白藜蘆醇對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的治療作用及其機(jī)制

［摘 要］ 目的：探討白藜蘆醇對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎 （TMJOA） 的治療作用，并闡明相關(guān)作用機(jī)制。方法：45只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和白藜蘆醇組，每組15只。模型組和白藜蘆醇組大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射20 g·L－1 碘乙酸鈉（MIA） 50 μL，構(gòu)建TMJOA 大鼠模型；對(duì)照組大鼠注射等量生理鹽水。造模3 周后，白藜蘆醇組大鼠注射80 μL 白藜蘆醇溶液，每周1 次，連續(xù)3 周，對(duì)照組和模型組大鼠注射等量生理鹽水。微型計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)（Micro-CT） 系統(tǒng)檢測(cè)各組大鼠髁突結(jié)構(gòu)，計(jì)算感興趣區(qū)的骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb. Th）、骨小梁間距（Tb. p） 和骨小梁數(shù)（Tb. N）。HE 染色和甲苯胺藍(lán)染色觀察各組大鼠顳下頜關(guān)節(jié)（TMJ） 組織病理形態(tài)表現(xiàn)，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠TMJ 組織中性別決定區(qū)Y 框蛋白（SOX）-9、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-13、沉默信息調(diào)節(jié)因子（Sirt）1、磷脂酰肌醇3 激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B （p-Akt） 和磷酸化哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR） 蛋白表達(dá)水平，實(shí)時(shí)熒光定量PCR （RT-qPCR） 法檢測(cè)各組大鼠TMJ 組織中SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR） 和蛋白激酶B （Akt） mRNA 表達(dá)水平。結(jié)果：造模3周后，大鼠髁突骨質(zhì)破壞明顯，表面粗糙不平，延續(xù)性中斷，表明TMJOA大鼠模型造模成功。Micro-CT 系統(tǒng)檢測(cè)，對(duì)照組大鼠髁突表面光滑，形態(tài)規(guī)則，骨質(zhì)連續(xù)完整；模型組大鼠髁突破壞明顯，骨質(zhì)連續(xù)性受到不同程度破壞，表面粗糙可伴有不同程度骨質(zhì)缺損；白藜蘆醇組大鼠髁突病變減輕，髁突形態(tài)外觀得到一定的改善。與對(duì)照組比較，模型組大鼠BV/TV 和Tb. Th 均明顯降低（Plt;0. 05），Tb. Sp明顯增加（Plt;0. 05）；與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠BV/TV 和Tb. Th 均明顯升高（Plt;0. 05），Tb. Sp明顯減少（Plt;0. 05）。HE 染色觀察，對(duì)照組大鼠髁突層次清晰，軟骨細(xì)胞排列規(guī)則，整齊有序；模型組大鼠髁突表面粗糙不平，缺損明顯，呈現(xiàn)典型的TMJOA 表現(xiàn)；白藜蘆醇組大鼠髁突表面略微粗糙，整體分層大致清晰，細(xì)胞排列較為有序。甲苯胺藍(lán)染色觀察，對(duì)照組大鼠髁突肥大層軟骨細(xì)胞呈藍(lán)紫色，染色明顯且均勻；模型組大鼠髁突肥大層軟骨細(xì)胞淡染，部分區(qū)域甚至失染；白藜蘆醇組大鼠髁突肥大細(xì)胞層染色基本明顯且較為均勻。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，與對(duì)照組比較，模型組大鼠TMJ 組織中MMP-13、PI3K、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05）， SOX-9和Sirt1 蛋白表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）；與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠TMJ 組織中SOX-9 和Sirt1 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05），MMP-13、PI3K、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）。RT-qPCR 法檢測(cè)，與對(duì)照組比較，模型組大鼠TMJ 組織中MMP-13、PI3K、Akt和mTOR mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05），SOX-9 和Sirt1 mRNA 表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）；與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠TMJ 組織中SOX-9 和Sirt1 mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05），MMP-13、PI3K、Akt和mTOR mRNA表達(dá)水平均明顯降低 （Plt;0. 05）。結(jié)論：白藜蘆醇對(duì)TMJOA 有治療作用，其作用機(jī)制可能是通過激活Sirt1、抑制PI3K-Akt-mTOR 信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。

