氣相色譜法測定蘇籽中的a—亞麻酸

胡穎+張觀鳳+蔣緯

摘 要： 該文采用agilent極性19091X-233 HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m× 0.320mm，0.25μm）色譜柱，以外標(biāo)法測定蘇籽中α-亞麻酸含量。正己烷抽提蘇籽中的α-亞麻酸，測定經(jīng)氫氧化鉀-甲醇皂化甲酯化后形成的α-亞麻酸甲酯的含量，直接得出蘇籽中α-亞麻酸的含量。結(jié)果表明，α-亞麻酸甲酯標(biāo)品的保留時間為22.785 min，α-亞麻酸甲酯的線性檢測范圍為0.01～10.00mg/mL，r=0.9981，方法回收率為96.1%～102.4%。

關(guān)鍵詞：蘇籽；α-亞麻酸；α-亞麻酸甲酯；氣相色譜法

中圖分類號 R286.0 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）22-0116-03

Abstract：α-Linolenate was extracted with n-hexane from perilla seed，and methylified with 0.8 mol/L KOH-methnoal solution.Then content of α-methyl linolenate，which could be translated to the content of α-linolenate，was quantified with gas chromatographyusing agilent 19091X-233 HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m × 0.320mm，0.25μm）.The retention time for α-methyl linolenate was 22.785 min.This method was appicable in a linear range of 0.01-10.00 mg/mL with the correlation coefficient at 0.9981 and the average recovery for α- linolenate at 96.1% ～102.4%.

Key words：Perilla seed；a-linolenic；α-methyl linolenate；Gas chromatography

紫蘇籽，又名蘇籽或穎子，含有豐富的脂肪和蛋白質(zhì)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的含有α-亞麻酸最多的植物物種[1-3]，油中α-亞麻酸含量占其總脂肪酸的60%左右[4]。α-亞麻酸為十八碳三烯酸，是大腦和神經(jīng)活動所必需的脂肪酸，人體自身不能合成，必須由食物供給，可在體內(nèi)酶的作用下經(jīng)肝臟的代謝生成EPA（血管清道夫）和DHA（腦黃金），具有顯著的藥理作用和營養(yǎng)價值，被稱為“21世紀(jì)綠色營養(yǎng)保健食品”[5-6]。此外，α-亞麻酸還具有抗炎癥、抗血栓、抗血凝、抗過敏、抗心率失調(diào)、降血脂、改善血管彈性、調(diào)節(jié)中央神經(jīng)系統(tǒng)等功能，在醫(yī)藥、保健品、食品等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景[7]。我們?nèi)粘ｏ嬍持凶钊狈Ρ匦柚舅崾铅?亞麻酸，我國醫(yī)學(xué)界和營養(yǎng)界專家紛紛呼吁國家立法，國家食品與營養(yǎng)發(fā)展戰(zhàn)略專家也正積極規(guī)劃，專項推廣補充α-亞麻酸[8]。

氣象色譜法因其分離時間短和分離效果好等特點，其應(yīng)用范圍也越來越廣[9]。但氣相色譜法在測定蘇籽中α-亞麻酸含量中相應(yīng)方法建立的相關(guān)報道較少。本研究旨在建立蘇籽中α-亞麻酸的氣相色譜分析方法，為今后蘇籽的進(jìn)一步研究提供一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 生蘇籽：市售；α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：科研sigmal2626；正己烷（色譜純）：科密歐化學(xué)試劑有限公司；甲醇（色譜純）、無水硫酸鈉（分析純）：成都科龍化工試劑廠；乙醚（分析純）：川東化工；氫氧化鉀（分析純）：艾科試劑。

1.2 儀器與設(shè)備 SKG1208型粉碎機：佛山艾特凱奇電氣有限公司；New Classic MS型電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；SG8200HPT型超聲波清洗儀：上海冠特超聲儀器有限公司；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠。氣象色譜儀：美國安捷倫科技有限公司。

