花刺參胚胎和幼體發(fā)育的形態(tài)觀察

王懷洪，嚴(yán)俊賢，馮永勤，方再光 ，王世鋒，周永燦，舒培軍

( 1.海南大學(xué) 海洋學(xué)院，熱帶生物資源教育部重點實驗室，海南省熱帶水生生物技術(shù)重點實驗室，海南 海口 570228； 2.南海水產(chǎn)研究所，熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018；3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300 )

花刺參胚胎和幼體發(fā)育的形態(tài)觀察

王懷洪1，嚴(yán)俊賢2,3，馮永勤1，方再光1，王世鋒1，周永燦1，舒培軍1

( 1.海南大學(xué) 海洋學(xué)院，熱帶生物資源教育部重點實驗室，海南省熱帶水生生物技術(shù)重點實驗室，海南 海口 570228； 2.南海水產(chǎn)研究所，熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018；3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300 )

為提高花刺參育苗技術(shù)，對花刺參自受精卵發(fā)育到稚參的形態(tài)變化進(jìn)行了觀察研究，詳細(xì)描述了胚胎發(fā)育各個時期的形態(tài)特征。通過陰干、流水刺激法對成熟親參進(jìn)行人工催產(chǎn)，得到大量的受精卵。在水溫27～30 ℃及鹽度33.0～35.0室內(nèi)水泥池進(jìn)行花刺參幼體培育?；ù虆⑹芫呀?jīng)5 h發(fā)育成囊胚，7 h進(jìn)入旋轉(zhuǎn)囊胚期，9 h進(jìn)入原腸期，31 h完成胚胎發(fā)育變態(tài)為耳狀幼體，并經(jīng)10 d的生長發(fā)育進(jìn)入樽形幼體，第20 d變態(tài)為稚參。由結(jié)果可知，花刺參的幼體的健康狀況與其水體腔和胃部生長發(fā)育狀況密切相關(guān)，水體腔和胃部發(fā)育良好，花刺參的健康狀況則佳，有利于幼體的變態(tài)與存活。

花刺參；胚胎；幼體；發(fā)育

花刺參(Stichopusherrmanni，曾用拉丁名為S.variegatus)又名黃肉參、白刺參、豬蟲參等，屬楯手目、刺參科、刺參屬，為南海常見可食用海參。花刺參具有較高的藥用價值與食用價值，經(jīng)研究分析，其體內(nèi)含有大量能增強人體免疫的成分，包括三萜類物質(zhì)、多糖類物質(zhì)等，具有很好的食療與保健作用[1]，國內(nèi)市場需求量甚大。然而，由于過渡捕撈和棲息地遭人為破壞，花刺參野生資源嚴(yán)重衰減，依靠野外捕撈的花刺參已無法滿足市場需求。

國外較早便有花刺參繁育等方面研究的報道，Conand[2]對花刺參的活動行為學(xué)進(jìn)行了研究，分析了花刺參性成熟的相關(guān)數(shù)據(jù)，為花刺參的繁育技術(shù)研究打下了基礎(chǔ)；Tehranifard等[3]發(fā)現(xiàn)花刺參的性成熟與光周期和積溫有關(guān)；同時，對野生花刺參的資源調(diào)查方面也有相關(guān)的報道[4-6]，對保護(hù)該物種天然資源起到積極作用。目前我國南方地區(qū)主要以糙海參(Holothuriascabra)為主要養(yǎng)殖開發(fā)對象[7-9]，而對花刺參的研究主要集中在醫(yī)藥與營養(yǎng)方面[10-11]，其養(yǎng)殖方面的報道極少[12]?；ù虆⒆鳛槟戏綗釒Ш⑵贩N，其營養(yǎng)價值為南海食用海水參中最高[13]，卻尚未形成規(guī)模化人工培育。為有效保護(hù)及開發(fā)利用花刺參資源，筆者對花刺參胚胎及幼體發(fā)育進(jìn)行了研究，為花刺參全人工繁育與養(yǎng)殖技術(shù)的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親參促排