［關(guān)鍵詞］ 白藜蘆醇； 顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎； 沉默信息調(diào)節(jié)因子1； 磷脂酰肌醇3 激酶； 蛋白激酶B；哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白

［中圖分類號(hào)］ R684.3 ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

顳下頜關(guān)節(jié)（temporomandibular joint， TMJ）由顳骨關(guān)節(jié)面、關(guān)節(jié)盤、髁突、關(guān)節(jié)韌帶和關(guān)節(jié)囊組成， 作為頜面部唯一的聯(lián)動(dòng)關(guān)節(jié)， 在咀嚼、吞咽、表情、呼吸及言語(yǔ)等下頜功能運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮作用［1］。在TMJ 相關(guān)疾病中，以顳下頜關(guān)節(jié)紊亂?。╰emporomandibular joint disorder， TMD） 最為常見［2］。顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎（temporomandibularjoint osteoarthritis， TMJOA） 是TMD 的重癥表現(xiàn)，常出現(xiàn)典型的關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)功能喪失、關(guān)節(jié)不穩(wěn)定、錯(cuò)頜甚至面部畸形［3］，女性患者較男性患者多見，尤其是青春期后和生育期間的女性［4］。對(duì)于TMJOA，目前僅限于保守治療以控制癥狀或開放手術(shù)，尚無(wú)有效的疾病修復(fù)辦法以修復(fù)和再生受損的TMJ［5-7］。

白藜蘆醇屬天然抗氧化物質(zhì)，是來源于自然植物的多酚化合物，在虎杖、花生和葡萄等植物中含量豐富，由植物毛葉藜蘆的根部第一次提取出來［8］。白藜蘆醇存在順式和反式2 種同分異構(gòu)體，自然界中以反式同分異構(gòu)體為主，其作用多樣，在抗真菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤和心臟及神經(jīng)等組織器官中發(fā)揮重要的保護(hù)作用［9］。研究［10］ 發(fā)現(xiàn)：白藜蘆醇在骨科疾病如骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）中也具有重要作用，可以通過抑制早期OA 炎癥相關(guān)因子的表達(dá)而達(dá)到治療OA 的效果。盡管關(guān)于白藜蘆醇治療OA 的研究［11-12］已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但是主要集中于膝關(guān)節(jié)，關(guān)于白藜蘆醇在TMJOA治療中作用的研究較少。近年來，有學(xué)者［13］ 觀察了白藜蘆醇對(duì)TMJOA 軟骨破壞和滑膜炎癥的影響，但目前報(bào)道極少，且缺乏機(jī)制方面的進(jìn)一步探索。

本研究通過關(guān)節(jié)腔內(nèi)常規(guī)注射碘乙酸鈉（monosodium iodoacetate， MIA） 法構(gòu)建大鼠TMJOA 模型，探討白藜蘆醇對(duì)TMJOA 大鼠關(guān)節(jié)軟骨的影響， 并闡明其具體的作用機(jī)制， 以期為TMJOA 的臨床診療提供參考。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器 6周齡 SD雄性大鼠45 只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK （吉）2023-0010， 體質(zhì)量150～200 g， 購(gòu)自長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。大鼠飼養(yǎng)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房中，保持環(huán)境清潔，恒溫恒濕，定期消毒和通風(fēng)，實(shí)驗(yàn)前所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：2022450），實(shí)驗(yàn)過程均符合實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物倫理準(zhǔn)則。MIA 和二甲基亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO） 購(gòu)自上海阿拉丁公司，白藜蘆醇購(gòu)自上海麥克林公司，乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid， EDTA）（型 號(hào)：1340GR500） 購(gòu)自德國(guó)BioFroxx 公司，HE 染色試劑盒（型號(hào)：C0105） 購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，甲苯胺藍(lán)染色液（型號(hào)：G3661）、DAB顯色劑和0. 1% 亞甲基藍(lán)染色液（型號(hào)： G1300）購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司，兔源沉默信息調(diào)節(jié)因子（silence information regulator，Sirt）1 一抗（型號(hào)：ab189494） 購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司，兔源基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase， MMP）-13（ 型 號(hào)： bs-10250R）、磷 脂 酰 肌 醇 3 激 酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）（ 型號(hào)：bs-10657R）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）（ 型號(hào)：bs-6951R）和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target ofrapamycin， mTOR）（型號(hào)： bs-1992R） 一抗購(gòu)自均北京博奧森生物技術(shù)有限公司，兔SP 試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司， TRIzol 試劑購(gòu)自日本TaKaRa 公司，逆轉(zhuǎn)錄PCR 試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR （real-time fluorescence quantitativePCR， RT-qPCR） 試劑盒購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司， PCR 引物購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。微型計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)（microcomputedtomography， Micro-CT） 系統(tǒng)購(gòu)自瑞士Scanco Medical AG 公司， 分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher 公司，PCR 儀購(gòu)自瑞士Roche 公司。

