• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血miRNA的差異表達(dá)及臨床診斷價(jià)值

    2017-12-20 07:45:23呂珍蘇陸如平盛嘉玲
    中國健康心理學(xué)雜志 2017年1期
    關(guān)鍵詞:外周血特異性發(fā)育

    閆 妍 高 慧 呂珍蘇 陸如平 盛嘉玲

    中國.上海市民政第一精神衛(wèi)生中心 201105 E-mail:yanyan19820407@163.com

    非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血miRNA的差異表達(dá)及臨床診斷價(jià)值

    閆 妍 高 慧 呂珍蘇 陸如平 盛嘉玲

    中國.上海市民政第一精神衛(wèi)生中心 201105 E-mail:yanyan19820407@163.com

    目的:研究非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血miRNA的差異表達(dá)及其診斷價(jià)值。方法:檢索國內(nèi)外文獻(xiàn)篩選與非特異性精神發(fā)育遲滯相關(guān)的10種miRNA,按照病歷號(hào)隨機(jī)選取30例非特異性精神發(fā)育遲滯患者作為病例組,同時(shí)按照體檢號(hào)入組30例身心健康者作為對(duì)照組,入組后抽取靜脈血5ml,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)病例組和對(duì)照成員10種miRNAs的表達(dá)水平。結(jié)果:①病例組與對(duì)照組比較年齡、性別、城鄉(xiāng)、獨(dú)生子女無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);②病例組與對(duì)照組比較miRNA-125b、miRNA-132、miRNA-222、miRNA-223和miRNA-363表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);③ROC分析發(fā)現(xiàn),miRNA-222(AUC=0.786,P=0.043)、miRNA-223(AUC=0.833,P=0.008)對(duì)特異性精神發(fā)育遲滯有一定的診斷價(jià)值。結(jié)論:miRNA-222和miRNA-223的異常表達(dá)對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯有一定的診斷作用,可能與非特異性精神發(fā)育遲滯的發(fā)病機(jī)制有明顯關(guān)聯(lián)。

    非特異性精神發(fā)育遲滯;微小RNA;實(shí)時(shí)熒光定量PCR;外周血

    精神發(fā)育遲滯按照臨床特征可分為非特異性精神發(fā)育遲滯(non—specific MR,NSMR)和智力低下伴有畸形(Specific MR,SMR)這兩大類。SMR患者智力低下與畸形有明顯關(guān)聯(lián),NSMR只是智力低下,不伴有畸形,目前確切的病因不明。目前認(rèn)為,NSMR病因復(fù)雜,與環(huán)境和遺傳基因有明顯關(guān)聯(lián),其中遺傳是最主要的因素[1-2]。MiRNA屬于內(nèi)源性非編碼RNA家族。約21~25個(gè)核苷酸長度,其基因轉(zhuǎn)錄初級(jí)產(chǎn)物(pri-miRNA)在核內(nèi)被RNaseⅢ內(nèi)切酶家族的Drosha酶切割成約70nt的發(fā)夾狀前體(pre-miRNA),轉(zhuǎn)運(yùn)出核后。又被Droer酶切割成約22nt的miRNA,形成成熟miRNA。MiRNA具有較強(qiáng)的發(fā)育時(shí)序特異性[3]和組織特異性[4],在精神疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用[5]。本研究選取30例非特異性精神發(fā)育遲滯患者和30例健康對(duì)照者進(jìn)行研究,分析miRNA在非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中的差異表達(dá),并進(jìn)一步分析差異表達(dá)的miRNA對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯的診斷價(jià)值,以期為非特異性精神發(fā)育遲滯的研究提供參考。

