快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

張陽

摘要：近年來，食品安全問題日漸嚴(yán)峻，人們對(duì)食品安全檢測(cè)的要求也越來越高，微生物污染問題是食品安全中很重要的一部分，如何讓微生物檢測(cè)在實(shí)踐中獲得準(zhǔn)確度高的結(jié)果，并且實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)成了人們關(guān)注的問題?？焖贆z測(cè)片的出現(xiàn)為我們提供了檢測(cè)新思路，本文將對(duì)快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用做個(gè)簡單概括。

關(guān)鍵詞：快速檢測(cè)片；食品微生物檢測(cè)

一、快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)

第一，快速檢測(cè)片可以實(shí)現(xiàn)少樣檢測(cè)，相較于傳統(tǒng)方法而言，快速檢測(cè)片不再需要繁雜的檢測(cè)過程---不斷按順序加入試劑，需要的檢測(cè)玻璃器具少，這樣就減少了對(duì)器具的清洗消毒和保存等繁復(fù)的工作?？焖贆z測(cè)片體型小、對(duì)保存條件也不嚴(yán)苛，利于市場運(yùn)輸，也節(jié)省了人力物力財(cái)力?？焖贆z測(cè)片檢測(cè)后不會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生二次污染，沒有試驗(yàn)廢液或廢渣。與其他檢測(cè)方法相比，快速檢測(cè)法不僅適用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，也同樣可以用在戶外或生產(chǎn)現(xiàn)場多種環(huán)境中使用。

第二，快速檢測(cè)片檢測(cè)時(shí)，取樣和接種工作幾乎無間隔交替進(jìn)行，這樣避免了不必要的微生物污染，避免接種時(shí)間過長出現(xiàn)微生物大量繁殖對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成大的誤差，這樣使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確。

第三，傳統(tǒng)檢測(cè)方法檢測(cè)速度較慢，而且對(duì)檢測(cè)條件也有較高要求，一般的小企業(yè)和基層單位不具備這樣的檢測(cè)條件，所以很難開展檢測(cè)工作，或者即便開始了檢測(cè)工作也難以達(dá)到既定的檢測(cè)效果?？焖贆z測(cè)片的檢測(cè)時(shí)間被大大縮短，而且用快速檢測(cè)法與傳統(tǒng)方法檢測(cè)金黃色葡萄球菌、霉菌酵母菌、大腸桿菌等的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，快速檢測(cè)法的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確有效，說明檢測(cè)片法的確可以通過縮短接種時(shí)間而防止微生物繁殖，從而達(dá)到優(yōu)良的檢測(cè)屬性。

二、在食品微生物檢測(cè)中較為常見的測(cè)試片[2]

1.以濾紙為載體的檢測(cè)片

以濾紙為載體的檢測(cè)片是目前市面上最常見也是使用最多的一種，濾紙要選白色、密度分布均勻、無毒且吸附能力合適的作為檢測(cè)的載體。

菌落總數(shù)檢測(cè)片的檢測(cè)是利用氯化三苯四氮唑的氧化還原性，它在接受氫后可以形成不溶水的紅色產(chǎn)物，濾紙上的紅色點(diǎn)狀物的多少即為細(xì)菌總數(shù)。但由于濾紙纖維較大，所以部分菌株會(huì)在纖維縫隙中生長，所以檢測(cè)結(jié)果會(huì)比實(shí)際結(jié)果小。

大腸桿菌檢測(cè)片的檢測(cè)原理同樣也是氯化三苯四氮唑的氧化還原性，以及指示劑的顯色，大腸桿菌生長時(shí)產(chǎn)生的酶可以將氯化三苯四氮唑還原生成不溶水的物質(zhì)，即紅色菌落；細(xì)菌分解代謝產(chǎn)酸，使得指示劑變黃。所以結(jié)果如果是在黃色背景上有紅色菌落或者紅色菌落有黃色暈圈，即可顯示為陽性；反之為陰性。

大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法通過在檢測(cè)片上構(gòu)建一個(gè)理想化的酶反應(yīng)系統(tǒng)，加入待測(cè)菌所需營養(yǎng)物質(zhì)、酶促底物以及抑制雜菌生長的成分，檢測(cè)微生物產(chǎn)生的相關(guān)酶的活性來判斷菌的數(shù)量。