1. 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和模型制備 45只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和白藜蘆醇組， 每組15 只。模型組和白藜蘆醇組大鼠腹腔注射麻醉， 側(cè)臥位，TMJ 周圍區(qū)域消毒、備皮， 于眼外眥與外耳道下緣連線并距離外耳道下緣3～4 mm 處和顴弓后下方，向前內(nèi)上進(jìn)針，抵達(dá)骨壁回抽無(wú)血后，向兩側(cè)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射20 g·L－1 MIA 50 μL， 留針1 min，構(gòu)建TMJOA 大鼠模型，對(duì)照組大鼠注射等量生理鹽水。見圖1。

1. 3 各組大鼠處理方法和組織取材 造模3周后，白藜蘆醇組大鼠注射80 μL 白藜蘆醇溶液（0. 5 mg白藜蘆醇溶于80 μL DMSO中），每周1次，連續(xù)3周，對(duì)照組和模型組大鼠注射等量生理鹽水。注射完成1 周后，麻醉下頸椎脫臼處死大鼠，完整取出雙側(cè)TMJ 組織，一側(cè)放入4% 多聚甲醛溶液中固定，脫鈣后用于HE 和免疫組織化學(xué)染色，一側(cè)放入－80 ℃冰箱凍存，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1. 4 Micro-CT系統(tǒng)檢測(cè)各組大鼠髁突結(jié)構(gòu) 將樣本置入高分辨率體內(nèi)X 射線Micro-CT 系統(tǒng)中掃描，掃描完成后進(jìn)行三維重建，并于髁突頂部軟骨與軟骨下骨交界處正下方，選取橫截面積0. 5 mm2，長(zhǎng)軸1. 0 mm 的圓柱體作為感興趣區(qū)，檢測(cè)感興趣區(qū)的骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb. Th）、骨小梁間距（Tb. p） 和骨小梁數(shù)（Tb. N）， 其中BV/TV、Tb. Th 和Tb. N 與骨質(zhì)量呈正相關(guān)關(guān)系，Tb. p 與骨質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

1. 5 HE 染 色 和 甲 苯 胺 藍(lán) 染 色 觀 察 各 組 大 鼠TMJ組織病理形態(tài)表現(xiàn) 大鼠 TMJ組織采用 4%多聚甲醛固定后，脫鈣3 個(gè)月，期間可視情況更換脫鈣液， 至1 mL 注射器針尖可無(wú)阻力刺穿組織，脫水、透明、浸蠟、包埋和切片，采用HE 染色和甲苯胺藍(lán)染色， 光學(xué)顯微鏡下觀察并進(jìn)行圖像處理。

