HPV E6/E7 mRNA與HPV—DNA檢測(cè)技術(shù)在宮頸病變篩查中的診斷效度比較

沈麗蕊　游平弟　毛瑛玉　王海月　吳秋珍　韋翠花

【摘要】 目的：比較HPV E6/E7 mRNA與HPV-DNA兩種檢測(cè)技術(shù)在宮頸病變篩查中的臨床效度。方法：回顧性分析筆者所在醫(yī)院婦產(chǎn)科門診在筆者所在科行HPV檢測(cè)并行組織活檢病理學(xué)檢查的患者826例，其中HPV E6/E7 mRNA組420例，HPV-DNA組406例，比較兩組方法在篩查CIN1及以上病變的陽性率、靈敏度、特異度。結(jié)果：兩種方法在篩查CIN1及以上病變的陽性率的效果相當(dāng)，兩組間陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)組的靈敏度（96.1%）高于HPV-DNA組（90.9%），特異度（89.4%）明顯高于HPV-DNA組（71.4%），兩組間靈敏度及特異度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：HPV E6/E7 mRNA作為一種新型的檢測(cè)技術(shù)，其假陽性率低，結(jié)果更靠性切實(shí)，更能精準(zhǔn)地篩查宮頸癌前病變，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)； HPV-DNA檢測(cè)； 宮頸癌前病變； 效度

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.29.037 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2017）29-0075-03

The Diagnostic Validity of HPV E6/E7 mRNA and HPV-DNA Testing in Screening of Cervical Lesions/SHEN Li-rui，YOU Ping-di，MAO Ying-yu，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2017，15（29）：75-77

【Abstract】 Objective：To compare the clinical validity of HPV E6/E7 mRNA and HPV-DNA in screening of cervical lesions.Method：Regression analysis outpatient obstetrics and gynecology hospital in our department of HPV testing in parallel biopsy pathology examination of 826 cases，including HPV E6/E7 mRNA group 420 cases，HPV DNA-group 406 examples.The positive rate，sensitivity and specificity of the two groups were compared in the screening of CIN1 and above lesions.Result：The effect of two methods on the screening of the positive rate of CIN1 and above lesions was comparable，the positive rate comparison between the two groups had no statistical significance（P>0.05），and HPV E6/E7 mRNA detection sensitivity（96.1%） than HPV-DNA group（90.9%），specific degrees（89.4%） were significantly higher than those of HPV-DNA group（71.4%），sensitivity and specific comparison between the two groups， the significant difference（P<0.05）.Conclusion：HPV E6/E7 mRNA as a new kind of detection technology，has low false positive rate，and results in more sexual and accurate screening of precancerous lesions，which is worthy of clinical application.

【Key words】 HPV E6/E7 mRNA detection； HPV-DNA testing； Precancerous lesion； Validity

First-authors address：The Affiliated Mindong Hospital of Fujian Medical University，F(xiàn)uan 355000，China

宮頸癌是女性婦科疾病中最常見惡性腫瘤疾病之一，其發(fā)病率高居第二位[1]，給女性身心健康帶來極大威脅。對(duì)宮頸癌前病變進(jìn)行準(zhǔn)確的早期篩查及合理地干預(yù)是降低宮頸癌發(fā)生率的有效方法。因而對(duì)其進(jìn)行早期篩查需要更有效的篩查技術(shù)。目前研究表明，高危型HPV感染與宮頸癌密切相關(guān)[2-3]，而HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)作為一種宮頸癌前病變?cè)缙诤Y查的新型技術(shù)，是否更適合于宮頸癌前病變的初篩手段仍有待于進(jìn)一步研究，故本研究回顧性分析閩東地區(qū)826例宮頸病變患者的資料，比較兩組檢測(cè)方法在宮頸癌病變?cè)缙诤Y查中的臨床診斷效度。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究回顧性搜集筆者所在醫(yī)院2014年8月-2017年1月在閩東地區(qū)婦科門診就診并行HPV E6/E7 mRNA及HPV-DNA檢測(cè)，并有行組織病理學(xué)檢查及診斷結(jié)論的826例患者，年齡20～60歲，平均（39.5±9.1）歲，不包括妊娠患者，將826例患者分為HPV E6/E7 mNRA組420例，年齡23～55歲，平均（39.05±10.10）歲及HPV-DNA組406例，年齡25～58歲，平均（40.02±9.30）歲。本研究收集患者的年齡、吸煙情況、飲酒情況、分娩次數(shù)（≥2次）、人流次數(shù)（≥1次）、有性生活3年以上等資料，并對(duì)以上資料進(jìn)行比較，兩組患者年齡、吸煙情況、飲酒情況等基本資料間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。endprint

