大孔吸附樹脂純化黑果枸杞中的原花青素

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(1.天津科技大學生物工程學院,天津 300457;2.齊魯工業(yè)大學生物工程學院,山東濟南 250353)

大孔吸附樹脂純化黑果枸杞中的原花青素

趙文娟1,宋揚2,楊洪江1,*

(1.天津科技大學生物工程學院,天津 300457;2.齊魯工業(yè)大學生物工程學院,山東濟南 250353)

采用大孔吸附樹脂對黑果枸杞中的原花青素粗提液進行純化。以吸附能力和解吸附能力為指標,考察了AB-8,D130,D101,HPD100,D101-1和聚酰胺6種樹脂對原花青素的純化效果;以解吸能力為指標,考察洗脫劑體積分數(shù)、洗脫流速對洗脫效果的影響。結果表明,以D101樹脂可用于黑果枸杞中原花青素的純化,靜態(tài)吸附以后,使用95%的乙醇,在2.5 BV/h的洗脫速度下,用4.0 BV進行洗脫,原花青素純度由31.33%提高至68.03%;通過乙酸乙酯萃取可制得低聚原花青素樣品,其平均聚合度由8.98降低至3.17,用HPLC方法可檢測到低聚物中含有兒茶素、表兒茶素、原花青素B2等重要的原花青素單體和低聚物,根據(jù)峰面積計算三種物質(zhì)的總含量達18.73%。

黑果枸杞,原花青素,大孔樹脂,純化

黑果枸杞(LyciumruthenicumMurr.)是茄科(Solanaceae)枸杞屬(Lycium)多年生植物,天然生長于我國西北荒漠區(qū),有極強的抗旱、抗寒、耐鹽堿特性[1]。黑果枸杞的果實中含有的原花青素高達1.426%～9.024%,遠高于黑果枸杞中的花青素含量0.069%～0.840%[2],此外其果實中還含有多糖、維生素等成分,素有“軟黃金”之稱[3]。原花青素(Proanthocyanidins)是一種由黃烷-3-醇單體縮合而成的聚多酚類物質(zhì),由不同數(shù)量的兒茶素或表兒茶素縮合而成。最簡單的原花青素是兒茶素或表兒茶素自身縮合或二者相互縮合而成的二聚體,此外還可以形成三聚體、四聚體等直至十聚體[4]。黃朝暉曾使用AB-8大孔吸附樹脂純化高粱中的原花青素,目前對黑果枸杞中原花青素的研究多集中在得率的提高、體內(nèi)和體外抗氧化性鑒定方面,對黑果枸杞中的原花青素進行純化的技術研究較少,文獻顯示,趙曉輝和邵赟[5-6]等人曾以黑果枸杞鮮果或果汁、濃縮汁為原料制備和分離黑果枸杞中的原花青素,其分離采用的是大孔樹脂和膜濾相結合的技術。本研究以黑果枸杞干果為原料對原花青素進行分離純化,在未來黑果枸杞種植區(qū)域廣泛化的趨勢下[7-8],便于黑果枸杞異地化和批量化下游處理。

表1 六種實驗樹脂的物理結構參數(shù)特性

大孔吸附樹脂是一類以丙酸酯和苯乙烯為單體,外加制孔劑與交聯(lián)劑形成的具有多孔骨架結構的有機高分子聚合物[9],具有選擇性好、吸附容量大、解吸條件溫和、再生簡便、成本低、使用壽命長等優(yōu)點,被廣泛應用于天然生物活性物質(zhì)的分離純化[10],尤其在多糖、多酚、天然色素等物質(zhì)的分離純化領域具有成熟的研究和應用基礎[11]。李綺麗[12]、張慧文[13]、劉景玲[14]等人均采用大孔樹脂吸附原理對蓮子皮、花生紅衣、大血藤中的原花青素進行純化,取得了理想的效果。不同類型的樹脂具有不同的極性、孔徑、比表面積,對原花青素的吸附和解吸附能力各不相同,且被吸附材料包含化合物的復雜性對樹脂吸附率也有很大影響。本研究在前期提高原花青素得率的研究基礎上,利用大孔樹脂吸附原理,通過考察吸附量、解吸量、洗脫效果等指標,對原花青素粗提物進行純化除雜,并測定各步驟所得樣品的平均聚合度,為進一步對不同聚合度的原花青素的分級純化打下了基礎。原花青素的活性受聚合度影響較大,一般而言聚合度越低,抗氧化活性越高。為了獲得純度更高的低聚體原花青素,使用乙酸乙酯對大孔樹脂吸附所得樣品進行萃取,便于今后研究過程中對低聚體原花青素的含量和抗氧化性進行檢測和評價[12]。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