1. 6 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠TMJ組織中性別決定區(qū) Y 框蛋白（sex determining region Y boxprotein，SOX）-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、磷酸化Akt（phosphorylated-Akt，p-Akt）和 磷 酸 化 mTOR（phosphorylated-mTOR，p-mTOR）蛋白表達(dá)水平 取各組大鼠TMJ 組織，進(jìn)行脫蠟和水化，胃蛋白酶抗原修復(fù)， 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷， 滴加一抗，4 ℃過夜，加入反應(yīng)增強(qiáng)液和增強(qiáng)酶標(biāo)山羊抗兔IgG， DAB 顯色， 蘇木精復(fù)染， 于顯微鏡下觀察，采用Image J 軟件檢測(cè)，計(jì)算各組大鼠TMJ 組織免疫組織化學(xué)染色平均光密度值，以平均光密度值代表目的蛋白表達(dá)水平。平均光密度=區(qū)域內(nèi)特定染色部分累積光密度（IOD） /區(qū)域面積。

1. 7 RT-qPCR法檢測(cè)各組大鼠TMJ組織中SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、mTOR 和 Akt mRNA 表達(dá)水平 大鼠髁突軟骨研磨至粉末狀，TRIzol 提取軟骨組織RNA，DEPC 水溶解，Nanodrop 測(cè)定RNA濃度，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，SYBR 法擴(kuò)增，95 ℃、30 s預(yù)變性， 95 ℃ 、10 s， 60 ℃ 、30 s， 95 ℃ 、15 s，60 ℃ 、60 s， 95 ℃ 、15 s， 共40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH 內(nèi)參， 采用2－ΔΔCt 法計(jì)算目的基因表達(dá)水平。引物序列見表1。

1. 8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS 22. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組大鼠骨結(jié)構(gòu)參數(shù)， TMJ 組織中SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、mTOR 和AktmRNA 表達(dá)水平及SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以x±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2. 1 TMJOA大鼠模型 MIA注射1 d后，大鼠面部術(shù)區(qū)周圍出現(xiàn)明顯腫脹。造模3 周后，大鼠髁突骨質(zhì)破壞明顯，表面粗糙不平，延續(xù)性中斷，表明TMJOA 大鼠模型制備成功。見圖2。

2. 2 各組大鼠髁突結(jié)構(gòu) 對(duì)照組大鼠髁突表面光滑，形態(tài)規(guī)則，骨質(zhì)連續(xù)完整；模型組大鼠髁突破壞明顯，骨質(zhì)連續(xù)性受到不同程度破壞，表面粗糙可伴有不同程度骨質(zhì)缺損；白藜蘆醇組大鼠髁突病變減輕，髁突形態(tài)外觀得到一定的改善。見圖3。與對(duì)照組比較，模型組大鼠BV/TV 和Tb. Th 均明顯降低（Plt;0. 05）， Tb. Sp 明顯增加（Plt;0. 05）；Tb. N 減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0. 05）。與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠BV/TV 和Tb. Th 均明顯升高（Plt;0. 05）， Tb. Sp 明顯減少（Plt;0. 05）； Tb. N 增加， 但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0. 05）。見表2。

2. 3 各組大鼠 TMJ組織病理形態(tài)表現(xiàn) HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組大鼠髁突分為纖維層、增殖層、肥大層和透明軟骨層， 層次清晰， 軟骨細(xì)胞排列規(guī)則，整齊有序。模型組大鼠髁突表面粗糙不平，缺損明顯， 軟骨分層不明顯， 細(xì)胞數(shù)量減少， 出現(xiàn)無(wú)細(xì)胞區(qū)及裂隙， 細(xì)胞排列紊亂， 界限不清，呈現(xiàn)典型的TMJOA 表現(xiàn)。白藜蘆醇組大鼠髁突表面略微粗糙， 整體分層大致清晰， 細(xì)胞數(shù)量輕微減少，細(xì)胞排列較為有序。見圖4。甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果顯示： 對(duì)照組大鼠髁突肥大層軟骨細(xì)胞呈藍(lán)紫色， 染色明顯且均勻； 模型組大鼠髁突肥大層軟骨細(xì)胞淡染， 部分區(qū)域甚至失染； 白藜蘆醇組大鼠髁突肥大細(xì)胞層染色基本明顯且較為均勻。見圖5。

