EGCG和EGCG-3Me對(duì)根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的作用

余昊翰 張凌 李芳 劉正雅 李銀花 陳吉華

EGCG和EGCG-3Me對(duì)根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的作用

余昊翰 張凌 李芳 劉正雅 李銀花 陳吉華

目的評(píng)價(jià)表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)及其甲基化修飾物(EGCG-3Me)改性粘接劑對(duì)根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的作用。方法將質(zhì)量濃度為400 μg/ml的EGCG及EGCG-3Me添加到全酸蝕粘接劑Single Bond 2(SB2)中，制備改性粘接劑E-SB2及E3-SB2，SB2為對(duì)照組。激光共聚焦顯微鏡和分光光度法檢測(cè)改性粘接劑抗糞腸球菌的性能。微拉曼光譜儀檢測(cè)粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率。制備纖維樁粘接試件，用于即刻和老化后的微推出實(shí)驗(yàn)。結(jié)果改性粘接劑可以抑制糞腸球菌生物膜形成，且EGCG-3Me作用更顯著。 改性粘接劑與SB2的雙鍵轉(zhuǎn)化率和即刻微推出粘接強(qiáng)度差異無(wú)顯著性(Pgt;0.05)。老化后改性粘接劑的微推出粘接強(qiáng)度顯著高于SB2(Plt;0.05)。結(jié)論EGCG和EGCG-3Me改性的粘接劑均可抑制糞腸球菌增殖并提高樹脂-根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性，EGCG-3Me抗菌性能較佳。

表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)； 甲基化表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG-3Me)； 抗菌； 雙鍵轉(zhuǎn)化率； 微推出粘接強(qiáng)度； 冷熱循環(huán)

纖維樁在殘根、殘冠的保存治療中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，已逐漸取代傳統(tǒng)的鑄造樁核金屬樁成為主流的修復(fù)方式。但是，近年來(lái)纖維樁修復(fù)的遠(yuǎn)期成功率成為備受廣大學(xué)者和臨床醫(yī)生關(guān)注的問(wèn)題[1-2]。細(xì)菌感染、繼發(fā)齲以及纖維樁失去粘接力從根管中脫落都是導(dǎo)致纖維樁修復(fù)失敗的常見問(wèn)題[3-4]。因此，開發(fā)具有抗菌和提高根管牙本質(zhì)粘接穩(wěn)定性的功能性粘接劑，是延長(zhǎng)纖維樁修復(fù)體使用壽命的一項(xiàng)有效措施。本研究擬通過(guò)EGCG及EGCG-3Me對(duì)牙本質(zhì)粘接劑進(jìn)行功能改性，測(cè)定改性后粘接劑對(duì)根管常見致病菌糞腸球菌的抗菌性能、粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率(degree of conversion，DC)以及冷熱循環(huán)老化前后粘接劑與根管牙本質(zhì)的粘接性能，初步探索EGCG及EGCG-3Me功能改性的粘接劑對(duì)根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的作用，以期為提高纖維樁遠(yuǎn)期修復(fù)效果提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

全酸蝕粘接劑Single Bond 2(N689951，3M ESPE，美國(guó))；復(fù)合樹脂F(xiàn)iltekTM Z250(N655907，3M ESPE，美國(guó))；35%磷酸凝膠Ultra-Etch(ET4N6437，Ultradent Products，美國(guó))；腦心浸液培養(yǎng)基(Gibco，美國(guó))；EGCG標(biāo)準(zhǔn)品[(-)-Epigallocatechin gallate analytical standard, Sigma， 美國(guó)]；EGCG-3Me(實(shí)驗(yàn)室制備)；紫外可見分光光度計(jì)(UV-2550，Shimadzu,日本)；LED光固化燈( EliparTMS10,3M ESPE，美國(guó))；活死菌染色試劑盒LIVE/DEAD?BacLightTMBacterial Viability Kit L7012(Molecular Probes，美國(guó))；慢速金剛石刀片切割機(jī)(沈陽(yáng)科晶自動(dòng)化設(shè)備制造有限公司)；超聲波細(xì)胞粉碎儀(天津科萊恩)；萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)(AGS-10-KN，Shimadzu，日本)；激光共聚焦顯微鏡(FluoViewTMFV1000，Olympus，日本)；微拉曼光譜儀(HR800，Horiba JOBIN YVON，法國(guó))。

