移液槍在小鼠內(nèi)眥取血中的應(yīng)用

張 穎，任 波，田 楓

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京 100191)

移液槍在小鼠內(nèi)眥取血中的應(yīng)用

張 穎，任 波，田 楓*

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京 100191)

目的介紹移液槍用于小鼠內(nèi)眥取血的方法。方法20只C57BL/6J雄性小鼠，分為移液槍組和毛細(xì)管組，分別用移液槍和毛細(xì)管進(jìn)行小鼠內(nèi)眥定量取血3次，記錄兩組采血完成時(shí)間和采血成功率。結(jié)果兩組采血成功率為100%，但移液槍組采血完成時(shí)間快于毛細(xì)血管組，且差異有顯著性(P< 0.05)。結(jié)論直接應(yīng)用移液槍為小鼠內(nèi)眥取血提供了一種簡(jiǎn)便易行且相對(duì)安全的方法。

小鼠；內(nèi)眥取血；移液槍

小鼠采血是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的操作技術(shù)之一，常見(jiàn)的小鼠采血方法有內(nèi)眥采血、下頜靜脈采血、斷頭采血、心臟采血、斷尾采血等[1]，其中內(nèi)眥采血是動(dòng)物在活體情況下，能夠采到相對(duì)多的血量且操作簡(jiǎn)便的方法，采血時(shí)一般采用毛細(xì)管刺破小鼠內(nèi)眥取血。在實(shí)際工作中，我們嘗試使用移液槍和槍頭替代毛細(xì)管進(jìn)行內(nèi)眥取血，取得了較好的效果。本文以C57BL/6J小鼠為例，探討移液槍及槍頭在內(nèi)眥取血中的應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)C57BL/6J小鼠，20只，雄性，6～8周，18～22 g，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部[SCXK (京) 2016-0010],飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部屏障環(huán)境中[SYXK (京) 2016-0041],飼喂全價(jià)SPF級(jí)大、小鼠繁殖飼料(北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn))[SCXK (京) 2014-0010]。

1.2主要儀器

20 μL移液槍(大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器公司生產(chǎn))，無(wú)菌槍頭，無(wú)菌毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)生產(chǎn))。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

注：A：采血前；B：采血中。圖1 移液槍用于內(nèi)眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.1 Blood collection from the inner canthus using a pipettor

實(shí)驗(yàn)分為移液槍組和毛細(xì)管組兩組，每組10只小鼠。應(yīng)用移液槍取血時(shí)，左手抓取、保定小鼠，將一側(cè)眼球突出，右手持20 μL移液槍將槍頭約水平角度插入小鼠內(nèi)眼瞼(感覺(jué)有落空感)，即拔出槍頭，血液自行流入EP管內(nèi)(圖1)。應(yīng)用毛細(xì)管取血時(shí)，左手抓取、保定小鼠，將一側(cè)眼球突出，右手持已備好的毛細(xì)管沿45°角插入小鼠內(nèi)眼瞼(感覺(jué)有落空感)，后捻轉(zhuǎn)毛細(xì)管，血液延管壁流入EP管內(nèi)(圖2)。小鼠每隔7 d采血一次，共采血3次。本實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)批準(zhǔn)(IACUC：LA2013-18)，實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷，取血前眼部滴加普魯卡因局麻藥，取血結(jié)束用干棉球壓迫止血。每次取血記錄完成的時(shí)間，并觀察取血成功率。單次取血量> 0.1 mL，且無(wú)溶血，經(jīng)離心獲得清亮血清即為采血成功。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

注：A：采血前；B：采血中。圖2 毛細(xì)管用于內(nèi)眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.2 Blood collection from the inner canthus using a glass capillary

2 結(jié)果

2.1內(nèi)眥取血所用時(shí)間及成功率

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用移液槍和毛細(xì)管均能100%成功完成小鼠內(nèi)眥取血，移液槍組完成時(shí)間快于毛細(xì)管組，且差異有顯著性(P< 0.05)，見(jiàn)表1。

Tab.1Time consumption and success rate of blood collection from the inner canthus of mice

組別Groups取血所用時(shí)間/sTimeconsumption成功率/%Successrate移液槍組Pipettor10.2±0.6*100毛細(xì)管組Glasscapillary10.9±0.8100

注：與毛細(xì)管組相比，*P< 0.05。

Note. Compared with the capillary group,*P< 0.05.