2. 4 各 組 大 鼠 TMJ 組 織 中 SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表達(dá)水平 與對(duì)照組比較， 模型組大鼠TMJ 組織中MMP-13、PI3K、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05），SOX-9 和Sirt1 蛋白表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）。與模型組比較， 白藜蘆醇組大鼠TMJ 組織中SOX-9 和Sirt1 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05），MMP-13、PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）。見圖6 和表3。

2. 5 各 組 大 鼠 TMJ 組 織 中 SOX-9、MMP-13、Sirt1、PI3K、mTOR和 Akt mRNA表達(dá)水平 與對(duì)照組比較， 模型組大鼠TMJ 組織中MMP-13、PI3K、Akt 和mTOR mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05）， SOX-9 和Sirt1 mRNA 表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）。與模型組比較， 白藜蘆醇組大鼠TMJ 組織中SOX-9 和Sirt1 mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05）， MMP-13、PI3K、Akt 和mTOR mRNA 表達(dá)水平均明顯降低（Plt;0. 05）。見表4。

3 討 論

TMJOA 作為一種常見的疾病，在人群中具有較高的患病率。TMJOA 在20～49 歲年齡組患者患病率為25%， 而73～75 歲年齡組患者患病率高達(dá)70% ［14］。近年來， TMJOA 的發(fā)展趨勢(shì)逐漸年輕化，青少年發(fā)病率也急劇上升，嚴(yán)重影響青少年TMJ 的生長(zhǎng)發(fā)育［15］。

目前在多種治療方式之中，與物理療法如電、光和超聲等比較，通過關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射藥物的方式治療TMJOA 療效確切，應(yīng)用廣泛，患者易于接受。白藜蘆醇由于其抗炎和抗氧化等特性，能夠在OA中發(fā)揮作用，達(dá)到減輕炎癥和保護(hù)軟骨。研究［16-17］表明： 白藜蘆醇能夠減少膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中炎性因子的釋放，促進(jìn)軟骨組織修復(fù)和再生。與膝關(guān)節(jié)比較， TMJ 具有其特殊性， 因此白藜蘆醇在TMJOA 中的作用尚需進(jìn)一步明確。本研究結(jié)果顯示： 與模型組比較， 白藜蘆醇組髁突頂軟骨下骨BV/TV 和Tb. Th 明顯升高，Tb. Sp 明顯減少，提示白藜蘆醇能夠有效減少骨吸收，促進(jìn)骨修復(fù)，對(duì)TMJOA 發(fā)展起抑制作用。此外， HE 染色和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠髁突表面光滑， 分層清晰， 排列有序，且SOX-9 蛋白表達(dá)水平明顯升高，MMP-13 蛋白表達(dá)水平明顯降低，從組織病理和蛋白分子角度證實(shí)白藜蘆醇能減少組織分解，促進(jìn)軟骨合成，抑制炎癥發(fā)展。本研究結(jié)果顯示：白藜蘆醇組大鼠炎癥相關(guān)基因表達(dá)水平明顯降低， 軟骨合成的相關(guān)基因表達(dá)水平明顯升高。本研究從不同方面明確了白藜蘆醇對(duì)TMJOA 的治療效果， 與相關(guān)研究［18］ 結(jié)果一致。