1.2 改性粘接劑的制備

參考Du等[5]方法將EGCG和EGCG-3Me粉末以400 μg/ml的濃度添加至商品粘接劑Single Bond 2(SB2)中并充分?jǐn)嚢?，制備成改性粘接劑樣本。?shí)驗(yàn)分組如下：①EGCG 400 μg/ml改性Single Bond 2(E-SB2)；②EGCG-3Me 400 μg/ml改性Single Bond 2(E3-SB2)；③Single Bond 2(SB2)。

1.3 改性粘接劑抗菌性能檢測(cè)

1.3.1 試件制備 粘接劑抗菌性能檢測(cè)的試件制備參考Du等[5]的實(shí)驗(yàn)。每組制備6 個(gè)試件，環(huán)氧乙烷熏蒸消毒，分裝備用[6]。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)及接種 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[5]，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及接種，菌種ATCC 29212由第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。細(xì)菌培養(yǎng)完成后對(duì)各組試件進(jìn)行漂洗，并按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分成2 組，每組3 個(gè)，分別用于激光共聚焦顯微鏡及分光光度計(jì)檢測(cè)。

1.3.3 試件表面生物膜觀察 根據(jù)Fang等[6]的描述，對(duì)試件表面細(xì)菌生物膜進(jìn)行染色和觀察。使用激光共聚焦顯微鏡配套軟件FV10-ASW 3.1 Viewer(Olympus，日本)采集并分析圖像。

參考Du等的實(shí)驗(yàn)[5]，檢測(cè)每組試件表面生物膜混懸液的A600值，每組最終值取各組試件檢測(cè)值的平均值。

1.4 微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試

1.4.1 根管預(yù)備及纖維樁粘接 經(jīng)患者知情同意，取因牙周病或正畸治療需要拔除的無(wú)齲單根前磨牙30 顆，按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3 組，每組10 顆。參考Zhang等[7]的研究，對(duì)牙根進(jìn)行根管預(yù)備和樁道預(yù)備，采用全酸蝕粘接技術(shù)，分別使用上述3 種粘接劑和RelyX-ARC(3M ESPE，美國(guó))樹脂水門汀粘固纖維樁。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組的試件隨機(jī)分為2 個(gè)亞組，分別用于即刻微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試和老化處理后進(jìn)行微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試。本研究使用冷熱循環(huán)5 000 次作為老化方式(5 ℃和55 ℃水浴，各溫度浸漬時(shí)間60 s)。

1.4.2 微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試 參考Zhang[7]等的研究，制備微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試試件并參考其測(cè)試參數(shù)進(jìn)行測(cè)試。探頭加載速度為0.5 mm/min，將應(yīng)力-時(shí)間曲線上波形陡降處的應(yīng)力值計(jì)為最大斷裂載荷處Fmax(N)。使用游標(biāo)卡尺測(cè)量試件纖維樁橫截面冠向半徑R(mm)，根向半徑r(mm)和厚度H(mm)，數(shù)據(jù)精確到0.01 mm。用如下公式計(jì)算粘接面積S(mm2)以及粘接強(qiáng)度P(MPa)：P=Fmax/S，S=π(R+r)[H2+ (R-r)2]1/2。

1.5 雙鍵轉(zhuǎn)化率測(cè)試

取人無(wú)齲單根前磨牙18 顆，按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3 組，每組6 顆。按照方法“1.4.1”進(jìn)行根管預(yù)備和樁道預(yù)備。每組取3 顆牙根，沿牙體長(zhǎng)軸的方向縱劈為二等份，暴露根管牙本質(zhì)。表面酸蝕處理后涂布各組粘接劑，置于微拉曼光譜儀下，選取牙根上、中、下3 個(gè)部分隨機(jī)進(jìn)行點(diǎn)檢測(cè)。每組剩余的3顆牙根，按照“1.4.1”中描述的方法進(jìn)行纖維樁粘接，然后將牙根沿牙體長(zhǎng)軸縱分為二。選取牙根上、中、下3 個(gè)部分選取隨機(jī)位置，按照根方牙本質(zhì)→粘接劑→樹脂水門汀的順序進(jìn)行線掃。使用配套軟件LabSpec 5采集光譜圖，使用Origin 9.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，得到粘接劑固化前特征峰值：記為r1 640 cm-1和r1 608 cm-1；粘接劑固化后特征峰值：記為R1 640 cm-1和R1 608 cm-1。用下面的公式計(jì)算粘接劑的雙鍵轉(zhuǎn)化率(degree of conversion，DC)[8]：

DC(%)=[1-(R1 640 cm-1/R1 608 cm-1)/(r1 640 cm-1/r1 608 cm-1)]× 100(%)

