子癇前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平變化及維生素D干預(yù)效果的研究

邱海凡 王榮躍 邱笑飛 王繁

子癇前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平變化及維生素D干預(yù)效果的研究

邱海凡 王榮躍 邱笑飛 王繁

目的探討血清25-羥基維生素D（25-OH-VD）水平、胎盤絨毛膜組織中維生素D受體（VDR）蛋白表達(dá)水平與子癇前期的關(guān)系，并觀察維生素D的干預(yù)效果。方法選取200例剖宮產(chǎn)終止妊娠的孕婦為研究對象，其中無妊娠期并發(fā)癥的正常晚期孕婦80例（對照組），子癇前期孕婦120例（觀察組）；觀察組又隨機(jī)分為觀察組A（不干預(yù)）與觀察組B（維生素D干預(yù)，診斷為子癇前期后即開始服用維生素D滴劑，600IU/d），各60例。觀察并比較3組孕婦血清25-OH-VD水平，胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平，以及觀察組A與B的子癇前期分層情況。結(jié)果3組孕婦妊娠終止時(shí)的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周時(shí)的水平（均P＜0.05）；妊娠20周時(shí)，對照組血清25-OH-VD水平高于觀察組A及B（均P＜0.05），觀察組A與B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；妊娠終止時(shí)，觀察組B、對照組血清25-OH-VD水平均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組B、對照組絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在妊娠終止時(shí)，觀察組B進(jìn)展為重度子癇前期的發(fā)生率明顯低于觀察組A（P＜0.05）。結(jié)論補(bǔ)充維生素D有助于提高子癇前期孕婦血清25-OH-VD水平，上調(diào)絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平，從而減少子癇的發(fā)生。

25-羥基維生素D維生素D受體子癇前期

子癇前期是妊娠期特有的疾病，發(fā)病率較高，國外報(bào)道發(fā)病率為7%～12%，我國報(bào)道為9.4%。子癇前期是導(dǎo)致母嬰死亡的主要原因[1]，目前尚未完全闡明其病因及發(fā)病機(jī)制，亦無明確有效的治療方法。維生素D在鈣磷代謝、骨的礦物化、免疫功能、細(xì)胞增殖和疾病預(yù)防中具有重要作用。Hyppnen等[2]研究發(fā)現(xiàn)在妊娠早期，適當(dāng)補(bǔ)充維生素D的孕婦發(fā)生子癇前期的概率較低，而具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究證實(shí)。那么，維生素D是否可作為一種便宜、安全、有效的藥物來預(yù)防子癇前期呢？筆者收集120例子癇前期孕產(chǎn)婦的臨床資料，探究其血清中25-羥基維生素D（25-OH-VD）水平、胎盤絨毛膜組織中維生素D受體（VDR）蛋白表達(dá)水平與子癇前期的關(guān)系，并觀察維生素D的干預(yù)效果。

1 對象和方法

1.1 對象選擇2015年1月至2017年6月在本院產(chǎn)科行剖宮產(chǎn)終止妊娠的200例孕產(chǎn)婦為研究對象，其中子癇前期孕產(chǎn)婦120例（觀察組），無妊娠期并發(fā)癥的正常晚期孕產(chǎn)婦80例（對照組）。觀察組隨機(jī)分為觀察組A（不干預(yù)）與觀察組B[干預(yù)，即診斷為子癇前期開始服用維生素D滴劑（600IU/滴，100滴/瓶，加拿大Ddrops公司生產(chǎn)），600IU/d]，各60例。觀察組A、觀察組B與對照組的年齡、妊娠周數(shù)、妊娠次數(shù)、分娩次數(shù)、BMI等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。所有孕產(chǎn)婦簽署知情同意書，且本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)：孕20周后出現(xiàn)血壓≥140/90mmHg，尿蛋白（+～++++），輕～重度水腫[參照豐有吉主編的8年制《婦產(chǎn)科學(xué)》（第2版）]。排除雙胎妊娠，有慢性高血壓、心血管疾病、腎病、糖尿病及甲狀腺疾病等內(nèi)分泌異常，自身免疫性疾病，孕期內(nèi)患過感染性疾病的孕產(chǎn)婦。臨床試驗(yàn)過程中，若孕產(chǎn)婦不能堅(jiān)持本次研究，或出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)、病情不穩(wěn)定，或治療過程中同時(shí)采取其他治療方法，則退出試驗(yàn)。

表1 3組的臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集在妊娠20周、妊娠終止時(shí)采集孕產(chǎn)婦晨起肘靜脈血5ml（空腹10～12h）；離心，取上清液，存放于-20℃冰箱待測。收集孕產(chǎn)婦2cm×2cm×2cm的胎盤組織，用滅菌0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈，固定于4%的多聚甲醛溶液中24h，石蠟包埋后用于免疫組化檢測。