Sirts 是高度保守的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+） 依賴的組蛋白/蛋白去乙酰化酶中Sirt2 家族成員，為長(zhǎng)壽和健康的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器［19］。Sirt 與多種細(xì)胞信號(hào)通路有關(guān)， 包括抗炎、衰老、凋亡、DNA 損傷修復(fù)、自噬和調(diào)節(jié)細(xì)胞能量及氧化還原狀態(tài)下的代謝［20］。Sirt1 是Sirtuin 家族中最流行的同源物， 可防御關(guān)節(jié)軟骨的氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡自噬等，可改善OA 進(jìn)展［21］。白藜蘆醇作為公認(rèn)的Sirt1 特異性激活劑， 可能通過激活Sirt1 進(jìn)一步發(fā)揮作用。研究［22-23］ 發(fā)現(xiàn)：mTOR 作為一種重要的自噬負(fù)調(diào)節(jié)因子，其介導(dǎo)的信號(hào)通路與OA 的病程及發(fā)展有密切關(guān)聯(lián)， 使用mTOR 抑制劑或特異性敲除該基因可極大地降低OA 程度。其中，PI3K-Akt-mTOR 作為調(diào)控mTOR 的經(jīng)典路徑之一， 在自噬的調(diào)控中發(fā)揮重要的作用［24］， 提示白藜蘆醇可能是通過激活Sirt1 基因后，抑制PI3K-Akt-mTOR 通路，從而激活自噬抑制凋亡，抑制OA 發(fā)展。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠TMJ 組織中Sirt1 蛋白表達(dá)水平升高， PI3K-Akt-mTOR 通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低。Sirt1 mRNA 表達(dá)水平升高，PI3K、Akt 和mTOR mRNA 表達(dá)水平降低， 與MARI?O 等［25］ 的研究結(jié)果一致。

綜上所述， 白藜蘆醇能夠通過激活Sirt1 抑制PI3K-Akt-mTOR 通路，信號(hào)通路的抑制可能進(jìn)一步導(dǎo)致軟骨細(xì)胞自噬活動(dòng)的增加，從而達(dá)到保護(hù)軟骨細(xì)胞治療TMJOA 的效果。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：孫高參與文獻(xiàn)檢索、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)整理、實(shí)驗(yàn)操作和論文撰寫，何靜、趙琪、石劍虹、廖智羚、田原野和吳國(guó)民參與文獻(xiàn)檢索及論文審校。

[參考文獻(xiàn)]

［1］ STOCUM D L， ROBERTS W E. Part Ⅰ： development

and physiology of the temporomandibular joint［J］. Curr

Osteoporos Rep， 2018， 16（4）： 360-368.

［2］ LEE W S， KIM H J， KIM K I， et al. Intra-articular

injection of autologous adipose tissue-derived

mesenchymal stem cells for the treatment of knee

osteoarthritis： a phase Ⅱb， randomized， placebocontrolled

clinical trial［J］. Stem Cells Transl Med，

2019， 8（6）： 504-511.

［3］ HAMERMAN D. The biology of osteoarthritis［J］.

N Engl J Med， 1989， 320（20）： 1322-1330.

［4］ ZHAO Y， GAN Y H. Combination of hyperlipidemia

and 17β-Estradiol induces TMJOA-like pathological

changes in rats［J］. Oral Dis， 2023， 29（8）： 3640-3653.

［5］ STOUSTRUP P， TWILT M. Therapy. Intra-articular

steroids for TMJ arthritis： caution needed［J］. Nat Rev

Rheumatol， 2015， 11（10）： 566-567.

［6］ ENGLUND M， ROOS E M， LOHMANDER L S.

Impact of type of meniscal tear on radiographic and

symptomatic knee osteoarthritis： a sixteen-year followup

of meniscectomy with matched controls［J］. Arthritis

Rheum， 2003， 48（8）： 2178-2187.

［7］ ZHANG S P， YAP A U J， TOH W S. Stem cells for

temporomandibular joint repair and regeneration ［J］.

Stem Cell Rev Rep， 2015， 11（5）： 728-742.

［8］ BIASUTTO L， MATTAREI A， AZZOLINI M， et al.

Resveratrol derivatives as a pharmacological tool［J］.

Ann N Y Acad Sci， 2017， 1403（1）： 27-37.

［9］ KUR?VIETIEN? L， STANEVI?IEN? I，

MONGIRDIEN? A， et al. Multiplicity of effects and

health benefits of resveratrol［J］. Medicina， 2016，

52（3）： 148-155.

