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    ADVIA Centaur CP化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定丙戊酸藥物濃度的性能評(píng)價(jià)

    2017-12-06 02:06:30楊麗薇吳明德
    實(shí)用藥物與臨床 2017年11期
    關(guān)鍵詞:化學(xué)發(fā)光戊酸血藥濃度

    楊麗薇,吳明德,劉 敏

    ADVIACentaurCP化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定丙戊酸藥物濃度的性能評(píng)價(jià)

    楊麗薇,吳明德,劉 敏

    目的評(píng)價(jià)西門(mén)子全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀ADVIA Centaur CP對(duì)血清丙戊酸(VPA)的定量檢測(cè)性能。方法應(yīng)用該系統(tǒng)定量檢測(cè)VPA,并對(duì)其精密度、準(zhǔn)確度、功能靈敏度、特異性、相關(guān)性分析進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果直接化學(xué)發(fā)光法測(cè)定丙戊酸的高、中、低值樣本日內(nèi)精密度分別為2.74%、2.98%、4.48%,日間精密度分別為3.21%、4.00%、6.54%;高、中、低水平樣本的回收率分別為96.69%、97.43%、103.58%;功能靈敏度達(dá)到1.22 μg/mL;與ADVIA Centaur免疫系統(tǒng)比較具有很好的相關(guān)性,比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果r≥0.95,得到回歸方程:Y=0.987 2 X-1.090 5。結(jié)論該系統(tǒng)對(duì)定量檢測(cè)血清VPA濃度有較高的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異性,且快速簡(jiǎn)便,能夠達(dá)到臨床檢測(cè)要求的標(biāo)準(zhǔn)。

    化學(xué)發(fā)光免疫法;性能評(píng)價(jià);丙戊酸

    0 引言

    丙戊酸為一側(cè)鏈脂肪酸類(lèi)化合物,是臨床治療多種類(lèi)型癲癇的一線藥物,臨床應(yīng)用比較廣泛,也用于肌陣攣發(fā)作,全身性強(qiáng)直陣攣發(fā)作,單純及復(fù)發(fā)性和失神發(fā)作[1]。檢測(cè)服用該藥物患者體內(nèi)的血藥濃度是臨床調(diào)整劑量、評(píng)價(jià)療效、避免毒副作用和實(shí)施個(gè)體化治療的主要依據(jù)之一。由于患者服用劑量與血藥濃度之間的相關(guān)性較差,常規(guī)劑量給藥時(shí),血藥濃度測(cè)定值將有50%低于或高于常規(guī)治療范圍[2],因此,人體內(nèi)濃度測(cè)定方法的建立對(duì)于研究其藥物動(dòng)力學(xué)及藥物相互作用具有重要意義?;瘜W(xué)發(fā)光免疫法具有靈敏度高、重復(fù)性好、準(zhǔn)確、用血量少、簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn),適于臨床研究與普遍應(yīng)用。西門(mén)子全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)ADVIA Ceutaur CP是德國(guó)公司推出的,使用直接化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)免疫測(cè)定方法,對(duì)血藥濃度進(jìn)行檢測(cè)?;颊邩悠放c標(biāo)記試劑中吖啶酯標(biāo)記的衍生物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合固相試劑中的微磁顆粒共價(jià)結(jié)合的有限的鼠單克隆抗體,患者樣品中存在的濃度與系統(tǒng)檢測(cè)所得的相對(duì)光學(xué)信號(hào)單位(RLUs)數(shù)量呈反比。本研究中,我們根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)相關(guān)文件的要求,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際,對(duì)該檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定血清丙戊酸的性能進(jìn)行綜合驗(yàn)證及評(píng)價(jià)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 所用患者樣本均來(lái)自我院精神科門(mén)診及住院的正在服用藥物的患者,所有樣本采集時(shí)間為上午8∶00~9∶00,分離血清后-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.2 儀器與試劑 德國(guó)西門(mén)子ADVIA Centaur CP和西門(mén)子ADVIA Centaur全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套檢測(cè)試劑盒,校準(zhǔn)液批號(hào):C2861,均為原裝進(jìn)口;質(zhì)控品購(gòu)于伯樂(lè)公司生產(chǎn)的Lyphochek免疫分析質(zhì)控物,高、中、低3個(gè)水平的質(zhì)控品批號(hào)分別為:40311、40312、40313。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