黑果枸杞 新疆烏魯木齊市場,自然晾干后,避光存儲于4～10 ℃下的密封、干燥環(huán)境中;兒茶素標準品(CAS:154-23-4)(純度>99%)、原花青素B2標準品(CAS:29106-49-8)(純度>99%) 上海哈靈生物科技有限公司;表兒茶素標準品(CAS:490-46-0)(純度>99%) 天津尖峰天然產(chǎn)物研究開發(fā)有限公司;無水乙醇、甲醇、香草醛、葡萄糖、苯酚 均為分析純,國藥集團化學試劑有限公司;濃鹽酸、濃硫酸 分析純,萊陽經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)精細化工廠;大孔樹脂 天津浩聚樹脂科技有限公司;聚酰胺樹脂 浙江臺州市四甲生化塑化廠。

T6新世紀紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限公司;高速粉碎機 天津泰斯特儀器有限公司;RE-52AA旋轉蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長城科工貿(mào)有限公司;LC-10A型高效液相色譜儀(HPLC)、InertSustain系列C/N 5020-07346 C18色譜柱 島津企業(yè)管理(中國)有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1 制備原花青素粗提物 取黑果枸杞,用高速粉碎機將其粉碎至40目用于原花青素提取實驗。以1∶25 (g∶mL)的料液比加入體積分數(shù)為56%的乙醇,混勻,在46 ℃恒溫水浴中提取48 min,重復提取3次合并濾液[15],將濾液進行減壓濃縮后加入4倍體積的乙醇冷藏12 h,取上清液減壓濃縮至固形物含量達60%～65%并冷凍干燥,得到原花青素粗提物(LRPE)儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 原花青素的純化

1.2.2.1 樹脂預處理 向樹脂中加入高于樹脂層5～10 cm的95%乙醇,浸泡3～4 h,然后放凈浸泡液,為一次洗滌過程;反復洗滌至洗滌液加3倍水不渾濁為止,最后用純凈水充分淋洗至無乙醇氣味為止,備用。

1.2.2.2 篩選大孔樹脂 本實驗選擇3種非極性樹脂、2種弱極性樹脂和1種聚酰胺極性樹脂,利用靜態(tài)吸附和解吸附實驗考察它們對原花青素的吸附、解吸附能力,六種樹脂的物理結構參數(shù)特性如表1所示。

利用靜態(tài)吸附與解吸附,從D130、D101、HPD100、AB-8、D101-1、聚酰胺樹脂中篩選出最優(yōu)樹脂。分別稱取5.00 g預處理好的5種樹脂,置于250 mL磨口瓶中,分別加入100 mL原花青素含量為2.0 mg/mL的LRPE溶液,密封后置于恒溫搖床中,溫度調(diào)節(jié)至25 ℃,振蕩速度調(diào)節(jié)至60 r/min進行靜態(tài)吸附。靜態(tài)吸附15 h,每1.5 h測定被吸附溶液中殘留的原花青素含量直至不再降低,計算樹脂對原花青素的吸附量[14]。同時檢測并記錄吸附前后溶液中的多糖含量,并計算此過程中多糖的脫除量和脫除率。

吸附量(mg/g)=[(吸附前濃度-吸附結束的濃度)×溶液體積]/對脂質(zhì)量

多糖脫除量(mg/g)=[(吸附前多糖濃度-吸附結束多糖的濃度)×溶液體積]/樹脂質(zhì)量

多糖脫除率(%)=(吸附前多糖濃度-吸附結束多糖的濃度)/吸附前多糖濃度

將上述吸附飽和的樹脂重新置于磨口瓶中,加入體積分數(shù)為70%的乙醇50 mL,以60 r/min的速度充分振蕩使原花青素解吸附,解吸附6 h后,測定解吸溶液中的原花青素和多糖濃度,并計算原花青素的解吸量、解吸率。