    1 對(duì)象與方法

    1.1 對(duì)象

    1.1.1 病例組 為2011年9月-2012年10月確診為非特異性精神發(fā)育遲滯的患者,符合以下入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)。入組標(biāo)準(zhǔn):由兩名精神學(xué)專家及心理學(xué)專家等組成的小組進(jìn)行病例討論,精神發(fā)育遲滯的診斷要求符合ICD-10診斷標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)IQ小于60分。排除標(biāo)準(zhǔn):①存在明確圍生期腦損傷史;②存在明確腦缺氧、缺血、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染及頭顱外傷等病史;③染色體核型存在異常;④經(jīng)體檢、生化代謝及頭顱影像學(xué)檢查等發(fā)現(xiàn)已知遺傳代謝性疾病及遺傳眭神經(jīng)變性疾病線索;⑤男性患兒存在脆性x綜合征的典型臨床表現(xiàn);⑥母孕期間存在明確酗酒、吸毒等不良嗜好病史;⑦合并其他精神疾病;⑧合并其他重大軀體疾病。按照上述入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)入組非特異性精神發(fā)育遲滯30例。

    1.1.2 對(duì)照組 為當(dāng)?shù)蒯t(yī)院體檢證實(shí)為身心健康的人員。入組30例,均為漢族。

    本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有受試者或受試家屬(監(jiān)護(hù)人)均簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1 總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄 收集2 ml病人全血,放入抗凝管中。按照1:1比例,將血液緩慢加入Ficoll分離液中,2000rpm離心20min,收集單核細(xì)胞層。用PBS清洗單核細(xì)胞兩遍,加入1ml Trizol,用移液器吸打幾次。Trizol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。Trizol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。將勻漿樣品在室溫(15~30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。每使用1ml Trizol加入0.2ml氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫放置5分鐘。2~8℃13000×g離心15分鐘。樣品分為3層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用Trizol試劑的60%。把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1m L Trizol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。2~8℃13000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。用100%乙醇洗滌RNA沉淀。每使用1ml Trizol至少加1ml 100%乙醇。2~8℃不超過7500×g離心5分鐘,棄上清。室溫放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大約晾5~10分鐘即可,不要真空離心干燥,過于干燥會(huì)導(dǎo)致RNA的溶解性大大降低。加入25~200μl無RNase的水或0.5%SDS,用槍頭吸打幾次,55~60℃放置10分鐘使RNA溶解.如RNA用于酶切反應(yīng),勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去離子甲酰胺溶解, -70℃保存。取1μl RNA加入99μl dd H2O中,測(cè)定A260和A280處的吸光光度值,A260/A280必須介于1.9~2.0之間才可以進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

    1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證篩選的miRNA 使用TaqmanmiRNAPCRAssays進(jìn)行miRNA反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR檢測(cè),具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行,檢測(cè)儀器為ABI 7900 HT熒光定量PCR儀,熒光定量PCR反應(yīng)條件為:95℃10 min,然后95℃15 S、60℃1 min,40個(gè)循環(huán)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)處理

    全部數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0、MedCalc12.70統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。以miRNA與內(nèi)參U6之間閾值環(huán)(threshold cycle,Ct)之差計(jì)算ΔCT值,作為統(tǒng)計(jì)分析的指標(biāo)。對(duì)照和病例組一般情況除年齡采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)外,其它變量采用卡方檢驗(yàn);病例組和對(duì)照組miRNA表達(dá)水平的比較采用獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn),對(duì)差異表達(dá)的miRNA進(jìn)一步構(gòu)建ROC曲線,分析其對(duì)特異性精神發(fā)育遲滯的診斷價(jià)值。所有統(tǒng)計(jì)分析均為雙側(cè)顯著性檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 病例組與對(duì)照組一般情況的描述和比較

    采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較病例組和對(duì)照組年齡,結(jié)果表明,病例組和對(duì)照組的年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.279,P=0.782);運(yùn)用卡方分析比較病例組和對(duì)照組性別、城鄉(xiāng)、獨(dú)生子女的分布,結(jié)果表明,病例組和對(duì)照組的性別、城鄉(xiāng)、獨(dú)生子女分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

    表1 病例組和對(duì)照組一般情況比較(±s,n)

    表1 病例組和對(duì)照組一般情況比較(±s,n)

    項(xiàng) 目 病例組(n=30)對(duì)照組(n=30)t/χ2P年齡(歲) 31.49±10.86 30.61±11.32 0.279 0.782性別(女/男) 18/12 14/16 0.603 0.438城鄉(xiāng)(城市/農(nóng)村) 13/17 18/12 1.068 0.301獨(dú)生子女(是/非) 16/14 13/17 0.267 0.605

