• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雞痘鵪鶉化弱毒株種子批的建立及鑒定

    2017-11-27 05:40:50毛婭卿孔冬妮李慧姣
    中國獸藥雜志 2017年11期
    關(guān)鍵詞:監(jiān)察所雞痘免疫原性

    毛婭卿,王 嘉,吳 濤,王 哲,孔冬妮,李 嶺,李慧姣

    (中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京100081)

    雞痘鵪鶉化弱毒株種子批的建立及鑒定

    毛婭卿,王 嘉,吳 濤,王 哲,孔冬妮,李 嶺,李慧姣*

    (中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京100081)

    為保證制苗所用毒種質(zhì)量和穩(wěn)定性,在對雞痘鵪鶉化弱毒株病毒含量、病毒純凈性、特異性、免疫原性及安全性等研究的基礎(chǔ)上,建立了雞痘鵪鶉化弱毒株種子批。將雞痘鵪鶉化弱毒F278 E1(1966年6月3日凍干)通過鵪鶉連續(xù)傳至4代(F282 E1)后,再經(jīng)雞胚傳至14代(F282 E14)。傳代毒種的鑒定結(jié)果表明:抽檢的各代次的毒種均無細菌、支原體、外源病毒污染,且病毒含量檢測穩(wěn)定,均≥106.2EID50/0.2mL。將抽檢的各代次的毒種制成活疫苗,免疫適齡雞只后均能產(chǎn)生完全保護。因此,確定雞痘鵪鶉化弱毒株基礎(chǔ)種子代數(shù)為F282 E2-E6代,生產(chǎn)用毒種繼代應不超過3代。種子批的建立,為雞痘鵪鶉化弱毒株疫苗的生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

    雞痘鵪鶉化弱毒株;種子批;建立及鑒定

    雞痘(Avian Pox)是雞的一種急性、接觸性傳染病,是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的一種重要傳染病之一[1]。成雞發(fā)病后不造成死亡,但可使病禽生長遲緩,產(chǎn)蛋下降,種禽發(fā)病時孵化率降低等,若并發(fā)其他傳染病、寄生蟲病和衛(wèi)生條件、營養(yǎng)狀況不良時也可引起大批死亡,死亡率甚至高達40%~50%。雛雞發(fā)病死亡率較高,一般5%~30%不等。

    雞痘鵪鶉化弱毒株是中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所于20世紀50-60年代開發(fā)的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品,經(jīng)過50多年來的大量實驗室試驗和田間實踐證明,該毒種毒力穩(wěn)定、安全、免疫原性好,是一株優(yōu)良的疫苗毒株[2]。為確保疫苗的有效性、純凈性和穩(wěn)定性,建立了雞痘鵪鶉化弱毒株毒種的種子批,為生產(chǎn)出合格的雞痘鵪鶉化弱毒株疫苗奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 毒種 分別取CVCC AV1003 F282 E2、E5、E9和E14代凍干毒種各2支,由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所凍干、保存。

    1.2 SPF雞及雞胚 11~12日齡雞胚、SPF雞由北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司提供。

    1.3 診斷用抗原及抗體

    1.3.1 瓊脂擴散(AGP)抗原和陽性血清 包括馬立克氏病病毒(MDV)、雞痘病毒(APV)、雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)、禽呼腸孤病毒(REOV)等AGP抗原和陽性血清,均由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所制備。

    1.3.2 血凝抑制(HI)抗原及標準陽性血清 H5、H7、H9亞型禽流感病毒(AIV)HI抗原及標準陽性血清,購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。新城疫病毒(NDV)和減蛋綜合征病毒(EDSV)HI抗原及標準陽性血清由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所制備。

    1.3.3 ELISA檢測試劑盒 包括禽白血病病毒(ALV)、禽腦脊髓炎病毒(AEV)、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)、雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)、雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)、禽呼腸孤病毒(REOV)和雞傳染性貧血病毒(CAV)等ELISA檢測試劑盒,均購自IDEXX公司。

    1.3.4 陰性血清 SPF雞血清,由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所制備。

    1.4 檢驗用培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽(T.G)、酪胨瓊脂(G.A)、葡萄糖蛋白胨湯(G.P)、改良Frey氏液體培養(yǎng)基、改良Frey氏固體培養(yǎng)基,均由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所制備。

    1.5 毒種繁殖、凍干 將毒種用滅菌生理鹽水稀釋至10-2~10-3,經(jīng)雞胚絨毛尿囊膜上接種11~12日齡SPF雞胚,每胚0.2 mL,37 ℃繼續(xù)孵育至120 h。選接種后96~120 h死胚和120 h活胚,無菌采集有水腫或痘斑的絨毛尿囊膜,混合研磨后過濾,加入蔗糖脫脂奶保護劑后,進行冷凍真空干燥。