表2 HPLC檢測黑果枸杞原花青素的梯度洗脫程序

解吸量(mg/g)=(解吸附后溶液中的原花青素濃度×溶液體積)/樹脂質(zhì)量

解吸率(%)=解吸量/吸附量

1.2.2.3 洗脫液體積分數(shù)的確定 以乙醇水溶液為洗脫液,采用動態(tài)洗脫法確定適宜的洗脫液濃度。用去離子水配制原花青素含量為2.0 mg/mL的LRPE溶液500 mL,稱取D101樹脂25 g浸泡于LRPE溶液中,在60 r/min振蕩速度、25 ℃的條件下進行靜態(tài)吸附15 h,使其充分吸附至飽和狀態(tài),即獲得吸附飽和的樹脂。稱取吸附飽和的樹脂5.00 g裝柱,此過程要注意將柱體內(nèi)的起泡排出并將柱體充分平衡,然后用去離子水充分洗滌附著在樹脂表面的雜質(zhì),按照同樣的方法制備D101樹脂柱4份。洗脫過程中保持3 BV/h的洗脫速度,并分別使用體積分數(shù)為25%、50%、75%、95%的乙醇溶液進行洗脫,每0.4 BV流出液收集一份,測定流出液中的原花青素濃度,繪制洗脫曲線,確定洗脫液的體積分數(shù)。

1.2.2.4 洗脫流速和洗脫劑用量的確定 以95%的乙醇水溶液為洗脫劑,采用動態(tài)洗脫法確定適宜的洗脫流速。按照1.2.5中的方法制備吸附飽和的D101樹脂柱4份,并分別以2.0、2.5、3.0、3.5 BV/h的洗脫速度進行洗脫,每0.4 BV流出液收集一份,繪制洗脫曲線,根據(jù)洗脫曲線確定流速和用量。

1.2.3 原花青素和低聚原花青素的制備 分別取5、20、50 g吸附飽和的大孔樹脂D101,以2.5 BV/h的洗脫流速使用95%的乙醇進行洗脫,洗脫劑用量為4 BV,制備3份經(jīng)大孔樹脂純化的原花青素洗脫液樣品,將其減壓濃縮并冷凍干燥,即得經(jīng)純化的黑果枸杞原花青素凍干粉(LRP)。將LRP樣品使用去離子水制備成2 mg/mL含量的原花青素水溶液,并向其中加入2倍體積的乙酸乙酯試劑萃取其中的低聚原花青素,在避光條件下置于30 ℃條件下振蕩萃取2 h,萃取結束收集乙酸乙酯相,并減壓濃縮、冷凍干燥制備成黑果枸杞原花青素低聚物樣品(LROPC)儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 高效液相色譜檢測 LROPC樣品中單體和二聚體是原花青素低聚體的重要組成部分,本文使用高效液相色譜檢測兒茶素、表兒茶素、原花青素B2等幾種重要成分。

HPLC方法的條件為:柱規(guī)格為250 mm×4.6 mm,5 μm;流動相A為2%的冰乙酸,流動相B為80%乙腈水溶液,流動相過0.45 μm的有機微孔濾膜;總流速為1 mL/min;檢測波長為280 nm;待測樣品過0.22 μm的有機微孔濾膜,進樣體積為10 μL,流動相梯度洗脫程序見表2[21]。

1.2.5 測定方法

1.2.5.1 原花青素和多糖含量的檢測 使用濃鹽酸-香草醛法進行標準曲線的繪制和原花青素定量分析。精密稱取兒茶素標準品,用甲醇溶解,并配制成50、100、150、200、250、300、350、400 μg/mL的標準溶液。分別吸取上述濃度梯度的樣品1 mL,并依次添加4%的香草醛-甲醇溶液3 mL、濃鹽酸1.5 mL,將此反應體系置于40 ℃水浴鍋內(nèi)避光反應30 min,并以1 mL甲醇替代兒茶素溶液作為空白,于500 nm波長下測定吸光度,以兒茶素濃度為橫坐標,相應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線[16]。將LRPE配制成原花青素含量為2.0 mg/mL的甲醇溶液,并代替標準溶液進行原花青素含量檢測。采用苯酚硫酸法檢測樣品中的多糖含量[17]。

1.2.5.2 原花青素純度的測定 稱取制備好的樣品0.1 g,用甲醇溶解并定容至10 mL(相當于稀釋100倍),采用香草醛-濃鹽酸法測定溶液中所含的原花青素的濃度C,按照下式計算LRPE中原花青素的純度[18]。