花刺參親參為海南省瓊海市海域捕撈的天然個體，體長25～32 cm，體質(zhì)量860～1500 g。親參采回后置于6 m×2 m×1.2 m的室內(nèi)養(yǎng)殖水泥池中，水深1.1 m，池水水溫27～30 ℃(平均28.3 ℃)。投喂海參親參配合飼料，對花刺參親參進(jìn)行營養(yǎng)強化培養(yǎng)。待性腺發(fā)育成熟后，利用陰干、流水刺激法進(jìn)行人工誘導(dǎo)，即先將親參陰干處理1 h，接著流水刺激45 min，最后放入池中待產(chǎn)。配子釋放并完成受精后，用過濾海水進(jìn)行洗卵，清除多余精子，將親參自池中撈出。

1.2 胚胎發(fā)育鏡檢

囊胚期至原腸期階段每隔15 min取樣一次。每次取20個樣本進(jìn)行觀察，在光學(xué)顯微鏡下用電子目鏡拍攝記錄各階段的形態(tài)，并測量樣品大小。

1.3 幼體培育與生長發(fā)育鏡檢

小耳幼體的育苗密度為100個/L，24 h連續(xù)微充氣，投喂球等邊金藻(Isochrysisgalbana)、牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)、海洋酵母粉及螺旋藻(Spirulinasp.)粉，每日7:30和18:00各投餌一次，鮮活單胞藻投喂量為1500個/L，海洋酵母粉及螺旋藻粉的總投喂量為2 g/m3。觀察到有20%～30%的幼體發(fā)育至樽形幼體時，投放聚乙烯波紋板附著基。在幼體培育期間，每日于8:00和20:00分別取樣1次，觀察幼體發(fā)育形態(tài)、攝食、病變等情況，同時注意觀察其他有害水生動物對幼體存活的影響。每次取20個樣本進(jìn)行觀察，在光學(xué)顯微鏡下用電子目鏡拍攝記錄各階段的形態(tài)并測量樣品大小。

2 結(jié) 果

2.1 花刺參人工誘導(dǎo)與受精

花刺參親參經(jīng)過7 d的營養(yǎng)強化培養(yǎng)，通過刺激海參吐臟隨機抽樣檢查其性腺發(fā)育情況，鏡檢得親參性腺發(fā)育成熟，均可用于人工催產(chǎn)。觀察發(fā)現(xiàn)，成熟雄性個體的精子活動能力強，其性腺腺管飽滿，呈乳白色；而成熟雌性個體的卵子飽滿且色澤均勻，卵泡清晰，其性腺腺管飽滿，呈黃色半透明。確定性腺成熟后，于當(dāng)日18:00進(jìn)行人工誘導(dǎo)，直至次日0:00雄參開始排精，30 min后雌參開始產(chǎn)卵，被釋放的配子在水中自然受精。鏡檢發(fā)現(xiàn)，個別受精卵出現(xiàn)多精入卵現(xiàn)象，部分出現(xiàn)該現(xiàn)象的受精卵最終將停止發(fā)育并死亡?；ù虆⑴咛ズ陀左w發(fā)育過程見表1。

2.2 胚胎發(fā)育

生殖細(xì)胞：花刺參卵細(xì)胞大小為115～165 μm，整體圓潤平滑，能夠觀察到細(xì)胞核中的核物質(zhì)；花刺參的精子活動活躍，精子活動時難以分辨其尾部。

受精卵：受精后約23 min，受精卵的卵膜逐漸變厚(圖1a)，然后依次出現(xiàn)卵膜舉起(圖1b)、極體排放(圖1c)的現(xiàn)象，其中第一極體和第二極體排放間隔時間為4～7 min。