    1.6 病毒含量及對雞胚的最小感染量測定 將E2、E5、E9和E14代毒種分別用生理鹽水進行10倍系列稀釋,取10-5、10-6、10-7三個稀釋度,經(jīng)絨毛尿囊膜接種12日齡SPF雞胚,每個稀釋度接種雞胚5個,每胚0.2 mL,置37 ℃繼續(xù)孵育至120 h,雞胚絨毛尿囊膜水腫增厚或出現(xiàn)痘斑判為感染,計算EID50和對雞胚的最小感染量[3-4]。

    1.7 純凈性 對E2、E5、E9和E14代種毒進行了純凈性檢驗,按照現(xiàn)行的 《中華人民共和國獸藥典》有關(guān)規(guī)定[5],對種毒進行細菌、霉菌、支原體和外源病毒污染檢驗,其中外源病毒污染檢驗采用雞胚法。

    1.8 免疫原性試驗 將E2、E5、E9和E14代毒種分別用滅菌生理鹽水稀釋至103.0EID50/0.1mL(含1羽份)。將50只14日齡的SPF雞分為5組,每組10只。第1、2、3、4組,翅內(nèi)側(cè)皮下分別注射E2、E5、E9和E14代病毒液0.1 mL/只(含1羽份);第5組,不注射疫苗,作為對照組。免疫接種3周后,將所有雞用APV 102株強毒攻擊(含100個最小發(fā)痘量),記錄雞群每日的發(fā)病與死亡情況。

    1.9 最小發(fā)痘量 將E2、E5、E9和E14代毒種分別用生理鹽水按裝量復原后,稀釋至10-4,每代次用3月齡SPF雞3只,將雞大腿部毛拔掉約3 cm2,取0.2 mL毒液涂抹毛囊,觀察3周,記錄發(fā)痘情況。

    1.10 對雞的安全性 將E2、E5、E9和E14代毒種用滅菌生理鹽水稀釋至104.0EID50/0.1mL(10羽份),經(jīng)肌肉接種10只7日齡SPF雞,每只10羽份,同時加5只對照雞。觀察14 d的臨床癥狀,并記錄結(jié)果。

    1.11 最小免疫劑量測定 將50只21日齡的SPF雞分為5組,第1組-第4組為接種組,第5組為對照組。接種組每只翅內(nèi)側(cè)皮下注射0.1 mL稀釋的E5代病毒液。其中第1組,接種劑量為每只雞40 EID50;第2組,接種劑量為每只雞20 EID50;第3組,接種劑量為每只雞10 EID50;第4組,接種劑量為每只雞5 EID50;第5組,不注射疫苗,作為對照組。免疫接種3周后,將所有雞用APV 102株攻擊(含100個最小發(fā)痘量),記錄雞群每日的發(fā)病與死亡情況。

    1.12 毒種保存期試驗 抽檢 1990年7月(E2代)、1993年1月(E5代)、1996年4月(E9代)三個代次的毒種,測定病毒含量測定和對雞胚的最小感染量。

    1.13 剩余水分測定 按照現(xiàn)行的《中國獸藥典》附錄進行。

    1.14 真空度測定 按照現(xiàn)行的《中國獸藥典》附錄進行。

    2 結(jié) 果

    2.1 病毒含量及對雞胚的最小感染量 E2、E5、E9和E14代凍干毒種的病毒含量及對雞胚最小感染量測定結(jié)果見表1,病毒含量在106.4~106.5EID50/0.2mL,對雞胚的最小感染量在10-5/0.2mL~10-6/0.2mL。試驗結(jié)果見表1。

    表1 毒種病毒含量及對雞胚的最小感染量Tab 1 The virus content and the minimum infective dose of chick embryo

    2.2 純凈性 雞痘鵪鶉化弱毒株毒種E2、E5、E9和E14代純凈,未受細菌、霉菌、支原體及外源病毒污染。試驗結(jié)果見表2。

    2.3 免疫原性 第1、2、3、4組雞接種后14 d,對雞痘強毒攻擊均能產(chǎn)生完全保護作用,而第5組未免疫對照雞攻毒后,10/10發(fā)病。雞痘鵪鶉化弱毒株毒種E2、E5、E9和E14代免疫原性沒有明顯差異,均具有良好的免疫原性,免疫后攻毒均獲得保護。2.4 最小發(fā)痘量 雞痘鵪鶉化弱毒株E2、E5、E9和E14代涂沫毛囊后,試驗雞均出現(xiàn)局部毛囊紅腫、結(jié)痂,涂沫皮膚有輕微水腫,10 d左右結(jié)痂開始脫落,2~3周時康復,不引起全身痘及其他反應。最小發(fā)痘量均為≤10-4/0.2mL。