    1.2 方法 所有實(shí)驗(yàn)步驟按儀器系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)和廠家工程師培訓(xùn)方法嚴(yán)格進(jìn)行,并遵守《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版中的相關(guān)規(guī)范與要求,對(duì)儀器進(jìn)行日常維護(hù)保養(yǎng),定期對(duì)曲線進(jìn)行校準(zhǔn),質(zhì)控品檢測(cè)均為在控。

    1.2.2 準(zhǔn)確度 采用回收試驗(yàn)方法[5],在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),選取低水平患者血清樣本1份12.5 μg/mL,分別與伯樂(lè)質(zhì)控品高值(105 μg/mL)、中值(75 μg/mL)、低值(33.5 μg/mL)等量混合,配制成高、中、低3個(gè)濃度的血清標(biāo)本,使混合后3個(gè)樣本濃度水平每份檢測(cè)3次,取平均值,測(cè)定其回收率。

    1.2.4 特異性 在丙戊酸為55.8~69.0 μg/mL的混合血清中加入安定(100 μg/mL)、氯硝安定(100 μg/mL)、苯比巴妥(750 μg/mL)、阿司匹林(1 000 μg/mL)化合物。加入后血清樣品的丙戊酸測(cè)定結(jié)果與未加入的配對(duì)樣品組進(jìn)行比較,這些化合物對(duì)丙戊酸的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性影響。

    1.2.5 相關(guān)性分析 參考EP9-A2[8]文件,每天隨機(jī)選擇10個(gè)新鮮患者樣本,對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)和保養(yǎng)校準(zhǔn)合格的情況下,2 h內(nèi)分別在西門(mén)子ADVIA Centaur CP化學(xué)發(fā)光儀和ADVIA Centau化學(xué)發(fā)光儀完成濃度的檢測(cè),每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次,連續(xù)5 d,以ADVIA Centau化學(xué)分析儀2次測(cè)定結(jié)果的均值為X軸,以ADVIA Centaur CP化學(xué)發(fā)光儀2次測(cè)定結(jié)果的均值為Y軸繪圖進(jìn)行方法比對(duì)。

    2 結(jié)果

    2.1 精密度試驗(yàn) 日內(nèi)和日間精密度結(jié)果見(jiàn)表1。丙戊酸高、中、低值樣本測(cè)定的CV均符合廠家提供的標(biāo)準(zhǔn)CV批內(nèi)、批間≤10%,精密度性能優(yōu)良。見(jiàn)表1。

    表1 丙戊酸精密度試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

    2.2 回收試驗(yàn) 添加3個(gè)水平丙戊酸的回收率分別為96.69%、97.68%、103.58%,回收率=回收量/添加量=(添加后的檢驗(yàn)值-添加前的檢驗(yàn)值)/添加量×100%。均在100%±10%范圍,符合該儀器的檢測(cè)要求。見(jiàn)表2。

    表2 ADVIA Centaur CP檢測(cè)VPA的回收試驗(yàn)

    表3 丙戊酸功能靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

    由表3可以看出,當(dāng)檢測(cè)濃度為1.22 μg/mL時(shí),其CV%最接近20%,因此,丙戊酸測(cè)定的功能靈敏度應(yīng)在1.22 μg/mL左右,與試劑商提供的1.0 μg/mL接近。

    2.4 特異性結(jié)果 在混合血清樣品中加入各濃度的化合物,應(yīng)用ADVIA Centaur CP儀測(cè)定丙戊酸的結(jié)果與未加入化合物組進(jìn)行比較,化合物對(duì)丙戊酸的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性影響(P≥0.05)。

    2.5 相關(guān)性分析結(jié)果 以ADVIA Centar 2次測(cè)定結(jié)果均值為參比,ADVIA Centaur CP 2次測(cè)定結(jié)果均值為比較得出回歸方程Y=0.987 2 X-1.090 5及相關(guān)系數(shù)r=0.993 4。ADVIA Centaur CP測(cè)定丙戊酸r≥0.95認(rèn)為X取值范圍合適,直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠,兩檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果間具有良好相關(guān)性[9],見(jiàn)圖1。

