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    對(duì)羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀性能的驗(yàn)證與分析

    2017-12-05 02:42:55左方財(cái)
    當(dāng)代醫(yī)藥論叢 2017年14期
    關(guān)鍵詞:羅氏標(biāo)準(zhǔn)差精密度

    張 迪, 秦 苑, 左方財(cái)

    (貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,貴州 興義 562400)

    ·檢測(cè)與診斷·

    對(duì)羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀性能的驗(yàn)證與分析

    張 迪, 秦 苑, 左方財(cái)

    (貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,貴州 興義 562400)

    目的:評(píng)價(jià)羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀的性能。方法:貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科按照ISO15189:2012[1]和CNAS-CL36[2]的標(biāo)準(zhǔn)要求,選定乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)作為檢測(cè)項(xiàng)目,對(duì)羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:使用本儀器對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的批間精密度高值的平均值為6.19ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.30,CV為4.81%;其批間精密度低值的平均值為3.22 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.15,CV為4.64%。使用本儀器對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的批內(nèi)精密度為:其高值的平均值為6.44 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.09,CV為1.47%;其低值的平均值為3.13 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.15,CV為4.77%。上述檢測(cè)值均處于廠家推薦的允許范圍內(nèi),均滿(mǎn)足《中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T 1182-2010)核酸擴(kuò)增檢測(cè)用試劑盒(以下簡(jiǎn)稱(chēng)試劑盒)》[5]技術(shù)要求中“5.7.2”條例的要求。使用本儀器對(duì)國(guó)家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供的質(zhì)控血清進(jìn)行HBV-DNA檢測(cè),獲得的數(shù)據(jù)均在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦的允許范圍內(nèi)。對(duì)本儀器檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行靈敏度驗(yàn)證的結(jié)果為:平均值為3.43,標(biāo)準(zhǔn)差為0.25,CV為7.29%,CV處于廠家推薦的允許范圍內(nèi)(CV≤10%)。結(jié)論:在檢測(cè)HBV-DNA方面,羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度均較高,其批內(nèi)精密度和批間精密度的變異系數(shù)均在可接受的范圍內(nèi),其性能指標(biāo)均與廠家提供的性能參數(shù)相符合。該儀器可以在實(shí)驗(yàn)室被用于進(jìn)行臨床檢測(cè)工作。

    羅氏Cobas Z480;基因擴(kuò)增儀;性能驗(yàn)證

    基因擴(kuò)增儀是一種具有基因擴(kuò)增功能的檢測(cè)儀器?!癐SO 15189:2012”規(guī)范中指出,實(shí)驗(yàn)室只能使用已確認(rèn)的適用于預(yù)期用途的檢驗(yàn)程序,以滿(mǎn)足給定用途或某特定領(lǐng)域的應(yīng)用要求?!癎B/T22578-2008”規(guī)范[3]中指出,在臨床實(shí)驗(yàn)室使用廠家嚴(yán)格評(píng)估的檢驗(yàn)方法或試劑盒前,應(yīng)驗(yàn)證其分析性能,以證實(shí)其能達(dá)到廠家聲明的性能指標(biāo)。我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“WS/T420-2013”標(biāo)準(zhǔn)[4]中指出,臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所用的檢驗(yàn)方法或商品試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證?!癈NASCL36”準(zhǔn)則中指出,對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室所用的檢驗(yàn)方法、儀器或商品試劑盒進(jìn)行性能驗(yàn)證的項(xiàng)目至少應(yīng)包括其準(zhǔn)確度、精密度等。筆者根據(jù)最新的相關(guān)文件、“ISO 15189:2012”規(guī)范、“YY/T 1182-2010”說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)要求及對(duì)HBVDNA試劑盒產(chǎn)品性能的基本要求,使用本實(shí)驗(yàn)室的羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀定量測(cè)定HBV-DNA,以驗(yàn)證該儀器檢測(cè)系統(tǒng)的性能。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1)本試驗(yàn)所用的儀器為羅氏Cobas Z480熒光擴(kuò)增儀、廣東珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的16K型臺(tái)式高速離心機(jī)、杭州奧盛儀器有限公司生產(chǎn)的干式恒溫器、生物安全柜等。2)本試驗(yàn)所用的試劑為廣州中山達(dá)安基因股份有限公司提供的“乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒”,國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2012第3400078號(hào),有效期為四年;試劑批號(hào)為2016001(有效期為20170111);校準(zhǔn)品批號(hào)為20160503(有效期至20170502)。3)本試驗(yàn)中標(biāo)本的來(lái)源為廣州中山達(dá)安基因HBV-DNA檢測(cè)試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品(濃度為2.0E6)。質(zhì)控血清由國(guó)家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。本試驗(yàn)中所用的樣本來(lái)源于在本院進(jìn)行健康體檢者的100份新鮮血清標(biāo)本。