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均具備方差齊性(Levene's test,Plt;0.05)，使用SPSS 13.0軟件(SPSS Inc, Chicago, USA)對(duì)微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試結(jié)果進(jìn)行雙因素方差分析，試件表面生物膜A600值以及雙鍵轉(zhuǎn)化率進(jìn)行單因素方差分析，選擇Tukey檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，Plt;0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 抗菌性能

熒光染色標(biāo)記后，激光共聚焦顯微鏡下，活著的細(xì)菌被染為綠色，死亡的細(xì)菌被染為紅色(圖 1)。SB2組粘接劑固化后表面粘附著一層非常密集的細(xì)菌(圖 1A)，其中死亡細(xì)菌(紅色)占總細(xì)菌量的比例很??；E-SB2組粘接劑表面細(xì)菌總數(shù)量較SB2組明顯減少(圖 1B)，且死亡細(xì)菌(紅色)所占比例有所增加。E3-SB2組粘接劑表面細(xì)菌與SB2組和E-SB2組相比，細(xì)菌總量顯著減少，而且死亡細(xì)菌(紅色)占總菌量比例明顯增加(圖 1C)。

試件表面生物膜吸光度值A(chǔ)600值結(jié)果見圖 2。本實(shí)驗(yàn)中，A600值可以反應(yīng)試件表面附著的細(xì)菌的數(shù)量。單因素方差分析顯示，粘接劑種類對(duì)A600值有顯著影響(Plt;0.001)。組間兩兩比較顯示，E3-SB2組最低， E-SB2組及SB-2組依次升高(Plt;0.001)。

圖 1 固化后粘接劑表面細(xì)菌生物膜的激光共聚焦顯微鏡觀察

圖 2 固化后粘接劑表面細(xì)菌生物膜A600值

Fig 2 A600values of E. faecalis biofilms on the specimens of cured adhesives

2.2 微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試

各實(shí)驗(yàn)組微推出粘接強(qiáng)度的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差見表 1。雙因素方差分析顯示，粘接劑種類對(duì)微推出粘接強(qiáng)度無(wú)顯著影響(P=0.477)，老化處理對(duì)微推出粘接強(qiáng)度有顯著影響(P=0.004)，粘接劑種類和老化處理之間無(wú)顯著交互作用(P=0.261)。Tukey檢驗(yàn)組間兩兩比較顯示，各實(shí)驗(yàn)組間的即刻微推出粘接強(qiáng)度差異無(wú)顯著性(Pgt;0.05)。冷熱循環(huán)老化5 000 次后，各組微推出粘接強(qiáng)度較老化前均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(Plt;0.05)。老化后，E-SB2和E3-SB2組微推出粘接強(qiáng)度均明顯高于SB2組(Plt;0.05)，E-SB2組和E3-SB2組老化后的微推出粘接強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Pgt;0.05)。

2.3 粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率測(cè)試

Tab 1 Push-out bond strength (MPa， ±s, n=10)

注： 同一列間，相同數(shù)字表示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)；同一行間，相同的大寫字母表示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)

各實(shí)驗(yàn)組雙鍵轉(zhuǎn)化率的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差見表 2。單因素方差分析顯示，粘接劑種類對(duì)雙鍵轉(zhuǎn)化率無(wú)顯著影響(Pgt;0.05)。組間兩兩比較顯示，對(duì)照組3 種粘接劑的雙鍵轉(zhuǎn)化率差異均無(wú)顯著性(Pgt;0.05)。

Tab 2 Conversion rate of the adhensives (MPa， ±s, n=6)