1.2.2 血清25-OH-VD水平檢測采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定血清25-OH-VD水平，嚴(yán)格按照瑞士羅氏CSE170分析儀及配套試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白檢測采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（SP）法檢測絨毛膜組織中VDR蛋白，嚴(yán)格按照SP免疫組化試劑盒50preps（中國上海研卉生物科技有限公司，批號(hào)：95-9641）說明書進(jìn)行操作。結(jié)果判斷：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒即VDR蛋白表達(dá)。每例隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（×400），使用Image-Pro-Plus系統(tǒng)測定表達(dá)VDR蛋白細(xì)胞的面積積分吸光度（IA）值，計(jì)算其平均數(shù)；再根據(jù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞的百分比來計(jì)算陽性指數(shù)，即VDR蛋白表達(dá)水平。陽性指數(shù)=IA平均數(shù)×陽性細(xì)胞百分比×100。

1.2.4 觀察子癇前期進(jìn)展在妊娠終止時(shí)，統(tǒng)計(jì)觀察組A及B孕產(chǎn)婦進(jìn)展為重度子癇前期的例數(shù)。依據(jù)人民衛(wèi)生出版社《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版重度子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即子癇前期患者出現(xiàn)下述任一不良情況可診斷為重度子癇前期：（1）血壓持續(xù)升高：收縮壓≥160mmHg和（或）舒張壓≥110mmHg；（2）24h蛋白尿≥5.0g或隨機(jī)蛋白尿（+++）及以上；（3）持續(xù)頭痛、視覺障礙或其他腦神經(jīng)癥狀；（4）持續(xù)上腹部疼痛；（5）肝功能異常，如血清ALT或AST升高、微血管病性溶血-乳酸脫氫酶升高；（6）腎功能異常，即少尿或血清肌酐＞106μmol/L；（7）低蛋白血癥伴胸腔積液或腹腔積液；（8）PLT呈持續(xù)性下降且＜100×109/L；（9）心力衰竭、肺水腫；（10）胎兒生長受限或羊水過少；（11）早發(fā)型子癇前期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；不同妊娠期比較采用配對樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組孕產(chǎn)婦血清25-OH-VD水平比較3組孕產(chǎn)婦妊娠終止時(shí)的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。妊娠20周和妊娠終止時(shí)，3組孕產(chǎn)婦血清25-OH-VD水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；妊娠20周時(shí)，對照組高于觀察組A及B（均P＜0.05），觀察組A與B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；妊娠終止時(shí)，觀察組B、對照組均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 3組孕產(chǎn)婦不同妊娠期的血清25-OH-VD水平比較（ng/ml）

2.2 3組孕產(chǎn)婦胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平比較3組孕產(chǎn)婦胎盤絨毛膜組織中均有VDR蛋白表達(dá)；在絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色染色，見圖1。對照組、觀察組A、觀察組B孕產(chǎn)婦絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平分別為0.37±0.14、0.20±0.09、0.34±0.15，3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.88，P＜0.05）；其中觀察組B、對照組均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 VDR在3組孕產(chǎn)婦絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)（SP免疫組化法，×400）

2.3 觀察組A與B進(jìn)展為重度子癇前期的發(fā)生率比較在妊娠終止時(shí)，觀察組B進(jìn)展為重度子癇前期的發(fā)生率為15.0%（9/60），明顯低于觀察組A的36.7%（22/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.350，P＜0.05）。