1.2.5.3 原花青素平均聚合度的測定 如前所述,使用香草醛-濃鹽酸法僅能測得溶液中原花青素的含量,無法獲知其聚合度。有文獻顯示[19],將香草醛-濃鹽酸法中的甲醇以乙酸代替,配制香草醛-乙酸溶液,香草醛只與末端的黃烷3-醇發(fā)生縮合反應。根據(jù)從而可以測定溶液中原花青素的物質(zhì)的量,進而求得原花青素的平均聚合度。魏冠紅[20]等人利用此原理對檢測方法進行優(yōu)化,確認反應體系為1 mL待測樣品-乙酸溶液+5 mL香草醛/鹽酸/乙酸溶液(0.5 g/4 mL/100 mL),將該體系置于(20±1) ℃下反應5 min后在500 nm處測定吸光度。以兒茶素標準品為單體,以兒茶素物質(zhì)的量為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線。將樣品代替兒茶素測定該反應條件下的吸光度,即可測得樣品中原花青素的物質(zhì)的量濃度M,進而計算得出平均聚合度DP,計算公式如下:

平均聚合度(DP)=樣品中原花青素的濃度/(樣品中原花青素的物質(zhì)的量×290.27)

式中:290.27表示單體兒茶素和表兒茶素的分子量。

1.3數(shù)據(jù)處理

文中所有指標平行測定3次,結果均以均值表示,采用Excel 2007對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計,并在圖表中添加了標準差和誤差線。

2 結果與分析

2.1原花青素和粗多糖含量、原花青素物質(zhì)的量的測定標準曲線

根據(jù)1.2.5.1的方法,以兒茶素為標準品,所得標準曲線回歸方程為:Y=0.0033X+0.0302,相關系數(shù)R2=0.9993,該方程的原花青素檢測范圍在0～400 μg/mL,各樣品均以此法測定原花青素濃度。

采用苯酚硫酸法,以葡萄糖為標準品,所得粗多糖檢測的標準曲線回歸方程為:Y=0.0109X-0.0031,相關系數(shù)R2=0.9997,該方程的多糖檢測范圍在0～100 μg/L,各樣品均以此法測定多糖含量。

根據(jù)1.2.5.3的方法,以兒茶素為標準品,所得物質(zhì)的量的曲線回歸方程為:Y=5.9182X+0.0076。相關系數(shù)R2=0.9989,該方程的物質(zhì)的量濃度檢測范圍在0.027～0.344 mmol/L,各樣品均以此法測定物質(zhì)的量濃度。

2.2樹脂篩選

本實驗選取3種非極性、2種弱極性、1種聚酰胺樹脂,進行靜態(tài)吸附、動態(tài)解吸附能力研究,各種樹脂的吸附量、解吸量和解吸率見圖1。

圖1 不同樹脂對LRPE的吸附量、解吸量及解吸率的影響

原花青素是一類具有黃烷三醇結構的聚多酚化合物,不同聚合度的原花青素具有不等強度的極性,聚合度越低,極性越低。從圖1中看出,弱極性大孔樹脂AB-8的吸附量和解吸量都最大,分別達到27.88 mg/g和26.16 mg/g,但是其解吸率93.82%不及D101樹脂95.27%高,并且D101樹脂的吸附量和解吸量也較高,分別達到25.71 mg/g和24.49 mg/g。同時,實驗中還對被吸附的粗提物樣品進行分析,發(fā)現(xiàn)粗提物中最多的干擾性成分是多糖以及與原花青素具有相似特性的多酚類物質(zhì)。因此實驗過程還同時考察了吸附量和解吸量較高的D101、HPD100和AB-8這三種樹脂在吸附過程中對多糖類物質(zhì)的脫除量和脫除效果,結果見圖2。從圖2可知,D101對多糖的去除效果最佳,可以去除粗提液中93.60%的多糖,由此可以進一步減小在后續(xù)純化過程中的除雜難度。綜合以上因素,優(yōu)選D101大孔樹脂純化黑果枸杞中的原花青素。