1.2 納入、排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）HPV E6/E7 mRNA、HPV-DNA檢測(cè)及陰道鏡下宮頸活檢均在筆者所在醫(yī)院進(jìn)行；（2）無子宮切除史、宮頸手術(shù)史、盆腔放化療史及HPV感染治療史；（3）無臨床妊娠癥狀或妊娠結(jié)束8周以上者。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）病例資料完整低于80%；（2）月經(jīng)期、嚴(yán)重內(nèi)外科疾病或無法配合調(diào)查者；（3）既往有宮頸局部不明腫瘤病史或?qū)m頸癌史或標(biāo)本量過少或標(biāo)本不合格者。

1.3 方法

1.3.1 樣本采取 按照知情同意原則，患者須被告知并自愿接受檢查，患者行HPV E6/E7 mRNA及HPV-DNA檢測(cè)需符合以下條件：檢查前3 d內(nèi)避免行陰道鏡檢查及放置陰道內(nèi)栓劑；檢查前24 h內(nèi)避免性生活；檢查者應(yīng)在非月經(jīng)期內(nèi)進(jìn)行。宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本均由有經(jīng)驗(yàn)的婦產(chǎn)科醫(yī)師采集的。將宮頸刷緊貼宮頸口黏膜，沿著順時(shí)針方向用宮頸刷旋轉(zhuǎn)6～8圈，然后將宮頸刷放入細(xì)胞保存液中充分漂洗后丟棄，裝入有專用收集瓶?jī)?nèi)，旋緊瓶蓋，寫好患者姓名及編號(hào)備用，放置4 ℃冰箱保存待檢。

1.3.2 檢測(cè)方法 HPV-DNA檢測(cè)，應(yīng)用HPV-DNA專用試劑盒進(jìn)行分型檢測(cè)，將細(xì)胞保存液中HPV提取后進(jìn)行PCR擴(kuò)增和導(dǎo)流雜交，所有步驟均嚴(yán)格按照操作手冊(cè)進(jìn)行檢測(cè)；另外E6/E7 mRNA檢測(cè)采用Gen-Probe Technology and the PANTHER System進(jìn)行檢測(cè)。將HPV保存液中的HPV提取后采用E6/E7 mRNA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果為光子數(shù)，利用計(jì)算機(jī)軟件判斷結(jié)果，低風(fēng)險(xiǎn)（<4000拷貝）；中度風(fēng)險(xiǎn)（4000～10 000拷貝）；高度風(fēng)險(xiǎn)（>10 000拷貝），將低風(fēng)險(xiǎn)以上的病例定為陽性。

1.3.3 其他 所有患者均用陰道鏡下多點(diǎn)活檢，然后進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，然后根據(jù)病理結(jié)果進(jìn)行分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)本研究臨床資料的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 18.0系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用字2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HPV E6/E7 mRNA組及HPV-DNA組對(duì)CIN1及以上類型診斷的陽性率分別為75.9%及73.1%。，兩組間陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。從方法學(xué)方面比較，HPV E6/E7 mRNA組的靈敏度為96.1%，特異度為89.4%；而HPV-DNA組靈敏度為90.9%，特異度為71.4%；與HPV-DNA組相比較，HPV E6/E7 mRNA組的靈敏度及特異度更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；另外HPV E6/E7 mRNA組假陽性率明顯低于HPV-DNA組，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2和表3。

3 討論

目前宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)中最容易發(fā)生病變的腫瘤，其發(fā)病率高居第二位，對(duì)女性身心健康帶來極大威脅，對(duì)社會(huì)生活帶來嚴(yán)重負(fù)擔(dān)，根據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，在美國(guó)14～60歲的女性當(dāng)中有2900萬患者感染HPV，且超過80%的女性在50歲前有關(guān)獲得感染機(jī)會(huì)[4]。另外大量資料研究顯示，宮頸疾病發(fā)生發(fā)展與HPV感染密切相關(guān)[5]。因此宮頸疾病發(fā)病率雖然較高，但是可以通過預(yù)防及早期診斷篩查來降低其發(fā)生率，隨著人們對(duì)宮頸疾病認(rèn)識(shí)研究不斷深入，通過阻斷宮頸上皮內(nèi)瘤樣變向?qū)m頸癌發(fā)展的過程以降低宮頸癌發(fā)病率已經(jīng)取得不錯(cuò)效果，那么如何通過一種切實(shí)可行的技術(shù)手段來早期發(fā)現(xiàn)癌前病變，以提高診斷陽性率，同時(shí)降低漏診概率，這是業(yè)內(nèi)研究及關(guān)注焦點(diǎn)。

