全自動血凝儀CA-7000性能及生物參考區(qū)間的驗證與評價

李家明 賴語揚 徐成坤 楊淑君 劉文俊

全自動血凝儀CA-7000性能及生物參考區(qū)間的驗證與評價

李家明 賴語揚 徐成坤 楊淑君 劉文俊

目的 了解攀鋼集團總醫(yī)院檢驗科實驗室新購SYSMEX全自動血凝儀CA-7000的性能指標是否符合相關(guān)要求以及上海太陽試劑廠商提供的參考區(qū)間能否直接應(yīng)用于臨床。方法 ① 批內(nèi)不精密度：取新鮮混合血漿〔凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）為3個濃度水平，凝血酶時間（TT）、D-二聚體、纖維蛋白原降解產(chǎn)物（FDP）為正常濃度水平〕連續(xù)測定各20次，計算標準偏差（SD）、變異系數(shù)（CV）。② 日間不精密度：采用兩個水平的質(zhì)控品，每天測定1次，連續(xù)20 d，計算SD、CV。③ 攜帶污染率：測定稀釋的血漿3次后，測定原濃度血漿3次，再測定稀釋的血漿3次，計算攜帶污染率。④ 線性范圍：測定5個濃度的樣本，與理論值作比較，計算y＝ax+b。⑤ 準確性：重復(fù)測定蒸餾水復(fù)溶后的FIB定值血漿、D-二聚體、FDP質(zhì)控品（低值、高值）10次，計算均值和FIB的相對偏差。⑥ 正確度評價：選用國家衛(wèi)生和計劃生育委員會凝血5個批次室間質(zhì)控品為正確度評價物，計算偏倚率。⑦ 生物參考區(qū)間的驗證：選擇20個健康體檢人群進行生物參考區(qū)間轉(zhuǎn)移的驗證，計算R值。結(jié)果 ① 批內(nèi)不精密度：不同水平PT、APTT、FIB的CV分別為0.46%～1.06%、0.47%～2.66%、1.99%～3.92%，正常水平TT、D-二聚體、FDP的CV分別為0.71%、4.24%、7.05%。② 日間不精密度：正常水平PT、APTT、FIB、TT的CV分別為2.62%、2.1%、8.9%、2.0%，異常水平PT、APTT的CV分別為2.85%、3.1%。③ 攜帶污染率：FIB為0.42%，D-二聚體為3.58%，F(xiàn)DP為1.96%。④ 檢測線性范圍：FIB為0.8～5.7 g/L，D-二聚體為0.50～30.00 mg/L，F(xiàn)DP為12.50～110.00 mg/L。⑤ 準確性：FIB相對偏差為7.15%，CV＜15%，D-二聚體/FDP均在質(zhì)控范圍內(nèi)。⑥ 生物參考區(qū)間的驗證：總樣本R值為0.96。⑦ 正確度評價結(jié)果：除一個批號的APTT偏倚處在上限外（15.28%），其余各指標均合格。結(jié)論 本實驗室新購的全自動血凝儀SYSMEX CA-7000各項性能指標基本符合要求，太陽試劑廠商提供的參考區(qū)間可以使用。