卵裂期：受精后約41 min，出現(xiàn)第一次細(xì)胞分裂，即二分裂，之后的卵裂間隔時間約為40 min，256細(xì)胞期則持續(xù)了2 h。由圖1可見，花刺參的胚胎細(xì)胞排列不緊密，細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的間隙，細(xì)胞的形狀多變不規(guī)則(圖1d～k)。

囊胚期：花刺參囊胚直徑為160～210 μm(圖1l)，囊胚期的持續(xù)時間約為1.5 h，發(fā)育至囊胚后期其形狀由正圓形逐漸生長為略呈橢圓形。

旋轉(zhuǎn)囊胚期：花刺參受精卵經(jīng)過約7 h的發(fā)育生長至旋轉(zhuǎn)囊胚期。胚胎利用表面纖毛擺動而旋轉(zhuǎn)，經(jīng)過3 h的旋轉(zhuǎn)脫膜，囊胚自卵膜中破膜而出，并在水中自由游動。同時，花刺參囊胚形態(tài)發(fā)生較明顯的變化，明顯呈橢圓形(圖1m)。

表1 花刺參胚胎和幼體發(fā)育過程(28.3 ℃)

原腸期：旋轉(zhuǎn)囊胚經(jīng)過3 h的發(fā)育，花刺參胚胎進(jìn)入原腸期，其胚胎呈橢圓形，植物極一端細(xì)胞增多，出現(xiàn)加厚并內(nèi)陷逐漸形成胚孔和原腸(圖1n)，同時出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞彌散分布在體腔內(nèi)；原腸繼續(xù)發(fā)育向腹面彎曲并在腹面開口形成了口和食道，原腸中段則分化成為胃和腸，原來的胚孔則變?yōu)楦亻T；體表纖毛逐漸脫落，剩下體側(cè)的纖毛保留而形成纖毛環(huán)；間質(zhì)細(xì)胞不斷增殖分化，體色加深，從側(cè)面觀察其形態(tài)逐漸變得與人耳相似。受精卵經(jīng)過約31 h的生長，完成了胚胎發(fā)育而開始進(jìn)入幼體階段。

花刺參初耳狀幼體：受精后約31 h，花刺參由原腸期進(jìn)入初耳狀幼體期，此期花刺參的消化系統(tǒng)以基本分化完成，胃部變大呈水滴形，咽部壁變厚，進(jìn)食時可見咽部肌肉收縮?？诤透亻T附近的前后端纖毛帶向中部彎曲生長，分別形成了口前環(huán)和口后環(huán)，口前環(huán)和口后環(huán)上的兩側(cè)纖毛帶則向兩側(cè)彎曲，形成肛前臂和口后臂；尾端平，兩側(cè)尖角處向外生長突出形成后側(cè)臂，骨片于后側(cè)臂的尖端處形成，顏色變深(圖2a)。此期幼體開始攝食，在生產(chǎn)實踐中開始需要投入開口餌料以幫助幼體完成生長發(fā)育。

中耳狀幼體：胚胎發(fā)育至第4 d，花刺參進(jìn)入中耳狀幼體。幼體體側(cè)纖毛帶不斷向兩側(cè)生長突起，形成后側(cè)臂和間背臂，口前臂、肛前臂、后背臂和前背壁的輪廓也逐漸清晰。骨片隨著幼體生長變大變厚，顏色略加深。胃部明顯增大，攝食量也隨之增加，此時期的幼體培養(yǎng)需要加大餌料投喂量。左體腔和右體腔出現(xiàn)在胃部的左右兩邊，在顯微鏡觀察下呈條狀。水體腔體積增大，位于食道的左側(cè)。后側(cè)臂不斷向后生長延伸，尾部由平坦變?yōu)槁猿蕛?nèi)凹。幼體生長至中耳狀后期，體高可達(dá)到850 μm(圖2b)。

圖1 花刺參胚胎發(fā)育a.受精卵；b.卵膜舉起；c.第一極體排出；d.2細(xì)胞期；e.4細(xì)胞期；f.8細(xì)胞期；g.16細(xì)胞期；h.32細(xì)胞期；i.64細(xì)胞期；j.128細(xì)胞期；k.256細(xì)胞期；l.囊胚期；m.旋轉(zhuǎn)囊胚期；n.原腸初期；o.原腸期；p.原腸后期.1.卵膜；2.極體；3.原腸；4.間質(zhì)細(xì)胞. 標(biāo)尺為100 μm.