3 討論

維生素D是一類具有生物活性的脂溶性維生素，屬固醇類衍生物，其主要的生理功能是調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝并維持血漿鈣、磷水平穩(wěn)定，參與牙齒和骨骼的正常生長發(fā)育。人體血液循環(huán)中維生素D的主要存在形式為血清25-OH-VD，常被作為評價(jià)體內(nèi)維生素D營養(yǎng)狀況的指標(biāo)。25-OH-VD在腎內(nèi)1α-羥化酶的作用下轉(zhuǎn)化成維生素D的活性形式1，25-二羥基維生素D，與類固醇激素相似，與細(xì)胞核內(nèi)的VDR結(jié)合后，對靶基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)其生物學(xué)功能[3]。研究表明維生素D參與了母嬰葡萄糖代謝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)新陳代謝、胎兒心臟形成及生殖系統(tǒng)發(fā)育；因此，維生素D不足可能導(dǎo)致母體糖代謝異常、妊娠期糖尿病、子癇前期及細(xì)菌性陰道病等[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)子癇前期孕產(chǎn)婦在妊娠20周、妊娠終止時(shí)，血清25-OH-VD水平均較正常孕婦低，與周俐等[5]研究結(jié)果一致。而補(bǔ)充維生素D后，子癇前期孕產(chǎn)婦在妊娠終止時(shí)的血清25-OH-VD水平可恢復(fù)至正常水平，此時(shí)胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平也與對照組接近；故推測維生素D對VDR呈一種向上的調(diào)節(jié)作用。以往研究同樣表明1，25-二羥基維生素D3對VDR的調(diào)節(jié)作用主要呈一種向上的調(diào)節(jié)作用[6]。此外，給予維生素D干預(yù)治療后，子癇前期分層明顯改善。以上結(jié)果提示維生素D可以阻止子癇前期的進(jìn)展，該作用機(jī)制考慮如下：（1）Tregs免疫缺陷導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲功能障礙，使胎盤衍生血管收縮因子釋放，從而導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)高血壓、蛋白尿[7]；（2）血管和心臟上VDR對心臟具有保護(hù)作用，骨化三醇通過調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)影響內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞功能、控制炎癥反應(yīng)，從而影響血壓調(diào)節(jié)[8]；（3）骨化三醇在免疫耐受及恢復(fù)、維持免疫穩(wěn)態(tài)中具有重要作用。免疫細(xì)胞上VDR表達(dá)調(diào)節(jié)雌激素活化及分解代謝的關(guān)鍵酶，因此其有效性和可用性受到免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)。另外，骨化三醇能夠上調(diào)Tregs的免疫應(yīng)答并下調(diào)促炎癥反應(yīng)，影響母親的免疫耐受，從而降低子癇前期的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[9]；（4）維生素D能增加毛細(xì)血管形成，促進(jìn)補(bǔ)體嗜酸細(xì)胞趨化，從而減少子癇前期相關(guān)因素的負(fù)面效應(yīng)[10]；（5）維生素D通過拮抗胎兒內(nèi)皮集落形成細(xì)胞的數(shù)量與功能，在子癇前期病程中起到一定保護(hù)作用[11]。

綜上所述，補(bǔ)充維生素D有助于提高子癇前期孕產(chǎn)婦血清25-OH-VD水平，上調(diào)絨毛膜組織中VDR蛋白表達(dá)水平，從而減少子癇的發(fā)生，降低發(fā)生胎盤早剝及產(chǎn)后出血的風(fēng)險(xiǎn)，降低了母嬰死亡率。本研究為早期應(yīng)用維生素D預(yù)防子癇前期提供了理論依據(jù)。

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Relationship of serum 25-hydroxy-vitamin D level and vitamin D receptor expression in placenta with preeclampsi a and intervention effect of vitamin D

QIU Haifan,WANG Rongyue,QIU Xiaofei,et al.
Department of Obstetrics and Gynecology,the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027,China

Objective To investigate serum levels of 25-hydroxy-vitamin D(25-OH-VD)and expression of vitamin D receptor(VDR)protein in placenta chorion tissue of patients with preeclampsia,and the intervention effect of vitamin D.Methods Two hundred puerperants with cesarean section were enrolled in the study,including 80 cases of normal pregnancy(group C)and 120 cases with preeclampsia(the study group).The study group was further divided into two groups with 60 cases in each,group A had no vitamin D intervention and group B

vitamin D drops 600IU/d after the diagnosis of preeclampsia.Serum 25-OH-VD levels and the expression of VDR protein in placental chorion tissue were determined and compared among 3 groups.ResultsSerum 25-OH-VD levels at the termination of pregnancy were higher than those at the 20 week of gestation in all three groups(P＜0.05).At 20 weeks after pregnancy,the serum 25-OH-VD level of group C was higher than that of groups A and B(all P＜0.05),there was no significant difference between groups A and B(P＞0.05).At the termination of pregnancy,the serum 25-OH-VD levels of groups B and C were higher than those of group A(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The expression level of VDR protein in the chorion tissue of groups B and C was higher than that of group A at the termination of pregnancy(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The incidence of severe preeclampsia in group B was significantly lower than that in group A(P＜0.05).ConclusionVitamin D supplementation may improve serum 25-OH-VD levels in preeclampsia women,up-regulate VDR protein expression in chorion tissue,and reduce the occurrence of eclampsia.

25-hydroxy vitamin DVitamin Dreceptor Preeclampsia

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.23.2017-1916

溫州市科技局計(jì)劃項(xiàng)目（Y20160345）

325027溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科

王繁，E-mail：wangfan75@hotmail.com

2017-08-09）

（本文編輯：陳丹）