    2.2 特異性精神發(fā)育遲滯患者與正常人的miRNA表達(dá)水平比較

    對(duì)篩選出的10種miRNA,采用兩獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)分析其在病例組和對(duì)照組間的差異,表2表明,miRNA-125b、miRNA-132、miRNA-222、miRNA-223和miRNA-363的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),miRNA-1、miRNA-1207-5p、miRNA-1228-5p、miRNA-3141、miRNA-4507的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

    2.3 差異表達(dá)的miRNA對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯的預(yù)測(cè)價(jià)值

    分別以非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中差異表達(dá)的miRNA-125b、miRNA-132、miRNA-222、miRNA-223和miRNA-363為檢測(cè)變量,試驗(yàn)分組為狀態(tài)變量(對(duì)照組為0,病例組為1),構(gòu)建ROC曲線,見表3和圖1。miRNA-222和miRNA-223對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯有一定的診斷價(jià)值(P<0.05),miRNA-125b、miRNA-132和miRNA-363對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯的診斷價(jià)值不明顯(P>0.05)。

    表2 病例組與對(duì)照組miRNA表達(dá)水平比較(±s)

    表2 病例組與對(duì)照組miRNA表達(dá)水平比較(±s)

    miRNA 病例組(n=30)對(duì)照組(n=30)Z P miRNA-1 4.023±1.587 5.573±3.786-0.767 0.443 miRNA-125b 5.410±1.380 7.962±3.747-2.043 0.041 miRNA-132 3.485±1.382 7.084±3.590-2.155 0.031 miRNA-222 2.344±1.400 6.038±3.060-3.915<0.001 miRNA-223 -2.686±1.406 5.147±2.653-4.086<0.001 miRNA-363 4.124±1.273 6.655±3.161-2.383 0.017 miRNA-1207-5p-0.218±0.116 1.240±0.247-1.873 0.061 miRNA-1228-5p-1.336±0.211-1.397±0.838 0.000 1.000 miRNA-3141 0.113±0.350 0.223±0.900 0.000 1.000 miRNA-4507 1.295±0.795 2.625±1.413-0.511 0.610

    表3 差異表達(dá)的miRNA對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯的預(yù)測(cè)價(jià)值

    圖1 非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血差異表達(dá)miRNA的ROC曲線

    3 討 論

    精神發(fā)育遲滯(mental retardation,MR)是一組在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育成熟(18歲)以前起病,依據(jù)目前研究發(fā)現(xiàn)生物、社會(huì)和心理因素是造成患者智力發(fā)育低于一般常人的主要因素,其中生物因素占79.2%[6]。MR是造成我國耳洞殘疾的首要影響因素,該疾病不僅對(duì)我國人口素質(zhì)提高不利,還給家庭、社會(huì)、國家?guī)沓林氐呢?fù)擔(dān)。非特異性精神發(fā)育遲滯(NSMR)又稱非特異性弱質(zhì),是指不伴隨其它臨床體征的單純性智力低下。對(duì)NSM的患病程度進(jìn)行過分析發(fā)現(xiàn),NSMR存在著明顯的遺傳異質(zhì)性,遺傳占主要因素[7]。