    圖1 相關(guān)性結(jié)果分析

    3 討論

    丙戊酸類(lèi)藥物是臨床上常用的廣譜一線抗癲癇藥物,其口服吸收迅速、完全[10],可單獨(dú)作用或與其他抗癲癇藥物聯(lián)合應(yīng)用來(lái)控制癲癇發(fā)作。其治療有效濃度范圍為50~100 μg/mL,若該藥在血清或血漿中的濃度過(guò)低,則不能維持癲癇的控制狀態(tài),若其在血清或血漿中的濃度過(guò)高,則增加發(fā)生毒性反應(yīng)的危險(xiǎn)。因藥物的代謝和排泄存在很大的個(gè)體差異,藥物的半衰期對(duì)特定的個(gè)體而言很難預(yù)期。由于治療窗窄、個(gè)體差異大、不良反應(yīng)和血藥濃度相關(guān),中毒癥狀與癲癇發(fā)作癥狀難以判斷[11],因此,為最大限度地發(fā)揮療效和避免不良反應(yīng),密切監(jiān)測(cè)血清或血漿中丙戊酸的濃度,對(duì)于正在進(jìn)行丙戊酸治療的患者是非常重要的。

    本研究應(yīng)用西門(mén)子ADVIA Centaur CP免疫化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)服用丙戊酸患者血清VPA,并對(duì)其分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià),從而為血清丙戊酸水平變化的準(zhǔn)確判斷以及將藥物濃度控制在理想范圍提供可靠的檢測(cè)方法。精密度是反映檢測(cè)系統(tǒng)整體性能的首要指標(biāo),也是進(jìn)行其他方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的前提[12]。西門(mén)子ADVIA Ceutaur CP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)進(jìn)行的競(jìng)爭(zhēng)免疫測(cè)定方法,該方法具有準(zhǔn)確性好、特異性高、操作簡(jiǎn)便快速、樣本用量少且不需預(yù)處理等優(yōu)點(diǎn)。試劑中的磁性顆粒均勻懸浮于整個(gè)反應(yīng)系統(tǒng),使反應(yīng)系統(tǒng)的特異結(jié)合能力增加,反應(yīng)效率提高,加強(qiáng)了化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的準(zhǔn)確性[13]。本研究結(jié)果表明,該系統(tǒng)精密度良好,高、中、低值樣本的日內(nèi)日間CV均小于10%,符合有關(guān)規(guī)定要求;高、中、低水平樣本的回收率分別為96.73%、97.68%、105.67%,均在可接受范圍(90%~110%)之內(nèi),說(shuō)明該儀器的回收率良好,同樣也反映了良好的準(zhǔn)確度[14];功能靈敏度應(yīng)達(dá)到1.22 μg/mL,完全能滿足臨床和科研的要求;r≥0.95說(shuō)明相關(guān)性好,檢測(cè)具有一定的可比性;采用的一次性Tip頭,不會(huì)造成樣品之間的交叉污染;由于該種方法簡(jiǎn)單、快速,樣本不需要前處理,無(wú)放射污染,且檢測(cè)項(xiàng)目覆蓋廣泛,在實(shí)際分析中有較好的應(yīng)用前景。

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    PerformanceevaluationofADVIACentaurCPchemiluminescenceimmunoassayforthedeterminationofvalproicacidconcentrationinserum

    YANG Li-wei,WU Ming-de,LIU Min

    (Clinical Laboratory,Zigong Psychiatric Mental Health Center,Zigong 643020,China)

    ObjectiveTo evaluate the performance of SIEMENS automatic chemiluminescence analyzer,ADVIA Centaur CP,for quantitative detection of serum valproic acid (VPA).MethodsThe VPA was quantitatively detected by this system,and the precision,accuracy,sensitivity,specificity and correlation analysis were evaluated.ResultsThe inter-day precision of direct chemiluminescence method for the determination of valproic acid in high-,middle-and low-level samples was 2.74%,2.98% and 4.48%,respectively,and intra-day precision was 3.21%,4.00%,and 6.54%,respectively.The recoveries of high-,middle-and low-level samples were 96.69%,97.43% and 103.58%,respectively.The functional sensitivity reached 1.22 μg/mL.Comparison of the two detective results of the ADVIA.Centaur immune system showed good correlation (r≥0.95),regression equation:Y=0.987 2 X-1.090 5.ConclusionThe system is rapid and simple with high accuracy,sensitivity and specificity for quantitative detection of serum VPA concentration,it can reach the standard of clinical detection requirements.

    Chemiluminescence immunoassay;Performance evaluation;Valproic acid

    2017-03-26

    四川省自貢市精神衛(wèi)生中心檢驗(yàn)科,四川 自貢 643020

    10.14053/j.cnki.ppcr.201711021

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