血凝儀； 太陽試劑； 性能驗證與評價； 生物參考區(qū)間

凝血項目是臨床用于出凝血異常疾病篩選與診斷的重要實驗室檢測指標［1-2］，凝血酶原時間（PT）常用于外源性和共同途徑的篩選以及抗凝藥物（口服抗凝劑）療效監(jiān)測；活化部分凝血活酶時間（APTT）是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)的篩選以及抗凝藥物（普通肝素）療效監(jiān)測的重要指標；纖維蛋白原（FIB）和凝血酶時間（TT）是出血性與血栓性疾病常用的篩查指標，也用于抗凝藥物和止血劑的療效監(jiān)測［3-5］。本實驗室采用上海太陽生物技術(shù)有限公司試劑，參照相關(guān)規(guī)定和要求［6］，對全自動血凝儀CA-7000儀器的分析性能及試劑廠商提供的生物參考區(qū)間進行驗證，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 儀器采用日本SYSMEX公司生產(chǎn)的CA-7000全自動血凝儀，試劑采用上海太陽生物技術(shù)有限公司的血凝試劑（簡稱太陽試劑）（PT試劑批號2001307，參考范圍為10～14 s；APPT試劑批號Y2012196，參考范圍為22～38 s；FIB試劑批號2031095，參考范圍為2～4 g/L；TT試劑批號2021162，參考范圍為10～16 s）。正常凝血質(zhì)控品批號182025，異常凝血質(zhì)控品批號183020；D-二聚體質(zhì)控品低值批號2081010，高值批號2083010；纖維蛋白原降解產(chǎn)物（FDP）質(zhì)控品低值批號2086009，高值批號2088009。用太陽試劑的校準品定標，以及配套的清洗劑。

1.2 方法及判斷標準

1.2.1 批內(nèi)不精密度 取患者的新鮮血漿配制成不同濃度水平的混合血漿（其中PT、APTT分為正常值、中度異常值和高度異常值3種水平；FIB分為正常值、低值和高值3種水平；TT、D-二聚體、FDP為正常濃度水平），連續(xù)測定混合血漿20次，計算標準偏差（SD）和變異系數(shù)（CV）。評判標準按照WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》：PT正常值CV≤3.0%，中度和高度異常值CV≤8.0%；APTT正常值CV≤4.0%，中度和高度異常值CV≤8.0%；FIB正常值CV≤6.0%，低值和高值CV≤12.0%；TT、D-二聚體、FDP的CV均≤6.0%

1.2.2 日間不精密度 采用兩個濃度水平的非定值質(zhì)控品，參考美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）EP-15A《精密度和正確度性能的用戶驗證指南》文件，用CA-7000全自動血凝儀每天測定1次，連續(xù)測定20 d，計算SD和CV值。

1.2.3 攜帶污染率 選取對倍稀釋的FIB、D-二聚體、FDP血漿分別連續(xù)測定3次（j1、j2、j3），然后連續(xù)測定原濃度血漿3次（i1、i2、i3），再連續(xù)測定對倍稀釋的血漿3次（j4、j5、j6），最后計算攜帶污染率。評判標準要求FIB、D-二聚體、FDP的攜帶污染率均≤10%。

1.2.4 線性范圍評價 分別選取線性范圍上下限高值和低值的標本，制備成5個濃度梯度，每個樣本測定2次，用實測值均值與理論值計算y＝ax+b，并作相關(guān)回歸分析。要求FIB、D-二聚體、FDP的相對偏差均應(yīng)＜10%，r＞0.975，α＝1±0.05范圍內(nèi)為合格，觀察高值、低值濃度之間的線性關(guān)系。

1.2.5 準確性評價 測定蒸餾水復(fù)溶后的定值FIB、D-二聚體和FDP質(zhì)控品（低值、高值）各10次，F(xiàn)IB計算均值和相對偏差，D-二聚體與FDP計算測定均值。

1.2.6 生物參考區(qū)間的驗證 參考CLSI C28-A2《臨床實驗參考值范圍的定義與確認》［7］，從體檢中心選取20例健康體檢者，其中男性9例，女性11例；年齡 18～76歲，平均（47±29）歲。觀察 PT、APTT、FIB及TT的檢測結(jié)果，與太陽試劑廠商提供的參考區(qū)間作比較，并計算R值（R值＝落在參考范圍內(nèi)的標本數(shù)/總試驗標本數(shù)），要求R＞0.95。