注： 同一列間，相同大寫字母表示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Pgt;0.05

3 討 論

糞腸球菌(Enterococcusfaecalis，E.faecalis)是根管內(nèi)最常見的致病細(xì)菌之一[9]。牙本質(zhì)-樹脂粘接界面在口腔中因溫度變化、咬合力以及粘接劑本身性能等影響產(chǎn)生微滲漏[10]，有利于細(xì)菌侵入牙體組織，進(jìn)而引發(fā)修復(fù)體邊緣繼發(fā)齲或根管的逆行性感染[10]。EGCG可以抑制多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，將EGCG添加至粘接劑中，其抗菌作用不隨水存老化時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱[5]。然而，EGCG穩(wěn)定性較差，在生理?xiàng)l件下易發(fā)生變性[11]。EGCG-3Me穩(wěn)定性好，更易溶于血液，且抗過(guò)敏、抗血管緊張素、抗結(jié)核分枝桿菌等方面均優(yōu)于EGCG[12-14]。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，當(dāng)EGCG和EGCG-3Me的濃度為400 μg/ml時(shí)，試件表面粘附的細(xì)菌總數(shù)量明顯下降且細(xì)菌中死菌數(shù)量明顯增加。同濃度下，EGCG-3Me對(duì)糞腸球菌生長(zhǎng)的抑制作用更強(qiáng)。A600結(jié)果顯示，E-SB2和E3-SB2組的試件表面糞腸球菌生物膜的細(xì)菌數(shù)量顯著低于SB2組，且E3-SB2組低于E-SB2組(Plt;0.05)。EGCG可能通過(guò)抑制細(xì)菌的葉酸代謝、誘導(dǎo)細(xì)菌內(nèi)氧化應(yīng)激的發(fā)生或產(chǎn)生羥自由基等機(jī)制殺傷細(xì)菌[5,15]。此外，它可以減少糞腸球菌分泌明膠酶、膠原鏈接抗原、細(xì)胞溶素以及蛋白酶等毒力因子的能力，抑制細(xì)菌生物膜的形成[16]。EGCG-3Me對(duì)某些革蘭氏陽(yáng)性菌的抗菌作用弱于EGCG[11]，可能是因?yàn)镋GCG-3Me結(jié)構(gòu)中的一個(gè)羥基被甲基所取代，其產(chǎn)生羥自由基的能力減弱，進(jìn)而其抗菌效果降低。本研究中，EGCG-3Me改性的粘接劑表現(xiàn)出更好的抗糞腸球菌生物膜形成的作用?？赡苁荅GCG-3Me結(jié)構(gòu)中的甲基增強(qiáng)了分子的穩(wěn)定性和親脂性，有利于EGCG-3Me的穩(wěn)定及其與細(xì)菌細(xì)胞膜的結(jié)合能力，進(jìn)而增強(qiáng)其抗菌效果[17]。

“MMPs(基質(zhì)金屬蛋白酶)降解牙本質(zhì)膠原”被認(rèn)為是牙本質(zhì)-樹脂粘接界面退變的主要機(jī)制[18]。氯己定、乙二胺四乙酸、季銨鹽類抗菌單體等外源性MMPs抑制劑被學(xué)者們用來(lái)抑制MMPs的活性，從而保護(hù)牙本質(zhì)-樹脂粘接界面[19]。研究證明，EGCG對(duì)MMP-2和MMP-9有明顯的抑制作用[20]，EGCG改性粘接劑可以促進(jìn)冠方牙本質(zhì)粘接的穩(wěn)定性[5]。EGCG及EGCG-3Me為茶葉提取物，相較于化學(xué)類MMPs抑制劑毒性小，應(yīng)用于口腔中更安全[5]。冷熱循環(huán)老化5 000 次可以加速冠方牙本質(zhì)-樹脂粘接界面的退行性變[21]。本研究中，各組微推出粘接強(qiáng)度在冷熱循環(huán)老化5 000 次后均顯著降低，證實(shí)冷熱循環(huán)5 000 次用于模擬纖維樁修復(fù)體在口內(nèi)的老化效果的可行性。微推出粘接強(qiáng)度測(cè)試顯示， EGCG和EGCG-3Me可以顯著提高樹脂-根管牙本質(zhì)粘接界面的穩(wěn)定性。EGCG和EGCG-3Me可能是通過(guò)抑制牙本質(zhì)源性MMPs的活性，進(jìn)而提高樹脂-根管牙本質(zhì)粘接界面的穩(wěn)定性。學(xué)者認(rèn)為，EGCG通過(guò)改變MMPs的結(jié)構(gòu)、與鋅離子發(fā)生螯合作用影響MMPs活化來(lái)抑制MMPs的作用[20]。EGCG-3Me對(duì)MMPs的抑制作用目前尚未見報(bào)道，其作用機(jī)制可能與EGCG相似。有報(bào)道稱，隨著EGCG結(jié)構(gòu)中甲基的增多，其對(duì)蛋白酶體的抑制作用降低[11]；同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，隨著結(jié)構(gòu)中甲基的增多，EGCG對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制作用有所提高[12]。本研究的結(jié)果顯示，EGCG-3Me及EGCG改性粘接劑冷熱循環(huán)5 000 次后的微推出粘接強(qiáng)度差異無(wú)顯著性，提示2 種物質(zhì)提高樹脂-根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的作用相近。然而，EGCG-3Me在中性以及堿性環(huán)境中，穩(wěn)定性均優(yōu)于EGCG。在長(zhǎng)期復(fù)雜的口腔環(huán)境中，EGCG-3Me可能會(huì)表現(xiàn)出更持久的生物活性作用。在后期的實(shí)驗(yàn)中，我們將通過(guò)檢測(cè)EGCG和EGCG-3Me對(duì)牙源性MMPs活性的抑制作用，深入探討它們抗MMPs的作用以及提高根管牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的可能機(jī)制。

