新輔助化療聯(lián)合同步放化療對(duì)鼻咽癌外周血淋巴細(xì)胞的影響研究

楊 婧 肖 亮

(1. 安徽省腫瘤醫(yī)院放療科，安徽 合肥 230001；2. 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科，安徽 合肥 230022)

新輔助化療聯(lián)合同步放化療對(duì)鼻咽癌外周血淋巴細(xì)胞的影響研究

楊 婧1肖 亮2

(1. 安徽省腫瘤醫(yī)院放療科，安徽 合肥 230001；2. 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科，安徽 合肥 230022)

目的 觀察中晚期鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化，為鼻咽癌免疫治療提供依據(jù)。方法 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)58例鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療前后外周血的T淋巴細(xì)胞及其亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的比例。結(jié)果 鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療后的外周血Th(CD3+CD4+)、Th/Ts(CD4+/CD8+)、B(CD3-CD19+)的均值較治療前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Ts(CD3+CD8+)、NK(CD3-CD16+CD56+)的均值較治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，T(CD3+)、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-的均值均較治療前下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療后，免疫功能出現(xiàn)明顯下降，故適當(dāng)?shù)拿庖咧委煂?duì)鼻咽癌患者降低并發(fā)癥、改善預(yù)后可能起到積極的作用。

鼻咽癌；新輔助化療；同步放化療；淋巴細(xì)胞。

新輔助化療聯(lián)合同步放化療現(xiàn)已成為中晚期鼻咽癌的標(biāo)準(zhǔn)治療模式，以往的報(bào)導(dǎo)中，多為常規(guī)放療對(duì)鼻咽癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響，新的綜合治療下的鼻咽癌患者外周血淋巴細(xì)胞的變化尚少有報(bào)導(dǎo)。本研究通過(guò)測(cè)定鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療前后淋巴細(xì)胞亞群的變化，判斷機(jī)體的免疫功能變化，對(duì)鼻咽癌綜合治療中免疫治療的作用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 2015年7月到2017年6月我院收治的初治鼻咽癌患者58例，年齡小于70歲，均有鼻咽部病理證實(shí)，均有鼻咽部+頸部增強(qiáng)MRI檢查，無(wú)免疫系統(tǒng)疾病。入院前無(wú)其他抗腫瘤治療或免疫治療，其中男性40例，女性18例，年齡27～52歲，中位年齡47歲。鼻咽癌一般特征分布見(jiàn)表1。

1.2主要儀器、試劑及淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)方法 采用美國(guó)BD公司的FACS AriaⅢ4色流式細(xì)胞儀，采用美國(guó)BD公司的鼠抗人CD3、CD4、CD16CD56、CD19、CD4CD25CD127單克隆抗體。采用BD公司自動(dòng)分析軟件進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞染色分析，查看各淋巴細(xì)胞所占的百分比。

表1 鼻咽癌患者一般情況分布

1.3治療方法 所有鼻咽癌患者均行2程新輔助化療后行同步放化療，新輔助化療均為多西他賽60 mg/m2，d1+順鉑25 mg/m2d1～3+氟尿嘧啶600 mg/m2CIV120 h方案。化療結(jié)束1月內(nèi)行放療，采用Varian trilogy 5339直線加速器，容積旋轉(zhuǎn)調(diào)強(qiáng)適形放療，鼻咽病灶劑量在68～70 Gy之間，放療期間采用每周方案同步化療，順鉑/奈達(dá)鉑40 mg/m2/周×5周同步化療。分別于新輔助化療開(kāi)始前和同步放化療結(jié)束后3個(gè)月內(nèi)抽取晨起空腹靜脈血2 ml，EDTA抗凝。用不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體20 μl加入50 μl的EDTA抗凝的外周血，染色10 min，加入紅細(xì)胞裂解液，裂解15 min， PBS清洗3次，上機(jī)檢測(cè)T細(xì)胞亞群比例和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療后的外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+的均值較治療前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為8.173、8.544、2.571，P值為<0.001、<0.001、0.015)，CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+的均值較治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為-4.787、-2.610，P值為<0.001、0.014)，CD3+、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-的均值均較治療前下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為1.649、0.301、0.974，P值為0.109、0.765、0.338)。見(jiàn)表2和表3。

表2 新輔助化療聯(lián)合同步放化療前后鼻咽癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群比較

免疫指標(biāo)治療前治療后tPCD3+(%)66.687±9.04263.271±14.4491.6490.109CD4+(%)39.110±7.10327.855±9.0188.1730.000CD8+(%)25.836±7.63433.358±10.661-4.7870.000CD4+/CD8+1.643±0.5800.928±0.5208.5440.000CD16+CD56+(%)21.916±9.17426.826±13.132-2.6100.014CD19+(%)8.161±3.8426.023±4.2542.5710.015