1.3 方法與步驟

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 19091X-233HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m×0.320mm，0.25μm）。載氣為氮氣；檢測器為氫火焰離子化檢測器（FID）；進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測器溫度為270℃。氫氣：40mL/min；空氣：400mL/min；分流比：10∶1；進(jìn)樣量：1μL。恒流進(jìn)樣，流速：1mL/min，平均線速度：21cm/s。升溫程序：起始溫度90℃，7℃/min到190℃，3℃/min到215℃，保持10min，20℃/min到230℃后運行5min。

1.3.2 溶液的配制 0.8mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液：電子天平稱取0.448g氫氧化鉀溶于裝有適量甲醇的燒杯中，靜置室溫后將溶液轉(zhuǎn)移到10mL的容量瓶中，用甲醇定容。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)品的配制 精確稱取α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品 100.00mg，正己烷定容，分別配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.00mg/mL的α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于-20℃的冰箱中備用。

1.3.4 蘇籽油脂的甲酯化 氫氧化鉀-甲醇酯化法：用移液管吸取0.1mL脂肪酸置于10mL量瓶中，依次加入1mL乙醚-正己烷混合溶液（乙醚∶正己烷=2∶1）和1mL氫氧化鉀（0.8mol/L）-甲醇溶液，充分振蕩，靜置5min后加蒸餾水至刻度，靜置分層，吸上清液，加入少量無水硫酸鈉干燥過夜后，進(jìn)行上機檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜的定性與分離 采用1.3.1節(jié)的色譜柱和色譜條件，對蘇籽中的α-亞麻酸有很好的分離效果。采用保留時間對照法確定α-亞麻酸甲酯的位置。由圖1可見，α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間為22.785min，具有良好對稱峰型。endprint

2.2 線性范圍 分別將0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0mg/mL的α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按上述試驗條件進(jìn)樣，檢測結(jié)果見表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2所示。由表1可知，在α-亞麻酸甲酯在0.01～10.00mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。由圖2可知，α-亞麻酸甲酯在質(zhì)量濃度為0.01～10.00mg/mL時，r=0.9981，相關(guān)性良好。

2.3 精密度 樣品經(jīng)6次連續(xù)進(jìn)樣測得的結(jié)果分別為 150.4、143.4、144.6、142.5、145.7、145.8mg/g，RSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）為2.39%，說明儀器精密度良好。

2.4 加標(biāo)回收率 分別加入質(zhì)量濃度為10.00mg/mL的α-亞麻酸甲酯0.1、0.5、1mL于1g蘇籽樣品（α-亞麻酸含量為15.16mg/g）中，按超聲波輔助提取油脂再進(jìn)行甲酯化處理，最后得到添加質(zhì)量濃度分別為0.10、0.50、1.00 mg/mL的待測樣品，回收率見表2。由表2可知，加標(biāo)回收率為96.1%～102.4%，回收率平均值為100.1%。說明該法測定蘇籽α-亞麻酸含量準(zhǔn)確度較高，方法可行。

3 結(jié)論

采用氣相色譜外標(biāo)法測定蘇籽油中α-亞麻酸含量，α-亞麻酸甲酯的線性檢測范圍為0.01～10.00mg/mL，r=0.9981，方法平均回收率為100.1%。該法快速、準(zhǔn)確、可行，適用于蘇籽α-亞麻酸含量的測定。

蘇籽油中a-亞麻酸含量測定中，各種測定方法之間進(jìn)行比較的研究較少，尋找準(zhǔn)確、簡單、低價、快速測定的方法測定蘇籽內(nèi)a-亞麻酸含量對蘇籽的開發(fā)利用具有一定的意義。氣相色譜法具有分離時間短、分離性好、操作簡單實用、檢測快速準(zhǔn)確、成本低且可行性高等特點，適用于蘇籽中α-亞麻酸含量的測定。

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