圖2 大孔樹脂對多糖的脫除量及脫除率

2.3洗脫液體積分數(shù)的確定

乙醇、丙酮等都是常見的用于大孔樹脂純化原花青素的洗脫劑,但在實驗中發(fā)現(xiàn),以丙酮為洗脫液,在減壓濃縮過程中丙酮會與樣品形成絡合物,張慧文[13]就曾從花生紅衣中提取原花青素并制備兒茶素丙酮縮合物以提高兒茶素的細胞膜通透性。但這會影響對樣品組分的分析,故最終選取乙醇為洗脫液,其穩(wěn)定性和安全性都被廣泛認可,并被實際應用在黃酮、多酚、原花青素等天然產(chǎn)物制備的純化過程[22]中。不同體積分數(shù)的乙醇溶液洗脫曲線如圖3所示。在25%～95%范圍內(nèi),隨著乙醇體積分數(shù)的增大,原花青素的解吸速度越來越快;洗脫流速相同時,在75%～95%的乙醇體積分數(shù)范圍內(nèi),洗脫曲線趨于接近。但是體積分數(shù)較高的乙醇溶液更便于洗脫樣品，利于進行減壓濃縮,故本實驗選擇以95%的乙醇作為洗脫劑進行原花青素的洗脫。

圖3 乙醇體積分數(shù)對原花青素動態(tài)解吸效果的影響

2.4洗脫流速和洗脫劑用量的確定

按照1.2.2.4的方法進行洗脫實驗并繪制洗脫曲線，如圖4。從圖4可知,經(jīng)過洗脫劑濃度的優(yōu)化后,在2.0～3.5 BV/h之間的洗脫流速下,洗脫曲線整體峰形對稱性得以提高,拖尾程度減輕。洗脫速度在2.5 BV/h時,峰形對稱性最高;當流速由2.5 BV/h升至3.5 BV/h時,拖尾程度加強,這可能是由于流速過快,原花青素在樹脂中的位移速度差異較大,導致洗脫劑中分配的原花青素含量降低,延長了洗脫時間,加大了洗脫劑的用量。當流速控制在2.5 BV/h時,解吸率達到最高值95.52%。在2.5 BV/h的洗脫曲線上,當洗脫劑用量達到3.2～3.6 BV時,對應的洗脫液收集管中的原花青素含量達到58 μg/mL,繼續(xù)洗脫至洗脫液用量4.0 BV時,對應收集管中的原花青素濃度僅為27 μg/mL;而其他洗脫流速下,洗脫液體積達到4.8～6.0 BV時,其相應收集管中的原花青素濃度才降至30 μg/mL以下,并且從原花青素濃度降至100 μg/mL以后,曲線的拖尾現(xiàn)象較嚴重,綜合考慮選取洗脫流速2.5 BV/h,洗脫劑用量4.0 BV。

圖4 洗脫流速對原花青素動態(tài)解吸效果的影響

2.5純度和平均聚合度的測定

參照前述的方法,分別制備LRPE,LRP和LROPC樣品各3份,檢測樣品的純度和平均聚合度驗證純化參數(shù)及純化系統(tǒng)的穩(wěn)定性,結果見表3。

表3 LRPE、LRP和LROPC的純度和平均聚合度檢測結果

從表3知,樣品LRPE依次經(jīng)大孔樹脂吸附制備LRP、經(jīng)乙酸乙酯萃取制備LROPC后,純度由31.33%提高至69.37%,從純度變化可知,在原花青素制備過程中起到主要純化作用的是大孔樹脂吸附過程,在此過程中原花青素的聚合度無明顯提升,僅從9.63降低至8.98,這與大孔樹脂的孔徑遠遠超過原花青素的分子粒徑有關,只能除去多糖等分子粒徑大于孔徑的物質(zhì),對原花青素的純化基本無選擇性;而經(jīng)乙酸乙酯萃取后,純度無明顯變化,但是卻對樣品中所含的低聚原花青素起到了明顯的純化作用,降低了樣品中原花青素的平均聚合度,李綺麗也曾以乙酸乙酯萃取技術對蓮子皮中的低聚原花青素進行純化[12]。乙酸乙酯是常用于分離低聚體原花青素的萃取溶劑[23]。通過萃取可以得到兒茶素等單體和低聚體原花青素;而殘留于萃取水層的主要是多聚原花青素;由于乙酸乙酯是弱極性溶劑,黃烷醇單體和低聚體原花青素等也是弱極性物質(zhì),而水是帶氫鍵的強極性溶劑,故乙酸乙酯形成“溶劑空位”所需的吸收能量比水的更小,因此黃烷醇單體和低聚體原花青素更易溶于乙酸乙酯,從而達到將高聚體原花青素和低聚體原花青素分離萃取的目的。萃取體系分為明顯的兩層,上層為乙酸乙酯層,呈現(xiàn)淺黃色,主要用于萃取低聚體的原花青素;下層為水相層，由于混合了花青素等色素、高聚原花青素等成分,使水相層呈現(xiàn)淺紫色,并在水相層下部沉積了少量在兩相中均不溶解的沉淀物[12]。此外,從表3中各組數(shù)據(jù)的一致性來看,本文優(yōu)化所得大孔樹脂純化和乙酸乙酯萃取技術體系穩(wěn)定可靠,可為黑果枸杞中原花青素的分級純化制備提供依據(jù)。