大耳狀幼體：胚胎發(fā)育至第7 d變成大耳狀幼體，幼體的大小達(dá)到最大，體高可達(dá)1200 μm。體側(cè)各臂已發(fā)育完全，輪廓清晰，各壁尖端處形成半透明的球狀體，共有5對。后側(cè)臂尖端處的骨片不斷生長加厚，呈類似三角形的塊狀結(jié)構(gòu)，與球狀體擠壓于后側(cè)臂狹窄的空間內(nèi)。左右體腔逐漸變得明顯，水體腔則生長形成初級口觸手原基和輻水管原基。胃部非常膨大，呈卵圓形，食物在胃腔內(nèi)不斷旋轉(zhuǎn)消化。大耳狀幼體后期，幼體體形開始向中心收縮，各臂變短，胃部也明顯縮小，表明幼體開始向樽形幼體變態(tài)(圖2c)。

樽形幼體：10日齡花刺參幼體進(jìn)入樽形幼體期。幼體的體形不斷縮小，各臂逐漸變小直至消失，身體形狀呈橢圓形，5對球狀體均勻分布于身體兩側(cè)，尾端兩側(cè)的骨片變大。纖毛部分脫落，纖毛帶隨身體收縮而形成橫向生長的纖毛帶，纖毛帶顏色略深?？谟|手原基發(fā)育成口觸手，和輻水管彎曲團(tuán)縮體腔內(nèi)，在顯微鏡觀察下可以看到口觸手在體腔內(nèi)略有蠕動。胃部繼續(xù)縮小呈圓形，樽形幼體攝食量大幅下降或甚至停食。該時期體高縮小至大耳狀幼體的一半左右，為390～610 μm(圖2d)。

五觸手幼體：幼體發(fā)育至第13 d進(jìn)入五觸手幼體時期。纖毛繼續(xù)脫落，最后纖毛帶消失，幼體失去依靠纖毛擺動浮游的能力而下沉。口觸手已可完全從口伸出體外，進(jìn)行附著運動和攝食。體形進(jìn)一步縮小，體色由半透明明顯加深至灰綠色，球狀體也完全消失，體表骨片開始形成(圖2e)。此期幼體開始從攝食浮游單胞藻轉(zhuǎn)為攝食底棲藻類，攝食量逐漸增大，身體也隨之生長加快。

稚參：20日齡開始進(jìn)入稚參期，稚參表皮長出大量的肉質(zhì)尤突，體表顯得凹凸不平。稚參第一管足從后端發(fā)育完全，并與口觸手共同完成爬行和攝食運動，攝食量大大提高，體增長加快，此期要注意投喂充足的餌料以供幼蟲生長的營養(yǎng)所需(圖2f)。

圖2 花刺參幼體發(fā)育a.小耳狀幼體；b.中耳狀幼體；c.大耳狀幼體d.樽形幼體；e.五觸手幼體；f.稚參. 1.胃；2.肛門；3.咽部；4.口；5.口前環(huán)；6.口后環(huán)；7.食道；8.左體腔；9.右體腔；10.水體腔；11.骨片；12.肛前臂；13.口前臂；14.后側(cè)臂；15.后背臂；16.間背臂；17.前背臂；18.球狀體；19.輻水管；20.口觸手；21.第一管足.標(biāo)尺為100 μm.