    miRNA在生物的各種生命過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)功能,如調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育的時(shí)序調(diào)控過程,參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡,同時(shí)在造血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的模式形成等過程中也扮演著重要的角色。miRNA在腦皮層發(fā)育過程中起著關(guān)鍵作用,大腦皮層發(fā)育過程中細(xì)胞增殖、傳導(dǎo)通路的建立以及區(qū)域性分化均有miRNA參與并調(diào)控[8-9]。由此可見,miRNA在大腦發(fā)育過程中起著至關(guān)重要的調(diào)控作用。miRNA與神經(jīng)細(xì)胞的分化也有著密切相關(guān),miRNA可以從細(xì)胞分化的起始就調(diào)控祖細(xì)胞分化為特定的神經(jīng)細(xì)胞,還能維持該神經(jīng)細(xì)胞的特征。有研究表明,miRNA不僅參與多種神經(jīng)功能調(diào)節(jié)[10],還與突觸可塑性有關(guān)[11]。由于MiRNA在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育分化以及神經(jīng)系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)和突觸可塑性方面起著重要作用,因此MiRNA表達(dá)和調(diào)控的異常可能與精神發(fā)育遲滯的發(fā)生發(fā)展有著密不可分的關(guān)系。脆性x綜合征與脆性X智力低下蛋白(FMXP, Fragile X MentalRetardation Protein)的缺失有明顯關(guān)聯(lián),外周血淋巴細(xì)胞FMRP免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)是兒童脆性X綜合征的一種可靠診斷和篩查方法[12]。研究發(fā)現(xiàn),FMRP可以通過某些特殊的m RNAS來調(diào)節(jié)miRNA[13],如miRNA-1和miRNA -281。唐氏綜合征即21三體綜合征,對(duì)唐氏綜合征的研究發(fā)現(xiàn),與21號(hào)染色體來源有明顯關(guān)聯(lián)的miRNAs可能引起患者腦部神經(jīng)生化的異常,21號(hào)染色體來源的miRNA失活可能是導(dǎo)致唐氏綜合癥的主要原因[14]。

    本研究發(fā)現(xiàn),非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中miRNA-125b、miRNA-132、miRNA-222、miRNA-223和miRNA-363顯著上調(diào)。這5種miRNA與非特異性精神發(fā)育遲滯的發(fā)生和發(fā)展可能有明顯關(guān)聯(lián)。有研究發(fā)現(xiàn),脆性X智力低下蛋白(FMRP)可以通過miRNA-125b、miRNA-132調(diào)節(jié)突觸的結(jié)構(gòu)與精神發(fā)育遲滯的發(fā)生有明顯關(guān)聯(lián)[15]。Chen等人選取464名非特異性X連鎖精神發(fā)育遲滯患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),與正常對(duì)照者比較x染色體相關(guān)聯(lián)miRNAs(miRNA-222、miRNA-223和miRNA-363)的核苷酸序列有明顯改變,這些改變可能與患者智力低下有關(guān)[16]。趙林[17]等人,通過miRNA芯片掃描和選取部分差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中miRNA-664a-5p,miRNA-1207-5p,miRNA-3141,miRNA-1228-5p,miRNA-4505顯著上調(diào)。本研究與正常對(duì)照者比較,非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中miRNA-1207-5p,miRNA-3141和miRNA -1228-5p沒有明顯改變,可能與本研究選取的樣本是成人,而上述研究選取的是兒童有關(guān),具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

    為了探究差異表達(dá)的miRNA對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯的診斷價(jià)值,本研究進(jìn)一步構(gòu)建ROC曲線,結(jié)果發(fā)現(xiàn):miRNA-222和miRNA-223對(duì)非特異性精神發(fā)育遲滯有一定的診斷價(jià)值,當(dāng)miRNA-222≤2.788CT時(shí),約登指數(shù)的最大值0.583,此時(shí)的敏感度為58.3%,特異度為100.0%;當(dāng)miRNA-223≤-2.275CT時(shí),約登指數(shù)的最大值0.667,此時(shí)的為敏感度66.7%,特異度為100.0%。該研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了,miRNA-222和miRNA-223在非特異性精神發(fā)育遲滯中可能扮演著重要的角色,具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

    [1]陳潔,郭亦壽,趙梅蘭.非特異性精神發(fā)育遲滯的遺傳異質(zhì)性[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2000,17(3):185-187

    [2]陳永芬.精神發(fā)育遲滯的病因分析[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1994, 19(4):312-315

    [3]Reinhart B J,Slack F J,Basson M,et al.The 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans [J].nature,2000,403(6772):901-906

    [4]Wheeler G,Ntounia-Fousara S,Granda B,et a1.Identification of new central nervous system specific mouse microRNAs[J].FEBS Lett,2006,580(9):2195-2200

    [5]Miller B H,Wahlestedt C.MicroRNA dysregulation in psychiatric disease[J].Brain Res,2010;1338:89e99