1.2.7 正確度評價 參考《臨床檢驗方法評價》［8］，選用國家衛(wèi)生和計劃生育委員會凝血室間質(zhì)評物（5個批號），用CA-7000連續(xù)測定2次，得到平均值，再與衛(wèi)生部臨檢中心回報靶值比較，計算偏倚〔偏倚＝（測定值－靶值）/靶值×100%〕。允許偏倚PT、APTT＜15%，F(xiàn)IB、TT、INR＜20%。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)不精密度評價 PT、APTT、FIB 3個濃度水平的批內(nèi)不精密度符合衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》的要求，正常濃度水平項目TT、D-二聚體、FDP的CV均小于10%，符合要求。見表1，表2。

表1 PT、APTT、FIB不同濃度水平的批內(nèi)不精密度

表2 單水平項目TT、D-二聚體、FDP的批內(nèi)不精密度

2.2 日間不精密度評價 PT、APTT兩種水平質(zhì)控品及TT日間不精密度較好，但FIB的CV略大。見表3。

（四）普法的生動性與執(zhí)法過程的結(jié)合不夠緊密，實效性不強。部分單位在落實“誰執(zhí)法誰普法”責(zé)任制的過程中，仍存在著應(yīng)付思想，缺乏創(chuàng)新意識，個別部門的普法還停留在“送法上門、定點接訪、發(fā)放資料”老三樣，普法工作缺乏生動性。普法工作仍然停留在單一性、灌輸式的單向傳播，缺乏與普法對象的有效溝通，與執(zhí)法過程不能有效銜接，普法需求和供給存在脫節(jié)，沒有針對群眾的法律需求實施精準普法，普法實效差。大部分單位尚未將責(zé)任制的落實與自身的行業(yè)特點、部門文化緊密結(jié)合，推進“誰執(zhí)法誰普法”工作的進一步提升。

2.3 攜帶污染率評價 FIB、D-二聚體、FDP 3項指標均符合要求。見表4。

表3 不同水平質(zhì)控品日間不精密度

表4 FIB、D-二聚體、FDP的攜帶污染率

2.4 線性評價 FIB、D-二聚體和FDP的線性均能滿足臨床和實驗室需要。見表5，圖1～3。

表5 FIB、D-二聚體、FDP的線性評價

圖1 FIB的線性評價

圖2 D-二聚體的線性評價

圖3 FDP的線性評價

2.5 準確性評價：FIB相對偏差為7.15%，CV＜15%，符合要求；D-二聚體、FDP低值和高值均在質(zhì)控范圍內(nèi)。見表6。

表6 FIB、D-二聚體、FDP準確性評價結(jié)果

2.6 生物參考區(qū)間的驗證實驗 20例健康體檢人群PT、APTT、FIB、TT檢測結(jié)果顯示，總樣本R值為0.96，符合相關(guān)要求。見表7。

表7 健康體檢人群PT、APTT、FIB、TT檢測結(jié)果

2.7 正確度評價 我室5個批號的PT均＜15%，F(xiàn)IB、TT、INR均＜20%，但有一批號APTT偏倚結(jié)果超過15%。見表8。

表8 2017衛(wèi)生部凝血室間質(zhì)評物5個批號的正確度評價

3 討論

PT正常、中度異常和高度異常值的批內(nèi)CV分別為0.63%、0.46%、1.06%；APTT正常、中度異常和高度異常值的CV批內(nèi)分別為0.47%、0.57%、2.66%；FIB正常、低和高值的CV批內(nèi)分別為1.99%、3.92%、3.61%；單水平項目TT、D-二聚體、FDP的CV批內(nèi)分別為0.71%、4.24%、7.05%，均符合相關(guān)標準要求。PT、APTT兩種水平質(zhì)控品及TT日間不精密度較好，但FIB的變異略大。在攜帶污染率方面，F(xiàn)IB、D-二聚體、FDP中最大的為3.58%，均小于判定標準。我們參考平均斜率法，對CA-7000全自動血凝儀測定FIB、D-二聚體、FDP的線性范圍進行了評價，分析發(fā)現(xiàn)三者的相對偏差均＜10%，r＞0.975，α＝1±0.05，均符合要求；線性范圍分別為 0.8～5.7 g/L、0.5～30.00 mg/L、2.50～110.00 mg/L，范圍寬，能夠滿足實驗室和臨床需要。準確性評價：FIB相對偏差CV＜15%，符合要求；D-二聚體/FDP低值和高值均在質(zhì)控范圍內(nèi)。正確度評價結(jié)果顯示，允許偏倚PT、APTT＜15%，F(xiàn)IB、TT、INR＜20%；除APTT一個批號的偏倚為15.28%外，其余各指標均符合要求。由于國家衛(wèi)生和計劃生育委員會凝血室間質(zhì)評物的靶值是按太陽試劑+各種儀器進行分組統(tǒng)計確定，不同的儀器分析結(jié)果差異較大，筆者認為最好是相同的試劑和相同的儀器（即相同的檢測系統(tǒng)）進行分組統(tǒng)計，結(jié)果才具有更好的可比性。