3 討 論

3.1 多精入卵對花刺參幼體發(fā)育的影響

筆者觀察并記錄了花刺參胚胎與幼體發(fā)育的時間和幼體各個階段的形態(tài)變化，觀察發(fā)現(xiàn)，親參釋放配子后，精子數(shù)量大于卵子數(shù)量，在花刺參受精卵細(xì)胞受精過程中，精子通過頂體反應(yīng)進(jìn)入卵細(xì)胞，而卵細(xì)胞則會釋放某種物質(zhì)來導(dǎo)致覆蓋在卵子表面的多個精子同時發(fā)生頂體反應(yīng)，從而促使多精入卵的出現(xiàn)。已有研究表明，多精入卵可致胚胎停止發(fā)育，或?qū)е屡咛コ霈F(xiàn)非整體而產(chǎn)生胚胎的早期死亡[14]。為保證單個精核與卵核的融合，在長期進(jìn)化過程中，海洋無脊椎動物形成復(fù)雜的對應(yīng)多精入卵機制。棘皮動物中，目前有關(guān)棘皮動物阻止多精入卵機制的研究較多，棘皮動物主要通過兩個反應(yīng)阻止多精入卵：①快封閉反應(yīng)，精子進(jìn)入卵細(xì)胞迅速促發(fā)膜電位改變，引起膜外精子與卵細(xì)胞識別和融合障礙；②慢封閉反應(yīng)，通過皮層反應(yīng)形成厚而硬的受精膜，防止多精入卵[15]。在仿刺參(Apostichopusjaponicus)研究中發(fā)現(xiàn)，仿刺參精子鉆入卵子之后，卵子也會發(fā)生皮層反應(yīng)，形成受精膜，這表明刺參也有慢封閉反應(yīng)，以阻止多精入卵發(fā)生[16]。在仿刺參受精及早期胚胎發(fā)育過程的細(xì)胞學(xué)研究中觀察到多精入卵現(xiàn)象，進(jìn)入的精子能形成雄原核，然而未發(fā)現(xiàn)染色體分離異?，F(xiàn)象[17]。其推測仿刺參具有適應(yīng)多精入卵機制，即進(jìn)入卵子的精子均能形成雄原核，但雌原核只與其中一個雄原核發(fā)生聯(lián)合，多余的雄原核在卵內(nèi)被逐漸吸收或崩解。因此，雖然花刺參受精過程中出現(xiàn)部分多精入卵現(xiàn)象，但并未造成大量胚胎發(fā)育停止。

3.2 花刺參耳狀幼體的健康發(fā)育標(biāo)志

在花刺參幼體發(fā)育過程中，大耳幼體輻水管原基、球狀體的形成與發(fā)育可作為判斷其是否能順利完成變態(tài)和幼體能否健康生長的重要標(biāo)志，與餌料的投喂?fàn)顩r相關(guān)。如Dautov[18]指出，沒有出現(xiàn)球狀體對海參幼體部分結(jié)構(gòu)的形成不利，進(jìn)一步對參苗的變態(tài)和附著產(chǎn)生消極影響；Ramofafia等[19]觀察白底輻肛參(Actinopygamauritiana)幼體生長時發(fā)現(xiàn)，合理投喂高質(zhì)量餌料和完善的養(yǎng)殖管理有助于球狀體的形成；嚴(yán)俊賢等[8]對糙海參的研究表明，在幼體培育過程中，投喂適量鮮活餌料有助于提高大耳幼體球狀體的出現(xiàn)。本試驗在幼體人工培育階段，投喂適量海洋酵母粉、螺旋藻粉，既有助于球狀體和輻水管較早形成，同時也能提高幼體發(fā)育速率、變態(tài)率及成活率。