    [6]楊秋苑,祁蓓.546例精神發(fā)育遲滯兒童病因分析和健康教育策略[J].廣東醫(yī)學(xué),2006,27(9):1366-1367

    [7]胡應(yīng),張思仲,張思霖,等.315個(gè)原因不明精神發(fā)育遲滯家系的分離分析研究[J].中華神經(jīng)精神科雜志,1992,25(3):157-157

    [8]Sernpere L F,Freemantle S,Pitha-Rowe I,et a1.Expression profiling of mammalian microRNAs uncovers asubset of brain expressed microRNAs with possible roles in murine and human neuronal differentiation[J].Genome Biol,2004,5(3):R13

    [9]Miska E A,Alvarez-Saavedra E,Townsend M.et a1.Microarray analysis of microRNA expression in the developing mammalian brain[J].GcnomeBiol,2004,5(9):R68

    [10]Cheng H Y,Papp J W,Varlamova O,et a1.microRNA modulation of circadian-clock period and entrainment[J].Neuron, 2007,54(5):813-829

    [11]Schratt G M,Tuebing F,Nigh E A,et a1.A brain specific MicroRNA regulates dendritic spine development[J].Nature, 2006,439(7074):283-289

    [12]虞雄鷹,鐘建民,張曉珍,等.FMRP檢測(cè)在兒童脆性X綜合征中診斷價(jià)值的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2009,17(3): 29-32

    [13]Jin P,Zarnescu D C,Ceman S,Nakamoto M,Mowrey J,et al.Biochemical and genetic interaction between the fragile X mental retardation protein and the microRNA pathway[J].Nat Neurosci,2004,7:113-117

    [14]Knhn D E,Nuovo G J,Terry A V,et a1.Chromosome 21-derived MicroRNAs Provide an Etiological Basis for Aberrant Protein Expression in Human Down Syndrome Brains[J].J Biol Chem,2010,285(2):1529-1543

    [15]Edbauer D,Neilson J R,Foster K A,et al.Regulation of synaptic structure and function by FMRP-associated microRNAs miR -125b and miR-132[J].Neuron 65:373-84.[Pub Med: 20159450

    [16]Chen W,Jensen L R,Gecz J,et al.Mutation screening of brainexpressed X-chromosomal miRNA genes in 464 patients with nonsyndromic X-linked mental retardation[J].European journal of human genetics,2007,15(3):375-378

    [17]趙林,張梁,孫欣羊,等.MicroRNA在非特異性精神發(fā)育遲滯患者外周血中的異常表達(dá)[J].中華行為與腦科學(xué)雜志,2014,23 (5):436-439

    http://www.cjhp.com.cn/

    The Differential Expression of MiRNA in Peripheral Blood of Patients with Non-specific Mental Retardation and Its Clinical Diagnostic Value

    YAN Yan,GAO Hui,LV Zhensu,et al
    First Mental Health Center of Shanghai Civil Ddministration,Shanghai 201105,China

    Objective:To research the differential expression of miRNA in the peripheral blood of the non-specific mental retardation patients and analyze its diagnostic value for non-specific mental retardation.Methods:30 nonspecific mental retardation patients and 30 healthy controls were selected to measure the 10 miRNAs chosen from the domestic and international literature by real-time fluorescence quantitative PCR.Results:①There were no significant differences in age,gender,urban and rural between the control group and the case group(P>0.05).②Compared with contrals,the expression levels of miRNA-125b,miRNA-132,miRNA-222,miRNA-223 and miRNA -363 were significant different in patients with non-specific mental retardation(P<0.05);③ROC analysis showed that miRNA-222(AUC=0.786,P=0.043),miRNA-223(AUC=0.833,P=0.008)could be used to distinguish non-specific mental retardation patients from healthy controls.Conclusion:The abnormal expression of miRNA-222 and miRNA-223 may have some diagnostic value to non-specific mental retardation,which may be related to the pathogenesis of non-specific mental retardation.