    2.5 對雞的安全性 所有接種雞均健活,除接種局部出現(xiàn)紅腫、結(jié)痂,均無其他全身不良反應,精神食欲不受影響。由此證明雞痘鵪鶉化弱毒株對1周齡以上雛雞是安全的,可用于1周齡以上雛雞的免疫。試驗結(jié)果見表3。

    2.6 最小免疫劑量測定 以含40 EID50、20 EID50、10 EID50的E5代種毒接種的21日齡SPF雞,攻毒保護率均為10/10,而以含5 EID50的E5代種毒接種的21日齡SPF雞,攻毒保護率為6/10,即最小免疫量為10 EID50。試驗結(jié)果見表3。

    表2 毒種外源病毒血清學檢測結(jié)果Tab 2 Serological test of exogenous virus

    “-”表示陰性,“+”表示陽性

    "-"means negative, "+" means positive

    表3 不同接種劑量免疫攻毒保護結(jié)果Tab 3 Results of attack protection against different doses of vaccination

    2.7 保存期試驗 雞痘鵪鶉化弱毒株分別在-70 ℃以下保存22年、20年和17年進行病毒含量測定,結(jié)果病毒含量幾乎沒有變化,對雞胚最小感染量≤10-5/0.2mL,均符合《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(二〇〇〇年版)規(guī)定。試驗結(jié)果見表4。

    表4 保存前后病毒含量測定結(jié)果和對雞胚最小感染量Tab 4 The virus content before and after preservation and the minimum infective dose of chick embryo

    2.8 剩余水分測定和真空度測定 四個代次的雞痘鵪鶉化弱毒凍干毒種剩余水分測定均小于3%,真空度測定均發(fā)出紫色輝光,檢驗結(jié)果符合規(guī)定。試驗結(jié)果見表5。

    表5 毒種剩余水分與真空度測定結(jié)果Tab 5 Determination of residual water and vacuum of virus

    3 小 結(jié)

    本研究通過選用中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所雞痘鵪鶉化弱毒株CVCC AV1003 F282凍干毒種制備活疫苗,通過本動物免疫攻毒試驗表明,毒種E2、E5、E9和E14代免疫原性沒有明顯差異,均具有良好的免疫原性,免疫后攻毒均能夠產(chǎn)生完全的攻毒保護,以此為依據(jù),建立了毒種的種子批,可以確定雞痘鵪鶉化弱毒株基礎(chǔ)種子代數(shù)為F282 E2~E6代,生產(chǎn)用毒種繼代應不超過3代[6-11]。

    為保證各代次毒種質(zhì)量,本研究對E2、E5、E9和E14代次毒種分別進行安全性試驗。所有接種雞均健活,除接種局部出現(xiàn)紅腫、結(jié)痂,均無其他全身不良反應,精神食欲不受影響。由此證明雞痘鵪鶉化弱毒株對1周齡以上雛雞是安全的,可用于1周齡以上雛雞的免疫。

    通過對雞痘鵪鶉化弱毒株各代次凍干種毒抽檢病毒含量測定、純凈性、特異性、免疫原性和安全性等,證明各代次病毒傳代穩(wěn)定;純凈性檢驗均無細菌、霉菌、支原體和外源病毒污染;雞痘鵪鶉化弱毒株凍干毒種在-70 ℃及以下保存,至少可達17年。本試驗種子批的建立可為雞痘鵪鶉化弱毒株疫苗的研制,以及將來的規(guī)?;a(chǎn)提供穩(wěn)定、可靠的生產(chǎn)用種毒。

    [1] Y M Saif,A M Fadly.禽病學[M].蘇敬良,高 褔,索 勛,主譯.第 12 版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2012.

    Y M Saif,A M Fadly.Diseases of poultryM].Su J L, Gao F, Suo X, main translation. Twelfth Edition. Beijing: China Agricultural Press, 2012.

    [2] 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,中國獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心.中國獸醫(yī)菌種目錄[M].2008年版. 北京:中國科學技術(shù)出版社,2008.

    China Institute of Veterinary Drug Control, China Veterinary Culture Collection Center. Chinese veterinary species list[M]. 2008 Edition, Beijing: China Science and Technology Press, 2008.