2.2移液槍和毛細(xì)管用于內(nèi)眥取血的比較

從固定方法、完成時(shí)間、反復(fù)采血性、小鼠掙扎程度、出血量、對(duì)眼部損傷、動(dòng)物疼痛感七個(gè)方面對(duì)移液槍和毛細(xì)管用于內(nèi)眥取血進(jìn)行比較(見(jiàn)表2)。移液槍較毛細(xì)管應(yīng)用于小鼠內(nèi)眥取血具有一定的優(yōu)勢(shì)，可以在小鼠采血時(shí)選擇應(yīng)用。

表2 移液槍和毛細(xì)管用于內(nèi)眥取血的比較

3 討論

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如抓取與固定方法、采血方法等，雖然已經(jīng)有較完整的實(shí)驗(yàn)方法，但在實(shí)際工作中操作者往往會(huì)摸索出更有效、更簡(jiǎn)便易行的的實(shí)驗(yàn)技巧[2-4]。

小鼠體積小，血量有限，如果需要在小鼠清醒的情況下，能夠反復(fù)采血，采到相對(duì)多的血量，而且操作簡(jiǎn)便的方法，內(nèi)眥取血法是首選。內(nèi)眥取血法一般選取毛細(xì)管進(jìn)行，但是毛細(xì)管較脆，在取血時(shí)易折斷在眼球內(nèi)。另外。有時(shí)毛細(xì)管會(huì)掉落在EP管內(nèi)，這種情況下一是使采血時(shí)間延長(zhǎng)，二是可能造成溶血。同時(shí)對(duì)于那些內(nèi)眥取血不使用局麻藥的小鼠，毛細(xì)管對(duì)動(dòng)物造成的疼痛感較強(qiáng)，動(dòng)物掙扎現(xiàn)象比較明顯，亦增加了采血難度。另外由于毛細(xì)管較硬，易造成小鼠失明、眶周感染等相關(guān)眼部損傷。

王召波等[5]采用自制取血管用于內(nèi)眥取血，取得了較好的效果。該方法是取200 μL的吸頭1支，視具體情況剪去前端長(zhǎng)0.3～0.4 cm部分。取直徑約1 mm的毛細(xì)玻璃管1支，沿吸頭上端插入并從下端拔出至吸頭與玻璃管套疊部分長(zhǎng)0.3～0.5 mm，經(jīng)酒精燈適當(dāng)燒灼，兩部分可緊密連接。使用小砂輪在適當(dāng)長(zhǎng)度切割，掰斷去除冗長(zhǎng)部分毛細(xì)管，裸露毛細(xì)管長(zhǎng)度以2.0～2.5 cm為佳。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)分析，其取血效果較佳。我們則直接使用20 μL移液槍進(jìn)行內(nèi)眥取血，亦取得了較理想的效果。

本文選用C57BL/6J雄性小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，是由于C57BL/6J雄性小鼠性格活潑，易逃脫，抓取、固定較BALB/C、ICR等小鼠更困難，內(nèi)眥取血時(shí)有一定的難度，以C57BL/6J雄性小鼠為例介紹移液槍用于內(nèi)眥采血的方法具有一定的代表性和說(shuō)服力。

由此可見(jiàn)，移液槍直接用于內(nèi)眥取血，方法簡(jiǎn)便易行，只要實(shí)驗(yàn)人員掌握內(nèi)眥取血的技術(shù)，不需要訓(xùn)練，直接應(yīng)用此法即能快速順利完成采血過(guò)程。

[1] 陳霆, 李楓棣, 鄧巍, 等. 小鼠內(nèi)眥靜脈叢注射與尾靜脈注射比較 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 24(1): 72-73.

[2] 余琛琳, 趙樂(lè), 湯球, 等. 一項(xiàng)小鼠采血新技術(shù)——頜下靜脈叢采血法 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 18(12): 53-54.

[3] 崔潔, 朱玲玉, 陳興智, 等. 一種自制的小鼠斷尾采血簡(jiǎn)易裝置 [J]. 蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 38(8): 1050-1051, 1055.

[4] 李軼倞, 張娜, 田楓. 一種簡(jiǎn)易小鼠尾靜脈注射固定法——籠蓋壓制法 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(10): 79-81.

[5] 王召波, 董靜. 自制內(nèi)毗采血器用于小鼠采血效果分析 [J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 30(1): 82-83.

Useofapipettorforbloodcollectionfromtheinnercanthusofmice

ZHANG Ying， REN Bo， TIAN Feng*

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China)

ObjectiveTo explore the practical value of a modified method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.MethodsA total of 20 male C56BL/6J mice were divided into two groups, the pipettor group and the capillary group (10 mice in each group). Blood samples were taken 3 times from the inner canthus of the mice with a pipettor or glass capillary, respectively, and the time-consumption and success rate of the two groups were recorded and compared.ResultsThe success rates of both the blood collection methods were 100%. However, in the pipettor group, the blood collection was completed faster than the capillary group with a significant difference (P< 0.05).ConclusionsIt is a relatively simple and safe method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.

Mice; Blood collection from the inner canthus; Pipettors

北京高等學(xué)校青年英才計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：YETP0057)。

張穎(1994 -)，女，技士，專業(yè)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及管理。E-mail: 1146878172@qq.com

田楓(1973 -)，女，博士，副主任技師，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究與管理方面研究。E-mail: fengtian_38@163.com

R-33

A

1671-7856(2017) 11-0084-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.11.017

2017-03-07