    Non-specific mental retardation;MiRNA;Real-time fluorescence quantitative PCR;Peripheral blood

    R749.05

    A

    1005-1252(2017)01-0004-04

    10.13342/j.cnki.cjhp.2017.01.002

    2016-08-06)

    猜你喜歡
    外周血特異性發(fā)育
    孩子發(fā)育遲緩怎么辦
    中華家教(2018年7期)2018-08-01 06:32:38
    精確制導(dǎo) 特異性溶栓
    BOPIM-dma作為BSA Site Ⅰ特異性探針的研究及其應(yīng)用
    刺是植物發(fā)育不完全的芽
    重復(fù)周圍磁刺激治療慢性非特異性下腰痛的臨床效果
    白血病外周血體外診斷技術(shù)及產(chǎn)品
    兒童非特異性ST-T改變
    中醫(yī)對(duì)青春發(fā)育異常的認(rèn)識(shí)及展望
    結(jié)腸炎小鼠外周血和結(jié)腸上皮組織中Gal-9的表達(dá)
    慢性蕁麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表達(dá)及臨床意義
    ponron亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲中文字幕日韩| 老司机在亚洲福利影院| 岛国在线观看网站| 欧美精品亚洲一区二区| 午夜激情av网站| 一级黄色大片毛片| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲专区中文字幕在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 美女午夜性视频免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产三级黄色录像| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 视频区图区小说| 精品日产1卡2卡| 欧美大码av| 丝袜美足系列| 97人妻天天添夜夜摸| 国产成人欧美| 村上凉子中文字幕在线| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 免费高清在线观看日韩| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品福利观看| 亚洲精品在线美女| ponron亚洲| 美女午夜性视频免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 俄罗斯特黄特色一大片| 丝袜人妻中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 成年女人毛片免费观看观看9| 最新美女视频免费是黄的| 真人做人爱边吃奶动态| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美性长视频在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| www.精华液| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 日本wwww免费看| 人人妻人人澡人人看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 三级毛片av免费| 又大又爽又粗| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 女人精品久久久久毛片| 亚洲成a人片在线一区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美色视频一区免费| cao死你这个sao货| 欧美日韩乱码在线| 久久久国产精品麻豆| 天堂动漫精品| 1024香蕉在线观看| 日本 av在线| 天天影视国产精品| 久久人人精品亚洲av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 黄色成人免费大全| 一级黄色大片毛片| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品一区二区在线不卡| 精品一区二区三区四区五区乱码| 免费人成视频x8x8入口观看| 五月开心婷婷网| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美+亚洲+日韩+国产| 少妇 在线观看| 看黄色毛片网站| 国产激情久久老熟女| 三级毛片av免费| 十八禁人妻一区二区| 亚洲九九香蕉| 在线免费观看的www视频| 亚洲国产精品999在线| 少妇粗大呻吟视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 91精品国产国语对白视频| 在线播放国产精品三级| 99久久国产精品久久久| 男人的好看免费观看在线视频 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| av视频免费观看在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 好男人电影高清在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 不卡av一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| a级毛片黄视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美日韩av久久| 无限看片的www在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 久久香蕉国产精品| 91国产中文字幕| 亚洲成a人片在线一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一a级毛片在线观看| 亚洲中文av在线| 超色免费av| 91麻豆av在线| 久久精品国产综合久久久| 999精品在线视频| 美女午夜性视频免费| 国产成人系列免费观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品日韩av在线免费观看 | 一区二区三区精品91| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一级毛片女人18水好多| 麻豆成人av在线观看| 午夜免费成人在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲国产欧美一区二区综合| 中出人妻视频一区二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美日韩精品网址| 日本五十路高清| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产真人三级小视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 伦理电影免费视频| 亚洲国产欧美网| 午夜视频精品福利| 午夜福利,免费看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产精品九九99| 久久亚洲真实| 99精国产麻豆久久婷婷| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久99久视频精品免费| 校园春色视频在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日本三级黄在线观看| 级片在线观看| 一级毛片高清免费大全| 久久久久久久久中文| 久久精品91蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产av精品麻豆| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久9热在线精品视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 级片在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲色图av天堂| 亚洲三区欧美一区| 日韩精品青青久久久久久| 美女大奶头视频| 波多野结衣高清无吗| 97碰自拍视频| 欧美日本中文国产一区发布| 51午夜福利影视在线观看| 国产成人影院久久av| 国产av一区在线观看免费| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 91成人精品电影| 亚洲精品一二三| 淫秽高清视频在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产乱人伦免费视频| 