3.3 花刺參耳狀幼體與其他海參幼體的差異

花刺參幼體與糙海參幼體形態(tài)上有一定差別，糙海參從小耳幼體開始在幼體后端中線向后長出一個較大的突起物，該結(jié)構(gòu)到中耳幼體已非常清晰，根據(jù)其幼體形態(tài)將其稱呼為“尾突”[8]；而花刺參幼體中未發(fā)現(xiàn)“尾突”或類似“尾突”結(jié)構(gòu)；同時，糙刺參(S.horrens)[20]、暗色刺參(Isostichopusfuscus)[21]與刺參(Stichopussp.)[22]的幼體中同樣也未出現(xiàn)該結(jié)構(gòu)。因此，不同類別的海參幼體存在形態(tài)特征上的差異，掌握特定海參的形態(tài)發(fā)育特點有助于鑒別海參幼體的種類。同時，“尾突”的有無使得不同種類幼體間的骨片生長位置也產(chǎn)生差異，花刺參等刺參科海參的骨片生長于后側(cè)臂尖端，呈不規(guī)則形，而糙海參的骨片則位于“尾突”末端，形狀為圓塊狀。

3.4 花刺參幼體的變態(tài)附著

相關(guān)研究表明，海參幼體培育至樽形幼體容易大量死亡[23]。但筆者通過人工配合飼料與鮮活餌料的混合投喂試驗表明，花刺參生長發(fā)育過程中，直至出現(xiàn)球狀體的大耳幼體后期，花刺參幼體對餌料數(shù)量、質(zhì)量與水環(huán)境要求均較高[24]。樽形幼體至五觸手幼體期間，是海參由浮游狀態(tài)轉(zhuǎn)向附著狀態(tài)、由濾食轉(zhuǎn)向舔舐的關(guān)鍵時期，是苗種培育中的瓶頸，此時若幼體營養(yǎng)尚未得到加強則幼體容易發(fā)生大量死亡。因此附著基的投放時間，苗種的營養(yǎng)加強等均為防止花刺參幼體大量死亡的關(guān)鍵因素。

海參催產(chǎn)及苗種培育研究已有悠久歷史且較為成功，日本對仿刺參的研究已超過120年[25-26]，中國對仿刺參的研究也有較大的進(jìn)展[27-28]。在印度，James等[29]對白底輻肛參催產(chǎn)及發(fā)育做了相關(guān)研究。Hamel等[30]研究了Psolusfabricii的配子形成及其產(chǎn)卵機制。Mayurama[31]報道了玉足海參(H.leucospilota)和H.paradis卵母細(xì)胞的人工刺激誘導(dǎo)及幼體發(fā)育過程，Mercier等[32]于厄瓜多爾飼養(yǎng)暗色刺參取得成功。但目前，對于花刺參幼體育苗尚且處于探索階段，本研究對于花刺參胚胎發(fā)育的觀察研究，為花刺參人工繁育研究提供參考資料。

[1] 王曉華. 花刺參活性成分研究[D]. 廈門：第二軍醫(yī)大學(xué)，2006.

[2] Conand C. Ecology and reproductive biology ofStichopusvariegatusan Indo-Pacific coral reef sea cucumber (Echinodermata:Holothuroidea) [J]. Bulletin of Marine Science， 1993, 52(3):970-981.

[3] Tehranifard A, Uryan S, Vosoghi G. Reproductive cycle ofStichopusherrmannifrom Kish Island, Iran[J]. SPC Beche-de-Mer Information Bulletin, 2006(24):22-27.

[4] Deepa R P, Bijukumar A. New records of the sea cucumbersHolothuria(Semperothuria)imitansLudwig andStichopusherrmanniSemper (Echinodermata:Holothuroidea) from the southwestern coast of India [J]. Journal of Threatened Taxa, 2010, 2(2):712-715.

[5] Eriksson H, Thorne B V, Byrne M. Population metrics in protected commercial sea cucumber populations (curryfish:Stichopusherrmanni) on One Tree Reef, Great Barrier Reef[J]. Marine Ecology Progress, 2013, 473(1):225-234.

[6] Eriksson H,Fabricius-Dyg J, Lichtenberg M, et al. Biology of a high-density population ofStichopusherrmanniat One Tree Reef, Great Barrier Reef, Australia[J]. SPC Beche-de-mer Information Bulletin, 2010(30):41-45.