［10］LIN T C， LIN J N， YANG I H， et al. The combination

of resveratrol and Bletilla striata polysaccharide

decreases inflammatory markers of early osteoarthritis

knee and the preliminary results on LPS-induced OA

rats［J］. Bioeng Transl Med， 2022， 8（4）： e10431.

［11］LONG Z Y， XIANG W， LI J， et al. Exploring the

mechanism of resveratrol in reducing the soft tissue

damage of osteoarthritis based on network pharmacology

and experimental pharmacology ［J］. Evid Based

Complementary Altern Med， 2021， 2021： 9931957.

［12］ZHOU Z Q， DENG Z H， LIU Y W， et al. Protective

effect of SIRT1 activator on the knee with

osteoarthritis［J］. Front Physiol， 2021， 12： 661852.

［13］YUCE P， HOSGOR H， RENCBER S F， et al. Effects

of intra-articular resveratrol injections on cartilage

destruction and synovial inflammation in experimental

temporomandibular joint osteoarthritis ［J］. J Oral

Maxillofac Surg， 2021， 79（2）： 344.e1-344.e12.

［14］IZAWA T， HUTAMI I R， TANAKA E. Potential role

of rebamipide in osteoclast differentiation and mandibular

condylar cartilage homeostasis［J］. Curr Rheumatol Rev，

2018， 14（1）： 62-69.

［15］LEI J， HAN J H， LIU M Q， et al. Degenerative

temporomandibular joint changes associated with recentonset

disc displacement without reduction in adolescents

and young adults［J］. J Cranio Maxillo Facial Surg，

2017， 45（3）： 408-413.

［16］YI H， ZHANG W， CUI Z M， et al. Resveratrol

alleviates the interleukin-1β -induced chondrocytes injury

through the NF-κB signaling pathway［J］. J Orthop Surg

Res， 2020， 15（1）： 424.

［17］LI M， YUAN Z P， YU F， et al. Microfluidic-based

screening of resveratrol and drug-loading PLA/Gelatine

nano-scaffold for the repair of cartilage defect［J］. Artif

Cells Nanomed Biotechnol， 2018， 46（sup1）： 336-346.

［18］褚云峰， 于紅燕， 楊 琪， 等. 白藜蘆醇在骨關(guān)節(jié)炎中

的作用及機(jī)制研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志， 2022，

28（9）： 1351-1355.

［19］CORBI G， CONTI V， SCAPAGNINI G， et al. Role

of sirtuins， calorie restriction and physical activity in

aging［J］. Front Biosci （Elite Ed）， 2012， 4（2）：

768-778.

［20］YACOUB R， LEE K， HE J C. The role of SIRT1 in

diabetic kidney disease［J］. Front Endocrinol， 2014，

5： 166.

［21］FENG K， CHEN Z X， LIU P C， et al. Quercetin

attenuates oxidative stress-induced apoptosis via SIRT1/

AMPK-mediated inhibition of ER stress in rat

chondrocytes and prevents the progression of

osteoarthritis in a rat model［J］. J Cell Physiol， 2019，

234（10）： 18192-18205.

［22］XUE J F， SHI Z M， ZOU J， et al. Inhibition of PI3K/

AKT/mTOR signaling pathway promotes autophagy of

articular chondrocytes and attenuates inflammatory

response in rats with osteoarthritis ［J］. Biomed

Pharmacother， 2017， 89： 1252-1261.

［23］ZHANG Y， VASHEGHANI F， LI Y H， et al.

Cartilage-specific deletion of mTOR upregulates

autophagy and protects mice from osteoarthritis［J］. Ann

Rheum Dis， 2015， 74（7）： 1432-1440.

［24］XU Z R， HAN X， OU D M， et al. Targeting PI3K/

AKT/mTOR-mediated autophagy for tumor therapy［J］.

Appl Microbiol Biotechnol， 2020， 104（2）： 575-587.

［25］MARI?O G， MORSELLI E， BENNETZEN M V， et al.

Longevity-relevant regulation of autophagy at the level of

the acetylproteome［J］. Autophagy， 2011， 7（6）： 647-649.