    1.2 方法

    1.2.1 精密度驗(yàn)證 根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)、本實(shí)驗(yàn)室制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)及美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)制定的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)EP15A中的相關(guān)要求,以1:10的比例將100份血清標(biāo)本的濃度分別稀釋為E6、E3,并在同一天、同一條件下對(duì)這些血清標(biāo)本進(jìn)行20次的批內(nèi)精密度測(cè)定。所有試驗(yàn)均在5個(gè)小時(shí)內(nèi)完成,并計(jì)算平均值和變異系數(shù)(CV)。對(duì)本組標(biāo)本每天進(jìn)行一次的批間精密度測(cè)定,連續(xù)檢測(cè)20天,并計(jì)算平均值和變異系數(shù)。

    1.2.2 準(zhǔn)確度驗(yàn)證 對(duì)國(guó)家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心發(fā)放的5份室間質(zhì)控品血清進(jìn)行檢測(cè),分析本實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定值是否處于國(guó)家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心給定靶值的允許范圍內(nèi)。

    1.2.3 靈敏度驗(yàn)證 取廣州中山達(dá)安基因HBV-DNA檢測(cè)試劑盒自帶(濃度為2.0E6)的標(biāo)準(zhǔn)品,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作,將標(biāo)本上機(jī)連續(xù)檢測(cè)10次,計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)(CV),并根據(jù)廠家提供的檢測(cè)限(1.00×103IU/ml),檢測(cè)其CV是否處于廠家提供的允許范圍內(nèi)(CV≤10%)。

    2 結(jié)果

    2.1 進(jìn)行精密度驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果

    使用本儀器對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的批間精密度高值的平均值為6.19ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.30,CV為4.81%;其批間精密度低值的平均值為3.22 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.15,CV為4.64%。使用本儀器對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的批內(nèi)精密度為:其高值的平均值為6.44 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.09,CV為1.47%;其低值的平均值為3.13 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)差為0.15,CV為4.77%。上述檢測(cè)值均處于廠家推薦的允許范圍內(nèi),均滿(mǎn)足《中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T 1182-2010)核酸擴(kuò)增檢測(cè)用試劑盒(以下簡(jiǎn)稱(chēng)試劑盒)》[5]技術(shù)要求中“5.7.2”條例的要求。該條例明確規(guī)定,標(biāo)本的精密度應(yīng)符合檢測(cè)濃度對(duì)數(shù)值的變異系數(shù)(CV≤5%)。

    2.2 進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果

    使用本儀器對(duì)2015年9月由國(guó)家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供的質(zhì)控血清進(jìn)行HBV-DNA檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果均在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供的上限、下限允許的范圍內(nèi)。詳情見(jiàn)表1。評(píng)均通過(guò)審核,準(zhǔn)確度均符合標(biāo)準(zhǔn)。

    表1 進(jìn)行本次HBV-DNA測(cè)定結(jié)果的分析

    2.3 進(jìn)行靈敏度驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果

    對(duì)本儀器檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行靈敏度驗(yàn)證的結(jié)果為:平均值為3.43,標(biāo)準(zhǔn)差為0.25,CV為7.29%,CV處于廠家推薦的允許范圍內(nèi)(CV≤10%)。

    3 討論

    《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》(ISO15189準(zhǔn)則)中指出,實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其所用的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證。筆者根據(jù)ISO15189準(zhǔn)則及CNAS-CL36準(zhǔn)則在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)方面的相關(guān)要求及羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀性能指標(biāo)的相關(guān)要求,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系在儀器性能指標(biāo)方面的要求,對(duì)該儀器的批內(nèi)精密度、批間精密度、檢測(cè)的準(zhǔn)確度及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。