[7] 楊學(xué)明，張立，李有寧. 南方糙海參的人工催產(chǎn)與育苗初步試驗[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，2011，7(1)：39-44.

[8] 嚴(yán)俊賢，王世鋒，馮永勤，等．糙海參胚胎和幼體發(fā)育的形態(tài)觀察[J]. 水產(chǎn)學(xué)報，2012，36(7)：1073-1080.

[9] 姜松，范嗣剛，溫為庚，等. 微生態(tài)制劑對糙海參生長、消化酶活性及水質(zhì)的影響[J]. 海洋漁業(yè)，2014，36(4)：335-341.

[10] 王華亭，魏芳，左希宏，等. 復(fù)方花刺參黏多糖對血管損傷后再狹窄家兔血管內(nèi)膜增殖與凋亡的影響[J]. 疑難病雜志，2013，12(3)：293-296.

[11] 王遠(yuǎn)紅，于明明，王冬燕，等. 花刺參、梅花參和綠刺參營養(yǎng)成分分析[J]. 營養(yǎng)學(xué)報，2010，32(4)：397-398.

[12] 陳言峰，胡超群，任春華. 單一或二元的凡納濱對蝦新鮮養(yǎng)殖廢物用于花刺參養(yǎng)殖的研究[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，2014，10(1)：1-8.

[13] 姚雪梅. 熱帶海參在我國南方沿海地區(qū)的養(yǎng)殖前景[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，2004(4)：2-5.

[14] 孫新明，代遠(yuǎn)玲，孫弋．體外授精過程中多精受精發(fā)生機制[J]. 井岡山學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，28(6)：76-79.

[15] 樊其昶，白書農(nóng)．發(fā)育生物學(xué)原理[M]. 北京：高等教育出版社，2002：321-323.

[16] 龐振國．刺參的性腺發(fā)育及受精細(xì)胞學(xué)研究[D]. 青島：中國海洋大學(xué)，2006.

[17] 譚杰，孫慧玲，高菲．刺參受精及早期胚胎發(fā)育過程的細(xì)胞學(xué)觀察[J]. 水產(chǎn)學(xué)報，2012，36(2)：272-277.

[18] Dautov S. Structure and properties of hyaline spheres in holothuroid larvae[J]. Invertebrate Reproduction and Development, 1997, 32(2):155-161.

[19] Ramofafia C, Byrne M, Battaglene S C. Development of three commercial sea cucumbers,Holothuriascabra,H.fuscogilvaandActinopygamauritiana:larval structure and growth[J]. Marine and Freshwater Research, 2003, 54(5):657-667.

[20] Hu C Q, Li H P, Xia J J, et al. Spawning, larval development and juvenile growth of the sea cucumberStichopushorrens[J]. Aquaculture, 2013, 404/405 (10):47-54.

[21] Hamel J F, Hidalgo R Y, Mercierl A. Larval development and juvenile growth of the Galapagos sea cucumberIsostichopusfuscus[J]. SPC Beche-de-mer Information Bulletin, 2003(18):3-8.

[22] Hu C Q ,Xu Y H, Wen J. Larval development and juvenile growth of the sea cucumberStichopussp.(curry fish)[J]. Aquaculture, 2010, 300(1):73-79.

[23] 嚴(yán)俊賢. 六種南海海參的系統(tǒng)發(fā)育與糙海參和花刺參的胚胎與幼體發(fā)育研究[D]. ?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2012.

[24] Morgan A D. Assessment of egg and larval quality during hatchery production of the temperate sea cumber,Australostichopusmollis(Levin)[J]. Journal of the World Auaculture Sciety, 2009, 40(5):629-642.

[25] Inaba D. Artificial rearing of sea cucumber[J]. Suisen Kenkyushi, 1937, 35(2):241-246.