有研究顯示，接近90%CIN患者多有HPV感染，大約20%有性生活婦女感染HPV，如果在吸煙、性傳播疾病等因素作用下，HPV持續(xù)感染能夠誘使宮頸上皮發(fā)生內(nèi)瘤變甚至癌變[6]。但Crosbie等[7-8]表示其感染多不能持久，且90%以上的感染均是一過性，?？勺匀幌硕话榕R床癥狀。本研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)技術(shù)比起HPV-DNA技術(shù)有更高臨床敏感性（P<0.05），可實(shí)現(xiàn)對(duì)CIN2等高級(jí)別癌前病變檢出，且其特異性明顯高于HPV-DNA技術(shù)（P<0.05），大大地減少“假陽性”結(jié)果出現(xiàn)概率，也由此更大程度減少給患者帶來心理負(fù)擔(dān)等不必要麻煩。另外單項(xiàng)HPV-DNA檢測(cè)的靈敏度偏低，與HPV E6/E7 mRNA技術(shù)相比，漏診率高（P<0.05），不適于單獨(dú)應(yīng)用宮頸癌前病變篩查，故當(dāng)前更推薦兩種檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，這與相關(guān)臨床研究結(jié)果顯示一致[9]。

大量研究顯示，高危型HPV病毒存在，不一定會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變，只有大量HPV病毒被持續(xù)轉(zhuǎn)錄成E6/E7 mRNA時(shí)，才能大量表達(dá)癌蛋白，誘發(fā)細(xì)胞癌變的風(fēng)險(xiǎn)成倍增加[10-11]。由此可見E6/E7 mRNA是病毒兩個(gè)致癌基因“活躍程度”的重要指標(biāo)，其含量可以明確地反應(yīng)致癌基因的活動(dòng)程度，可以更直觀的評(píng)估宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及評(píng)估預(yù)后[12-13]。另外本研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)技術(shù)有更高特異性及更少假陽性，因此，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)作為一種新型技術(shù)，能更加精準(zhǔn)地篩查病變，有效降低一過性感染率檢出，對(duì)于宮頸癌前病變的篩查具有重要臨床意義，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] Yang Y，Ren J，Zhang Q.Distribution of human papilloma virus type 16E/E7 gene mutation in cervical precanceror cancer ：a case control study in Guizhou Province，China[J].J MedVinrol，2016，88（2）：345-350.endprint

[2] Goldberg R M，Meropol N J，Tabernero J，et al.Accomplishments in 2008 in the treatment of advanced metastatic colorectal cancer[J].Gastointest Cancer Res，2009，3（5supplement2）：s23-s27.

[3] Yilmazel G，Duman N B.Knowledge attitudes and beliefs about cervical cancer and human papilloma virus vaccination with related factors in Turkish university students[J].Asian PacJ Cancer Prev，2014，15（8）：3699-3704.

[4]俞劍敏，李海川.基因第二代雜交捕獲技術(shù)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用[J]，中國(guó)藥物與臨床，2009，9（1）：46-48.

[5] Schwarz J K，Siegel B A，Dehcloshti F，et al.Wetabolic response on post-therapy FDG-PET predicts patterns of failure after radiotherapy for cervical cancer[J].Internationl Journal of Radiaation Oncology ，Biology，Physics，2012，83（1）：185-190.

[6] Bosch F X，Broker T R，F(xiàn)orman D，et al.Comprehensive control of human papillomavinrus infections and related diseases[J].Vaccine，2013，31（7）：H1-H31.

[7] Crosbie E J，Einstein M H，F(xiàn)ranceschi S，et al.Human papillomavirus and cervical cancer[J].Lancet，2013，382（9895）：889-899.

[8] TAy S K，Lin L E，Goh R C.Detection Rate of High-Grade Cervical Neoplasia and Cost-Effectiveness of High-Risk Human Papillomavirus Genotyping with Reflex Liquid-based Cytology in Cervical Cancer Screening[J].Ann Acad Med Singapore，2017，46（7）：267-273.

[9]畢雪玲，張福梅.液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)聯(lián)合人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)在宮頸病變中的應(yīng)用價(jià)值評(píng)估[J].中國(guó)性科學(xué)，2013，22（8）：28-30.

[10] Lu X，Lin M.Multiple-integratinos of HPV16 genome and altered transcription of viral oncngenes dan cellular genes are associated weith the development of cerveical cancer[J].Plos One，2014，9（7）：75-88.

[11] Gustinucci D，Giorgi Rossi P，Cesarini E，et al.Use of Cytology，E6/E7 mRNA，and p16INK4a-Ki-67 to Define the Management of Human Papillomavirus（HPV）-Positive Women in Cervical Cancer Screening[J].Am J Clin Pathol，2016，145（1）：35-45.

[12] Hovland S，Muller S，Skomedal H，et al.E6/E7mRNA expression analysis a test for the objective assessment of cervical adenocarcinoma in clinical prognostic procedure[J].Int J Oncol，2012，36（6）：1533-1539.

[13] Argyri E，Tsimplaki E，Daskalopoulou D，et al.E6/E7 mRNA expression of high-risk HPV types in 849 Greek women[J].Anticancer Res，2013，33（9）：4007-4011.

（收稿日期：2017-06-11）endprint