在實驗室檢驗人員和臨床醫(yī)生日常工作中，生物參考區(qū)間作為疾病診斷、解釋檢驗結(jié)果臨床意義的重要指標，其建立并不統(tǒng)一。據(jù)有關(guān)權(quán)威機構(gòu)調(diào)查顯示［9］，約20%的實驗室自行確定凝血4項指標的參考區(qū)間上下限，約80%的實驗室直接使用全國操作規(guī)程、試劑或儀器廠商等提供的參考區(qū)間。如果按照國際化學(xué)委員會提出的實驗室生物參考區(qū)間的建立方法要求［10］，其程序復(fù)雜，且受年齡、性別、民族、地區(qū)等因素以及方法學(xué)差異的影響，同一項目采用不同檢測系統(tǒng)和檢測方法的結(jié)果也有差異；即便儀器和檢測方法相同，但試劑來源不同，檢測結(jié)果也會產(chǎn)生系統(tǒng)誤差［11］，而實驗室自行制定生物參考區(qū)間有一定難度?；谝陨戏N種原因，各實驗室簡單地引用文獻或不加驗證的直接使用廠商給定的參考范圍是有缺陷的［12-13］，最好依據(jù)實驗室的實際情況建立適合自己的參考區(qū)間。依據(jù)CLSI C28-A2文件推薦臨床實驗室生物參考區(qū)間確立的要求，如果引用權(quán)威書刊、廠家試劑說明書或轉(zhuǎn)移其他醫(yī)院實驗室的生物參考區(qū)間應(yīng)當(dāng)通過驗證。

本實驗室用太陽試劑在SYSMEX CA-7000全自動血凝分析儀上對20例健康體檢人群進行PT、APTT、TT、FIB 檢測，計算 R 值，要求 R＞0.95［14］，按照CLSI CA28-A2文件要求，90%健康者測定結(jié)果在引用的參考范圍內(nèi)，就可實現(xiàn)生物參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移。本實驗室檢測20例健康體檢人群PT、APTT、FIB、TT的結(jié)果，總樣本R值為0.96，符合R＞0.95的標準，通過實驗驗證，表明可以直接引用上海太陽試劑說明書提供的PT、APTT、FIB及TT的參考區(qū)間。

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Verifying and evaluating automated blood coagulation analyzer CA-7000: its performance and biological reference interval

Li Jiaming, Lai Yuyang, Xu Chengkun, Yang Shujun, Liu Wenjun. Department of Clinical Laboratory, Pangang Group General Hospital, Panzhihua 617000, Sichuan, China (Li JM, Xu CK, Yang SJ, Liu WJ); Department of Laboratory, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan, China (Lai YY)
Corresponding author: Li Jiaming, Email: 706714508@qq.com