[26] Imai I,Inaba D I, Sato R, et al. The artificial rearing of the transparent flagellate larvae ofStichopusjaponicus[J]. Tohoku Daigaku Nogakuhu Kenkyo Iho, 1950, 2(2):269-277.

[27] 安振華，董云偉，紀(jì)婷婷. 日周期性循環(huán)變溫對刺參耗氧率和排氨率的影響[J]. 海洋漁業(yè)，2013，35(1)：59-64.

[28] 吳志宏，劉天紅，孫元芹，等. 海星棘皮作為仿刺參飼料添加成分的可行性[J]. 海洋漁業(yè)，2015，37(1)：45-51.

[29] James D B,Kathirvel M, Ramdoss K, et al. The spawning of the holothurian,Actinopygamauritiana(Quoy and Gaimard) on board FORV Sagar Sampada[J]. Journal of the Marine Biological Association of India, 1993, 35(1/2):220-221.

[30] Hamel J F,Himmelman J H, Dufrense L. Gametogenesis and spawning of sea cucumber,Psolusfabricii(Duben and Koren)[J]. Biological Bulletin, 1993(184):125-143.

[31] Mayurama Y K. Artificial induction of oocyte maturation and development in sea cucumbers,HolothurialeucospilotaandHolothuriaparadis[J]. Biological Bulletin, 1980(158):339-348.

[32] Mercier A, Hidalgo R Y, Hamel J F. Aquaculture of the Galapogos sea cucumber,Isostichopusfuscus[G]∥Lovatelli A,Conand C, Purcell S, et al. Advances in Sea Cucumber Aquaculture and Management， Rome:FAO，2004：347-358.

EmbryonicandLarvalDevelopmentofSeaCucumberStichopusherrmanni

WANG Huaihong1, YAN Junxian2,3, FENG Yongqin1, FANG Zaiguang1, WANG Shifeng1, ZHOU Yongcan1, SHU Peijun1

( 1.Key Laboratory for Tropical Biology Resources, Ministry of Education, Key Laboratory of Tropical Aquatic Biotechnology of Hainan Province, College of Ocean, Hainan University, Haikou 570228, China; 2.Tropical Fishery R & D Center, South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Sanya 572018, China; 3.Key Laboratory of South China Sea Fishery Resources Exploitation & Utilization, Ministry of Agriculture, South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300, China )

In order to enhance the seeding technique of sea cucumberStichopusherrmanni, the embryonic and larval development of the sea cucumber were observed and described. Spawning of sea cucumber was conducted by open-air exposure followed by flow-through filtered seawater stimulation. The results showed that the larvae were bred in indoor cement tanks at water temperature of 27—30 ℃ and a salinity of 33.0—35.0. The embryos developed into blastaea by 5 hours, into the rotating blastaea stage by 7 hours and into the archenteron stage by 9 hours. The embryos were hatched in 31 hours, and the larvae were grew and developed into the doliolaria stage in 10 days, and early juveniles were observed 20 days after fertilization. In the development, if was found that the health of the larvae was involved in the development of axohydrocoel and stomach. In other word, the better development of axohydrocoel and stomach were, the healthier larva was, which was benefit for the metamorphosis and survival.

Stichopusherrmanni(S.variegatus); embryo; larva; development

10.16378/j.cnki.1003-1111.2017.05.011

2016-09-02；

2016-11-28.

農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金資助項目(2014GB2E200128)；國家海洋公益性行業(yè)科研專項(201405020-4)；海南省應(yīng)用技術(shù)研發(fā)與示范推廣資助專項(ZDXM2014022)；廣東省海洋經(jīng)濟創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范專項(GD2012-A01-002).

王懷洪(1991-)，男，碩士研究生；研究方向：海水苗種繁育. E-mail：whh0419@126.com.通訊作者：嚴(yán)俊賢(1987-)，男，助理研究員；研究方向：熱帶海洋苗種繁育. E-mail：yanjunxianjjj@163.com.

S968.9

A

1003-1111(2017)05-0606-06