亚洲少妇的诱惑av| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲国产欧美一区二区综合| 热99re8久久精品国产| 男男h啪啪无遮挡| 日韩精品中文字幕看吧| 女同久久另类99精品国产91| 日本欧美视频一区| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲中文av在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 免费不卡黄色视频| 日韩欧美在线二视频| www日本在线高清视频| 国产视频一区二区在线看| 国产在线观看jvid| 岛国视频午夜一区免费看| 天堂√8在线中文| 日本黄色日本黄色录像| 18美女黄网站色大片免费观看| 一区二区三区精品91| 男女下面插进去视频免费观看| 国产黄色免费在线视频| 成人三级做爰电影| 色婷婷av一区二区三区视频| 很黄的视频免费| 亚洲avbb在线观看| 亚洲免费av在线视频| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 97人妻天天添夜夜摸| 久久国产亚洲av麻豆专区| 精品国产亚洲在线| 波多野结衣高清无吗| 国产xxxxx性猛交| 免费高清在线观看日韩| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 久久这里只有精品19| 免费在线观看黄色视频的| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久伊人香网站| 操出白浆在线播放| 久久性视频一级片| 日韩高清综合在线| 天堂中文最新版在线下载| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 欧美黑人精品巨大| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产成人系列免费观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 999精品在线视频| 色老头精品视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 成人精品一区二区免费| 人人澡人人妻人| 在线观看免费午夜福利视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日韩欧美免费精品| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲av成人av| 日本免费a在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲熟妇熟女久久| 在线免费观看的www视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产免费现黄频在线看| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产精品999在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产av在哪里看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美在线黄色| 亚洲激情在线av| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 黄频高清免费视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲五月婷婷丁香| 一级作爱视频免费观看| 日本五十路高清| 国产一区二区三区视频了| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 午夜免费观看网址| 淫秽高清视频在线观看| 宅男免费午夜| 99国产综合亚洲精品| 国产成人精品在线电影| 嫩草影院精品99| 极品教师在线免费播放| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 丁香六月欧美| 热99国产精品久久久久久7| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 露出奶头的视频| 国产精品九九99| 99精品欧美一区二区三区四区| 91av网站免费观看| 国产av精品麻豆| 99re在线观看精品视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜福利欧美成人| 一区福利在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 国产成人系列免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品在线观看二区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 波多野结衣高清无吗| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日日干狠狠操夜夜爽| 丝袜人妻中文字幕| 欧美成狂野欧美在线观看| 午夜福利在线观看吧| 在线观看日韩欧美| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 九九热线精品视视频播放| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 中文资源天堂在线| 村上凉子中文字幕在线| 91麻豆精品激情在线观看国产| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 嫩草影院入口| 性欧美人与动物交配| 国产av一区在线观看免费| 人人妻人人看人人澡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产在线男女| 欧美最新免费一区二区三区 | 久久香蕉精品热| 最好的美女福利视频网| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 如何舔出高潮| 欧美乱色亚洲激情| 免费av不卡在线播放| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 一个人免费在线观看电影| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品99久久久久久久久| 全区人妻精品视频| avwww免费| 国模一区二区三区四区视频| 久久99热6这里只有精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 99国产精品一区二区三区| 亚洲专区国产一区二区| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产三级在线视频| 久久人人爽人人爽人人片va | 无遮挡黄片免费观看| 久久中文看片网| av在线天堂中文字幕| 色av中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 欧美色欧美亚洲另类二区| 色播亚洲综合网| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲av一区综合| 欧美一区二区国产精品久久精品| 我的女老师完整版在线观看| 亚州av有码| 88av欧美| 亚洲精品色激情综合| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产91精品成人一区二区三区| 国产黄色小视频在线观看| 成人午夜高清在线视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 级片在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 一个人看视频在线观看www免费| 欧美午夜高清在线| 在现免费观看毛片| 级片在线观看| 身体一侧抽搐| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 深夜a级毛片| 99热这里只有是精品在线观看 | 18美女黄网站色大片免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产三级中文精品| 免费在线观看成人毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 色播亚洲综合网| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美成人免费av一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| av视频在线观看入口| 老女人水多毛片| 在线免费观看的www视频| 在线看三级毛片| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精华一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 中文字幕熟女人妻在线| 九色国产91popny在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久99热6这里只有精品| 欧美又色又爽又黄视频| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日韩欧美精品v在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 国产乱人伦免费视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 99视频精品全部免费 在线| 免费电影在线观看免费观看| 色哟哟哟哟哟哟| .