2.以Petrifilm為載體的檢測(cè)片

由美國3M公司發(fā)明的Petrifilm的檢測(cè)片載體，是兩層薄膜組成，上層薄膜為聚丙烯薄膜，下層為有網(wǎng)格且覆蓋有培養(yǎng)基的聚乙烯薄膜，培養(yǎng)基中含有微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)和試樣所需要的試劑，兩層薄膜通過一種特殊的凝膠劑連接。用該P(yáng)etrifilm作為載體的檢測(cè)片檢測(cè)待測(cè)物時(shí)，不需要再培養(yǎng)增菌，直接將檢測(cè)片放入適宜的環(huán)境中一定時(shí)間，既可計(jì)數(shù)。

細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)只需要將樣品地道檢測(cè)片中央，用壓板輕壓，是樣品均勻布滿培養(yǎng)基，直接培養(yǎng)既可計(jì)數(shù)，該方法也可以用來做乳酸菌數(shù)量的檢測(cè)。

霉菌、酵母菌檢測(cè)片與細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)有所不同的地方在于，需要在培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)來判斷是什么菌落，酵母菌菌落通常為小菌落，菌落邊緣清晰，顏色通常為灰色或藍(lán)綠色，菌落凸起，而霉菌菌落一般為大菌落，菌落邊緣模糊不清，顏色不均，中間顏色暗，菌落為扁平狀。

大腸菌群、大腸桿菌檢測(cè)片的檢測(cè)原理是利用大腸桿菌能產(chǎn)生葡萄糖苷酸酶，檢測(cè)片中含有葡萄糖苷酶指示劑，若樣品中含有大腸桿菌，指示劑會(huì)顯示為藍(lán)色圍繞在菌落周圍，因?yàn)楸砻娓采w的膠膜會(huì)將乳糖代謝產(chǎn)生的二氧化碳圈住，形成一個(gè)個(gè)氣泡和菌落；而大腸菌群產(chǎn)酸，會(huì)使指示劑變紅，因此根據(jù)菌落顏色即可一次分辨出大腸桿菌和大腸菌落。

金黃色葡萄球菌檢測(cè)片中的培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌有很高的選擇性，培養(yǎng)后可看到暗紫色菌落。如發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可利用金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生耐高溫的脫氧核糖核酸酶的特性，對(duì)可疑菌落進(jìn)行高溫處理，如果是金黃色葡萄球菌則會(huì)顯示粉紅色環(huán)。

三、快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)的研究進(jìn)展

近幾年來，雖然快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)上有很大的成就和進(jìn)步，但仍然存在許多缺點(diǎn)等待解決。比如濾紙縫隙過大，用濾紙作為載體時(shí)，濾孔中的菌落與濾紙背面的菌落無法計(jì)數(shù)；濾紙持水力差，難以維持微生物生長所需要的濕度，濾紙上營養(yǎng)物質(zhì)不能均勻分布，所以菌落生長也會(huì)不均，造成計(jì)數(shù)難度以及最后結(jié)果的不準(zhǔn)確。Petrifilm載體檢測(cè)片面積小，菌數(shù)量較多時(shí)難以計(jì)數(shù)，兩層薄膜在產(chǎn)氣產(chǎn)粘液過多是會(huì)影響菌落的生長，還有就是如果人力條件下為能在培養(yǎng)前將樣品擠壓均勻，樣品會(huì)從邊緣漏出，影響最后結(jié)果[2]。

因此為了彌補(bǔ)快速檢測(cè)片的缺點(diǎn)，我們將快速檢查法與其他方法想結(jié)合，做到取長補(bǔ)短、互為補(bǔ)充的檢測(cè)方法。如果待測(cè)物DNA中有目的基因，需要結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）對(duì)目的基因進(jìn)行復(fù)制，該方法檢測(cè)結(jié)果精確度極高[1]。

參考文獻(xiàn)：

[1]張瑛.快速檢測(cè)片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（13）：62-63.

[2]吳清平，孫永，蔡芷荷，郭偉鵬.快速測(cè)試片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006（05）：635-637.