雙鍵轉(zhuǎn)化率的結(jié)果顯示，在EGCG和EGCG-3Me的添加濃度為400 μg/ml時(shí)，粘接劑固化性能并未受到影響。Du等[5]采用了傅里葉紅外光譜法檢測(cè)粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率，發(fā)現(xiàn)當(dāng)EGCG的添加量達(dá)到300 μg/ml時(shí)，粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率輕微下降，但數(shù)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩種檢測(cè)方法所得到的結(jié)果一致。因此，采用離體牙-纖維樁粘接模型和微拉曼光譜儀檢測(cè)粘接劑雙鍵轉(zhuǎn)化率是一種可靠的方法，具有較好的研究前景。

4 結(jié) 論

綜上所述，本研究初步證明將400 μg/ml EGCG和EGCG-3Me添加到全酸蝕粘接劑Single Bond 2中對(duì)其進(jìn)行功能改性具有可行性。改性粘接劑E3-SB2較E-SB2 表現(xiàn)出更好的抗糞腸球菌的作用。提示改性粘接劑E3-SB2用于有根尖周感染或根管感染病史的患牙的纖維樁修復(fù)，具有更好的遠(yuǎn)期應(yīng)用前景。

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(收稿： 2016-09-30 修回： 2016-10-10)

TheeffectsofEGCGandEGCG-3Meonthebondingstabilityofdentin-adhensivetointraradiculardentin

YUHaohan1，ZHANGLing1，LIFang1，LIUZhengya1，LIYinhua2，CHENJihua1.

1. 710032Xi'an,StateKeyLaboratoryofMilitaryStomatologyamp;NationalClinicalResearchCenterforOralDiseasesamp;ShaanxiKeyLaboratoryofStomatology,DepartmentofProsthodontics,SchoolofStomatology,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,China; 2.NationalResearchCenterofEngineeringTechnologyforUtilizetionofFunctionalIngredientsfromBotanicals,KeyLaboratoryofTeaScience,MinistryofEducation,HunanAgriculturalUniversity,Changsha

Objective: To evaluate the effect of epigallocatechin-3-gallate(EGCG) and epigallocatechin-3-O-(3-O-methyl)-gallate(EGCG-3Me) on the anti-bacterial effect and the stability of intraradicular dentin-adhesive interface.MethodsEGCG and EGCG-3Me with the concentration of 400 μg/ml were incorporated into Single Bond 2(SB2) respectively to obtain 2 modified adhesives E-SB2 and E3-SB2. Confocal laser scanning microscopy(CLSM) and ultraviolet spectrophotometry were used to evaluate the anti-bacterial effect of the modified adhesives. Micro-Raman spectrum was used to test the degree of conversion(DC) of the adhesives. Push-out bond strength test was conducted to examine the immediate bond strength and the bond strength after themocycling.ResultsE-SB2 and E3-SB2 both showed inhibiting effect on the proliferation ofE.faecalis, while E3-SB2 performed stronger inhibiting effect. DC and the immediate push-out bond strength of SB2 were not decreased with the incorporation of EGCG or EGCG-3Me(Pgt;0.05). E-SB2 and E3-SB2 showed significantly higher push-out bond strengths than that of SB2(Plt;0.05) after themocycling.ConclusionEGCG and EGCG-3Me modified adhesives have anti-bacterial effect and can enhance the stability of bonding between intraradicular dentin and adhesive，EGCG-3Me may have stronger anti-bacterial effect.

Epigallocatechin-3-gallate(EGCG);Epigallocatechin-3-O-(3-O-methyl)-Gallate(EGCG-3Me);Anti-bacterial;Degreeofconversion;Push-outbondstrength;Thermocycling

國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào)： 51373198，81130078，81571019)； 陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)： 2015KTCL03-08)； 長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(編號(hào)： IRT13051)

710032 西安， 軍事口腔醫(yī)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 口腔疾病國(guó)家臨床醫(yī)學(xué)研究中心， 陜西省口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院修復(fù)科(余昊翰 張凌 李芳 劉正雅 陳吉華)； 國(guó)家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心， 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(李銀花)

張凌 029-84776467 E-mail: ciaociaofan@qq.com

R783.1

A

10.3969/j.issn.1001-3733.2017.02.007