2.6LROPC液相色譜檢測

乙酸乙酯萃取結束后,對乙酸乙酯相進行減壓濃縮并使用高效液相色譜進行檢測,色譜圖見圖5。圖5(a)中的1#峰和2#峰物質(zhì)分別是標準品兒茶素和表兒茶素,出峰時間分別為24.0 min和36.3 min;(b)圖的出峰物質(zhì)則是標準品原花青素二聚體B2,出峰時間為29.3 min;(c)圖是使用同樣方法檢測LROPC的液相色譜峰圖,對照(a)和(b)標準峰圖,分別在三個出峰時間24.0、29.3和36.3 min上有強峰顯示,表明樣品中含有這三種成分,并且其中兒茶素和表兒茶素的峰強度較高;經(jīng)三處峰面積統(tǒng)計,峰面積占總峰面積的18.73%,進一步確定了乙酸乙酯對原花青素低聚體具有較好的萃取效果。

圖5 兒茶素,表兒茶素,原花青素B2和LROPC的HPLC圖譜

3 結論

本研究采用大孔樹脂吸附技術建立了黑果枸杞中原花青素粗提物的純化方法,確定使用D101樹脂進行靜態(tài)振蕩吸附15 h,將吸附飽和的樹脂濕法裝柱,充分洗凈表面雜質(zhì)后,在2.5BV/h的洗脫流速下,使用體積分數(shù)為95%的乙醇4.0 BV進行動態(tài)解吸,所得樣品中的原花青素的純度由31.33%提高至68.03%;對洗脫所得樣品利用乙酸乙酯萃取純化,得到原花青素低聚物,平均聚合度從萃取前的8.98降低至3.17;通過液相色譜檢測,從原花青素低聚物中檢測到了兒茶素、表兒茶素和原花青素二聚體B2的峰圖,并且三種物質(zhì)的峰面積之和占總峰面積的18.73%,進一步證實了乙酸乙酯對原花青素低聚物的富集效果顯著,可為黑果枸杞中原花青素的分級純化提供技術參考。同時,為鑒定液相圖譜中其他強峰物質(zhì)的名稱,可在此純化和檢測技術的基礎上進一步對樣品進行液質(zhì)聯(lián)用測定。

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PurificationoftheproanthocyanidinsfromLyciumruthenicumMurr.bymacroporousresin

ZHAOWen-juan1,SONGYang2,YANGHong-jiang1,*

(1.Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457,China;2.College of Biotechnology,Qilu University of Technology,Jinan 250353,China)

Macroporous resin were used to purify the crude proanthocynidins extract fromLyciumruthenicumMurr.. Absorbation and desorption capacity were determined to study the purification effect on proanthpcyanidins of AB-8,D130,D101,HPD100,D101-1 and polyamide macroporous resin,then desorption capacity was used to evaluate the effect of eluant concentration and elution velocity for purifying. The results showed that D101 was better for purification among the supplied macroporous resins. After static absorbation,proanthocynidins was eluated by alcohol of 95% at the elution velocity of 2.5 BV/h and eluation volume of 4.0 BV,and the purity of proanthocynidins was enhanced from 31.33% to 68.03% by macroporous resin absorbation. After that,ethyl acetate was used to extract the oligomeric proanthocyanidins,and the DP was reduced from 8.98 to 3.17. Catechin,epicatechin and proanthocyanidin B2were all detected in oligomeric proanthocyanidins by HPLC method,and their total content was 18.73% according to their peak area proportion.

LyciumruthenicumMurr.;proanthocyanidins;macroprous resin;purification

2017-04-28

趙文娟(1982-)，女，博士研究生，高級工程師，研究方向:發(fā)酵工程,E-mail:15550033656@163.com。

*

楊洪江(1966-)，男，博士，教授，研究方向:微生物學,E-mail:hongjiangyang@tust.edu.cn。

山東省優(yōu)秀中青年科學家科研獎勵基金(2014BSB01118)。

TS255.1

B

1002-0306(2017)22-0189-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.22.037