Objective To verify whether the performance indexes of the newly purchased SYSMEX automatic coagulation analyzer CA-7000 conform to the relevant standards and whether the reference interval provided by SUNBIO Shanghai can be directly applied to the clinic. Methods ① Within-run imprecision: freshly mixed plasma [prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinoge (FIB)，three different concentration respectively; thrombin time (TT), D-Dimer, fibrin degradation product (FDP), normal concentration],measured 20 times in a row, then computed the standard deviation (SD), the coefficient of variation (CV). ② Daytime imprecision: by using the quality control materials with two different concentration, measured once per day for 20 days,then calculate SD and CV. ③ Carryover rates: after the diluted plasma samples were measured by three times, the plasma samples in original concentration were measured three times again, then the first step was repeated, and then calculated carryover rate. ④ Linear range: measured the samples with five different concentrations and compared the measured value with theoretical values, then calculated y＝ax+b. ⑤ Accuracy: dissolved by double distilled water, the standard plasma samples with fixed FIB value, D-Dimer and FDP quality control materials (low value and high value) were repeatedly measured 10 times, then calculate mean and relative deviation of the FIB.⑥ Accuracy rating: choose 5 different batches of quality control material came from 5 different blood coagulation laboratories, which was accredited by NHFPC, as the correct assessment products to calculate bias.⑦ Validation of biological reference interval: 20 healthy volunteers were enrolled for validating the biological reference interval transfer, calculated R-values. Results ① In-batch imprecision: in different level of PT, APTT and FIB, the CV were 0.46%-1.06%, 47%-2.66%, and 1.99%-3.92%, respectively; in normal level of TT, D-Dimer and FDP, the CV were 0.71%, 4.24%, and 7.05%, respectively. ② Daytime imprecision: CV of normal level PT,APTT，F(xiàn)IB, and TT were 2.62%, 2.1%，8.9%, and 2.0%, respectively; CV of abnormal level PT and APTT were 2.85% and 3.1%. ③ Carryover rates: FIB was 0.42%, D-Dimer was 3.58%, FDP was 1.96%. ④ Detection of linear range: FIB was 0.8-5.7 g/L, D-Dimer was 0.5-30.00 mg/L, FDP was 2.50-110.00 mg/L.⑤ Accuracy: the relative deviation of FIB was 7.15%, CV ＜ 15%, the ratio of D-Dimer/FDP was in the context of quality control.⑥ Validation of biological reference interval: the total sample R value was 0.96. ⑦ Accuracy evaluation results: all the indexes were qualified except that a bias from a batch of APTT which exceeded the upper limit.Conclusion The performance indicators of our new full-automatic blood coagulation analyzer, SYSMEX CA-7000, conform to the relevant standards; and the reference range provided by SUNBIO can be used directly.

Coagulation analyzer; Reagent; Performance verification; Biological reference region

617000 四川攀枝花，攀鋼集團總醫(yī)院檢驗科（李家明、徐成坤、楊淑君、劉文?。?；646000 四川瀘州，西南醫(yī)科大學(xué)檢驗系（賴語揚）

李家明，Email：706714508@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2017.04.008

2017-09-18）

張耘菲 楊程伍）

2018第十五屆中國檢驗醫(yī)學(xué)暨輸血儀器試劑博覽會

中國（國際）檢驗醫(yī)學(xué)暨輸血儀器試劑博覽會（CACLP春季會）始創(chuàng)于1991年，它的前身是全國醫(yī)學(xué)檢驗用品產(chǎn)供銷聯(lián)誼會，經(jīng)過26年來的不斷發(fā)展和壯大，CACLP春季會已成為國內(nèi)規(guī)模最大、參展企業(yè)最多、展會內(nèi)容最豐富、專業(yè)性最強、影響力最廣、參會人數(shù)最多的專業(yè)性商業(yè)展覽會。該展會每年3月舉辦一屆，在廈門、西安、青島、重慶等城市巡回展出，已成為全世界規(guī)模最大的體外診斷商業(yè)展。

1 會議名稱：2018年第十五屆中國檢驗醫(yī)學(xué)暨輸血儀器試劑博覽會

2 會議地點：重慶國際博覽中心

3 會議時間：2018年3月18日至20日