組109.73±3.4321.68±9.47陽性組106.02±2.97*33.27±13.72*高劑量組106.95±2.15*31.82.±11.15*中劑量組108.05±3.3228.43±10.35低劑量組108.84±4.2124.26±7.74

注：與模型組相比，*P<0.05 **P<0.01

3 結(jié)論

糖尿病是以高血糖為主要特征的全身代謝紊亂性疾病?；颊呷绮荒芗皶r、有效的控制血糖，就會在神經(jīng)系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)、腎臟、眼部等發(fā)生多種并發(fā)癥。[2]其中，糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)是糖尿病患者最常見的并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明，一般認(rèn)為本病的發(fā)生與長期高血糖引起血管和神經(jīng)受損，尤其微血管病變與神經(jīng)病變密切相關(guān)。[3]治療以控制血糖為主，兼以改善微循環(huán)及營養(yǎng)神經(jīng)。DPN屬于中醫(yī)“血痹”“痹癥”“痿證”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為，其發(fā)病主要是由于氣陰兩虛，燥熱內(nèi)結(jié)，病久入絡(luò)，致瘀血阻絡(luò)，使血脈瘀滯，影響氣血運(yùn)行，氣化不利所致。[4]中藥治療多以益氣養(yǎng)陰治本，在此基礎(chǔ)上配合清熱燥濕、活血通絡(luò)等法，標(biāo)本兼治，臨床療效良好。

痛麻杞寧口服液方中黃芪益氣固表為君藥；丹參、桃仁、紅花、赤芍入血分，活血化瘀，通絡(luò)止痛，散瘀消癥；當(dāng)歸補(bǔ)血，以助藥力；佐以熟地黃滋陰養(yǎng)血，雞血藤活血通經(jīng)、舒筋活絡(luò)，牛膝、蒼術(shù)、黃柏清熱燥濕，桂枝、白芍溫中散寒，枸杞子、桑寄生強(qiáng)筋骨、益肝腎。諸藥相伍益氣養(yǎng)陰而不滋膩，化瘀止痛，標(biāo)本兼治。臨床研究證實(shí)，本藥治療DPN療效顯著，能輔助降低血糖，顯著改善患者感覺異常，感覺缺失、疼痛等癥狀。本藥雖臨床使用有效，但其作用機(jī)理不明。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，方中黃芪、丹參、桃仁、紅花、熟地黃、當(dāng)歸、枸杞子等多味中藥均有降血糖作用。[5]為探究痛麻杞寧口服液治療DPN的作用機(jī)理，觀察其對血糖的影響，本研究復(fù)制四氧嘧啶糖尿病小鼠模型，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

目前，在對糖尿病的診斷中，空腹血糖和餐后2 h血糖可在一定程度上作為評價病情的指標(biāo)，但其易受糖代謝的影響，因而不能完全反映血糖控制的效果。[2]而糖耐量和糖化血紅蛋白值則能夠更為全面、準(zhǔn)確的為糖尿病提供診提供斷依據(jù)。糖耐量是指人體對血糖的耐受力。HbAlc是比血糖更為穩(wěn)定的糖尿病檢測指標(biāo)，因?yàn)槠渖珊箅y以分解，不易受到短暫血糖波動的影響，因而不受取血時間、飲食情況、胰島素分泌等因素的干擾。所測得的HbAlc，雖不能反映短期內(nèi)血糖的波動情況，但卻能夠用于評價最近8～12周血糖的控制情況，因此臨床將其作為檢測和監(jiān)測糖尿病的金標(biāo)準(zhǔn)。[2，5]

四氧嘧啶是胰島β細(xì)胞毒劑，通過產(chǎn)生超氧自由基破壞β細(xì)胞，β細(xì)胞合成前胰島素減少，最終導(dǎo)致胰島素分泌減少，產(chǎn)生高血糖。[5]研究表明，四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的制備受飼養(yǎng)情況、給藥劑量、給藥次數(shù)、動物體質(zhì)量、性別、個體差異等多種因素的影響，實(shí)驗(yàn)因素的改變，有可能造成實(shí)驗(yàn)動物的死亡率、轉(zhuǎn)陰率升高，模型成果率降低，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。[5]因此，本項(xiàng)目組前期對造模方法進(jìn)行了探索。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選擇腹腔注射四氧嘧啶250 mg/kg體質(zhì)量，空腹血糖值在10～25 mmol/L的個體。由于空腹血糖值低于10 mmol/L時，胰島β細(xì)胞損傷輕微，易于轉(zhuǎn)陰；如果空腹血糖值高于25 mmol/L 則容易引起胰腺和肝功能的嚴(yán)重?fù)p傷，致使模型小鼠出現(xiàn)糖、蛋白質(zhì)和脂肪代謝紊亂，引起死亡，故而空腹血糖值選擇在10～25 mmol/L。此法所復(fù)制的糖尿病小鼠模型結(jié)果可靠，造模5 d后，可見小鼠空腹血糖值較空白組顯著提高；實(shí)驗(yàn)過程中，造模小鼠出現(xiàn)精神萎靡不振，體質(zhì)量減輕，24 h進(jìn)食量、飲水量較空白組顯著增加，墊料較濕，并具有爛蘋果味，且無轉(zhuǎn)陰，說明造模成功。經(jīng)藥物治療6周后，可見各給藥組小鼠狀態(tài)優(yōu)于模型組小鼠，高劑量、中劑量痛麻杞寧口服液組小鼠的體質(zhì)量明顯增加，24 h進(jìn)食量、飲水量降低，空腹血糖值、糖耐量及血漿HbAlc水平明顯降低，空腹FINS水平明顯升高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，痛麻杞寧口服液有較好的降血糖作用，并能改善糖耐量，起作用與改善胰島功能，促進(jìn)胰島素的釋放有關(guān)。

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R285.5

A

1007-5615(2017)06-0036-04

* 河北省科技計劃資助項(xiàng)目：No.162777194

△ 河北中醫(yī)學(xué)院 河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心(石家莊050200)

劉姣，女，河北中醫(yī)學(xué)院中藥藥理教研室。

(2017-10-09 收稿)