表3 新輔助化療聯(lián)合同步放化療前后鼻咽癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比較

3 討 論

放療是鼻咽癌首選治療手段，以往多為常規(guī)放療，現(xiàn)調(diào)強(qiáng)適形放療使鼻咽癌患者5年生存率提高到80%左右[1-2]，新輔助化療可以降低遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率，對(duì)提高局部控制率也有一定的作用[3-4]，故對(duì)于中晚期鼻咽癌，新輔助加同步聯(lián)合調(diào)強(qiáng)適形放療成為標(biāo)準(zhǔn)的治療手段。但機(jī)體免疫功能的下降使得同步放化療后期出現(xiàn)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)增高，局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的幾率增高，因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)免疫功能并及時(shí)的改善機(jī)體的免疫狀態(tài)尤為重要。

機(jī)體抗腫瘤的免疫效應(yīng)主要由細(xì)胞免疫所介導(dǎo)，發(fā)揮免疫效應(yīng)的細(xì)胞主要為T(mén)細(xì)胞，CD4+/CD8+比值是反應(yīng)機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，正常情況下，機(jī)體CD4+/CD8+比值保持一定的比例，維持機(jī)體的正常的免疫功能。劉斌等[5]報(bào)道了鼻咽癌患者與健康體檢者相比，CD4+、CD4+/CD8+均值下降，CD8+均值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究中，鼻咽癌患者新輔助化療聯(lián)合同步放化療后與治療前相比CD4+T細(xì)胞比例、CD19+比例明顯降低，CD8+T細(xì)胞比例明顯升高，CD4+/CD8+比值在治療后是顯著降低的，而CD3+T細(xì)胞比例及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例均值降低，尚無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上結(jié)果提示放化療在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也在降低機(jī)體的免疫功能，同步放化療后期出現(xiàn)骨髓抑制、肺部感染等幾率大大增加，部分病人因此中斷放療，影響預(yù)后。外周血中NK細(xì)胞的比例在上升，可能提示在機(jī)體特異性免疫降低的同時(shí)，NK細(xì)胞可能收到某些特定細(xì)胞因子的活化，固有免疫較治療前增強(qiáng)。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一群具有抑制其他免疫細(xì)胞功能的免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞，在腫瘤微環(huán)境中，Treg比例增高，且數(shù)目與腫瘤進(jìn)展程度和預(yù)后、生存率呈負(fù)相關(guān)[6-7]。本研究中，Treg均值較治療前下降，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能系樣本量偏小及腫瘤分期偏晚有關(guān)。

綜上所述，動(dòng)態(tài)檢測(cè)鼻咽癌患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的變化，尤其是CD4+/CD8+比值，有助于及時(shí)了解機(jī)體免疫功能，為免疫治療提供了依據(jù)，采用聯(lián)合MHCⅠ類(lèi)和MHCⅡ類(lèi)限制性腫瘤抗原治療，以及去除Treg或封閉其抑制功能，從而增強(qiáng)其他淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng)，有利于降低合并癥，降低腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)會(huì)。

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Effect of neoadjuvant chemotherapy combined with concurrent chemoradiotherapy on peripheral blood lymphocytes in patients with nasopharyngeal carcinoma

YANGJing1XIAOLiang2

(Anhui Tumour Hospital, Hefei 230001，China)

Objective:To observe changes in levels of peripheral blood lymphocyte subsets and regulatory T cells before and after neoadjuvant chemotherapy combined chemoradiation in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC), to provide the basis for immune treatment.Methods:Immune cells in the peripheral, including T lymphocyte and its subsets, NK cells, B cells, and the proportion of regulatory T cells , were detected by flow cytometry in 58 blood samples from the patients with nasopharyngeal carcinoma, who were treated prior to and after the combined treatment. Results: After be treated by the combined treatment in patients with NPC, we can observe that the average of peripheral blood Th(CD3+CD4+)、Th/Ts(CD4+/CD8+)and B(CD3-CD19+)was decreased, the differences were significant (P<0.05).The mean of Ts(CD3+CD8+)、NK(CD3-CD16+CD56+)was increased, the differences were significant(P<0.05).The average of T(CD3+)、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-was decreased, there was no significant difference(P>0.05).Conclusion:The combined treatment can attenuate the immune function of the patients with NPC.It is therefore possible that the efficient treatment for immune function is favorable for the reduction of complications after NPC and the improvement of patients’prognosis.

NPC;neoadjuvant chemotherapy;concurrent chemoradiotherapy;lymphocytes

楊婧(1986—)，女，安徽亳州人，住院醫(yī)師，本科，主要從事臨床腫瘤放射治療工作。

R739.6

A

1004-7115(2017)12-1367-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.12.015

2017-09-13)