国产精品久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲成av人片免费观看| 国内精品久久久久精免费| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久精品综合一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 99热精品在线国产| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 丝袜美腿在线中文| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美中文日本在线观看视频| 国内精品一区二区在线观看| 九九热线精品视视频播放| 日韩 亚洲 欧美在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 高清毛片免费观看视频网站| 性色avwww在线观看| 黄色配什么色好看| 久久人人精品亚洲av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲avbb在线观看| 一区二区三区激情视频| 97超视频在线观看视频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲人与动物交配视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久九九热精品免费| 人妻久久中文字幕网| 国产乱人伦免费视频| 偷拍熟女少妇极品色| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国语自产精品视频在线第100页| 国产一区二区激情短视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 午夜久久久久精精品| 热99在线观看视频| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩中字成人| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产三级在线视频| 91在线精品国自产拍蜜月| .国产精品久久| 少妇的逼好多水| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久久久久久成人| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲18禁久久av| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产野战对白在线观看| 99热这里只有精品一区| 色在线成人网| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 一级黄色大片毛片| 国产成人福利小说| 搞女人的毛片| 日韩欧美精品v在线| 欧美色视频一区免费| 亚洲成人免费电影在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久午夜亚洲精品久久| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 一区二区三区四区激情视频 | 色av中文字幕| 丰满人妻一区二区三区视频av| 美女 人体艺术 gogo| 五月伊人婷婷丁香| 热99re8久久精品国产| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲美女黄片视频| 国产精品久久视频播放| 亚洲 国产 在线| a级毛片a级免费在线| 免费在线观看亚洲国产| 麻豆久久精品国产亚洲av| 在线看三级毛片| 国产乱人视频| 午夜激情福利司机影院| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本黄色片子视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 嫩草影院入口| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精华一区二区三区| 日韩欧美国产在线观看| 综合色av麻豆| 亚洲avbb在线观看| 亚洲综合色惰| 禁无遮挡网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产av一区在线观看免费| 最新中文字幕久久久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 中文资源天堂在线| av视频在线观看入口| 久久久久久久久久成人| 一个人观看的视频www高清免费观看| 搞女人的毛片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产乱人伦免费视频| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产精品999在线| 国产日本99.免费观看| 亚洲激情在线av| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 婷婷丁香在线五月| 91字幕亚洲| 女人被狂操c到高潮| 免费电影在线观看免费观看| 久99久视频精品免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产伦精品一区二区三区视频9| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 男女之事视频高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲国产精品合色在线| 91久久精品国产一区二区成人| 999久久久精品免费观看国产| 国产69精品久久久久777片| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产熟女xx| 最后的刺客免费高清国语| 欧美日韩综合久久久久久 | av欧美777| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品三级大全| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产精品野战在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产精品亚洲一级av第二区| 热99re8久久精品国产| 91久久精品电影网| www.熟女人妻精品国产| 我要看日韩黄色一级片| 黄色一级大片看看| 日本一二三区视频观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品影院久久| 极品教师在线视频| 亚洲熟妇熟女久久| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久久久午夜电影| 中文亚洲av片在线观看爽| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品影院久久| 亚洲在线观看片| 成人午夜高清在线视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 99在线视频只有这里精品首页| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产v大片淫在线免费观看| 99在线人妻在线中文字幕| 99热这里只有是精品50| 精品人妻视频免费看| www.熟女人妻精品国产| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 中文字幕久久专区| 久久精品影院6| 中文资源天堂在线| 久久精品影院6| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产av在哪里看| 成人美女网站在线观看视频| 51午夜福利影视在线观看| av福利片在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久久久久久久久成人| 1024手机看黄色片| 黄色配什么色好看| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲人成电影免费在线| 一进一出好大好爽视频|