    筆者所在單位對(duì)羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證的結(jié)果顯示,該儀器的精密度、靈敏度及準(zhǔn)確度均較高,操作的重復(fù)性好,其批內(nèi)和批間變異系數(shù)均在可接受的范圍內(nèi),能夠有效地進(jìn)行乙型肝炎病毒定量檢測(cè)。我們對(duì)該儀器3項(xiàng)性能的驗(yàn)證結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[6-8]報(bào)道的結(jié)果相一致。

    乙型病毒性肝炎是一種因感染乙型肝炎病毒(HBV)引起的肝炎。我國(guó)屬于HBV感染的流行區(qū)。我們居民進(jìn)行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性率約為9.09%[9]。近年來(lái),我國(guó)針對(duì)乙型病毒性肝炎的流行情況采取一系列的防疫措施,使該病的流行病學(xué)特點(diǎn)發(fā)生了顯著的變化[10]。傳統(tǒng)的HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)法屬于定性檢測(cè)法,可間接了解患者體內(nèi)HBV復(fù)制的情況。但當(dāng)該病毒發(fā)生變異時(shí),對(duì)其進(jìn)行定性檢測(cè)的效果可顯著變差。目前,臨床上主要采用PCR技術(shù)進(jìn)行HBV-DNA檢測(cè),以獲取分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方面的診斷依據(jù)。該技術(shù)不僅可以對(duì)HBV進(jìn)行定性檢測(cè),還可定量檢測(cè)患者體內(nèi)HBV的復(fù)制情況。進(jìn)行HBV-DNA檢查可從血清中直接檢測(cè)HBV的存在與否[11],其操作快速、靈敏度較高、獲取試驗(yàn)報(bào)告的周期較短。根據(jù)對(duì)患者進(jìn)行HBV-DNA檢查的結(jié)果進(jìn)行分析,可判斷其體內(nèi)HBV的復(fù)制情況及傳染性,有助于臨床醫(yī)師為其設(shè)計(jì)治療方案、選用藥物、觀察療效及評(píng)估預(yù)后。

    進(jìn)行儀器性能的驗(yàn)證是ISO15189準(zhǔn)則中要求完成的重要工作之一。根據(jù)新版ISO15189認(rèn)可準(zhǔn)則和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明》的要求,筆者對(duì)本實(shí)驗(yàn)室羅氏Cobas Z480基因擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證的結(jié)果顯示,該儀器檢測(cè)系統(tǒng)的精密度、敏感度、準(zhǔn)確度均較高,重復(fù)操作性好,其批內(nèi)精密度和批間精密度的變異系數(shù)均在可接受范圍內(nèi),其3項(xiàng)性能的指標(biāo)均與廠家提供的性能參數(shù)相符合,可以在實(shí)驗(yàn)室被用于進(jìn)行臨床檢測(cè)工作。

    [1] 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).ISO15189:2012醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專(zhuān)用要求[S].北京:中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì),2012.

    [2] 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL36醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明[S].北京:中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì),2012.

    [3] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員院會(huì).GB/T22576.2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一質(zhì)量和能力的專(zhuān)用要求[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

    [4] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),WS/T420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013.

    [5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.YY/T 1182-2010核酸擴(kuò)增檢測(cè)用試劑(盒)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

    [6] 羅卉麗,袁杭,毛源,等. 分子診斷定量項(xiàng)目分析性能驗(yàn)證程序探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2015,36(16): 2360-2362.

    [7] 王治國(guó). 臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2009.

    [8] 康鳳鳳,王治國(guó).ISO15189:2012與臨床檢驗(yàn)定量檢測(cè)方法確認(rèn)和性能驗(yàn)證[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2013,31(12):881-884.

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    [10] 朱科倫,朱郇憫,曾文鋌,等.乙型肝炎流行病學(xué)的研究新進(jìn)展[J].廣州醫(yī)藥,2010,41(4):1-2.

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    R446.1

    B

    2095-7629-(2017)14-0134-02

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