    [3] 農(nóng)業(yè)部獸藥審評中心.獸用生物制品試驗研究技術(shù)指導原則[M].北京. 2006年版.

    Center for Veterinary Drug Ealuation, MOA. Technical guidelines for veterinary biological products test and research[M]. Beijing, 2006 Edition.

    [4] 馬興樹. 禽傳染病實驗診斷技術(shù)[M]. 北京:化學工業(yè)出版社, 2006:170-176.

    Ma X S. Avian infectious diseases laboratory diagnosis technology[M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2006:170-176.

    [5] 中國獸藥典委員會.中國人民共和國獸藥典[M].2010 年版.三部.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2010.

    Chinese Pharmacopoeia Committee. People's Republic of China Veterinary Pharmacopoeia [M]. 2010 edition. Third Volume. Beijing: China Agriculture Press, 2010.

    [6] 范書才,李 虹,朱良全,等.鴨瘟滅活疫苗種毒篩選及生產(chǎn)用種毒種子批的建立[J].中國預防獸醫(yī)學報,2009,31(6):458-461.

    Fan S C, Li H, Zhu L Q,etal. Establishment of master stocks for preparation of inactivated vaccine against duck plague [J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2009, 31 (6): 458-461.

    [7] 王新衛(wèi),賈文科,王澤霖,等.傳染性支氣管炎病毒M41株種子批的建立[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2008,36(9):3663-3664,3729.

    Wang X V, Jia WK, Wang Z L,etal. Establishment of seed batches of strain M41 of infectious bronchitis virus [J]. Anhui Agricultural Sciences, 2008, 36 (9):3663-3664, 3729.

    [8] 黃宇翔,劉力威,王志強,等.鵝細小病毒滅活疫苗種子批建立[J].中國獸藥雜志,2016,50( 4) :11-15.

    Huang Y X, Liu LW, Wang Z Q,etal. The seed lots built of goose parvovirus inactivated vaccine candidate [J]. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2016, 50 (4):11-15.

    [9] 王永錄,張永光,方玉珍,等. 口蹄疫A型滅活疫苗毒種和種子批的研究[J]. 中國獸醫(yī)科學, 2006, 36(5): 371-375.

    Wang Y L, Zhang Y G, Fang Y Z,etal. Studies on the virus seeds and seed batches of inactivated vaccine against foot-and-mouth disease virus type A[J]. Veterinary Science in China, 2006, 36 (5): 371-375.

    [10] 公殿力, 李開軍, 王艦兵, 等. 長47株麻疹減毒活疫苗純化毒種三級種子批的建立及疫苗的臨床觀察[J]. 吉林醫(yī)學, 2005, 26(4): 407.

    Gong D L, Li K J, Wang X B,etal. Establishment of three-tier virus seed library of 47 species of purified measles vaccine live and clinical observation of vaccine[J]. Jilin Medical University, 2005, 26 (4): 407.

    [11] 李萍萍, 楊曉明, 張愛華, 等. SARS病毒NS-1株三級毒種庫的建立[J]. 中國生物制品學雜志, 2005, 18(3): 227-228.

    Li P P, Yang X M, Zhang A H,etal. Construction of three-tier virus seed library of SARS virus NS-1 strain [J]. Chinese Journal of Biologicals, 2005, 18 (3): 227-228.

    (編輯:李文平)

    TheSeedLotsEstablishmentandIdentificationofAvianPoxVirus(QuailAdaptedStrain)

    MAO Ya-qing,WANG Jia,WU Tao,WANG Zhe,KONG Dong-ni,LI Ling,LI HUI-Jiao*

    (ChinainstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081,China)

    LIHUI-Jiao,E-mail:lihuijiao@ivdc.org.cn

    In order to ensure the vaccine virus seed quality and stability, avian pox virus quail adapted strain vaccine virus seed lots were established on the research basis of virus seed content, purity, specific, immunogenicity, safety and expanding propagation generations.The avian pox virus quail adapted strain attenuated F278 E1 (June 3, 1966 gelsiccation) by quail 4 passages (F282 E1), followed by chicken embryo passaged for 14 generations (F282 E14). The passaged identification results showed that the each generation of the virus had no bacteria, mycoplasma and exogenous virus pollution. The virus content was stable, no less than 106.2EID50/0.2 mL. The various generations of the virus was made live vaccine, the chickens after immunization can produce complete protection. Therefore, we ultimately determined that the master seed was F282 E2-E6 generation, the production virus following the generation should not exceed 3 generations. The establishment of the seed lot laid the foundation for avian pox virus quail adapted strain vaccine production.

    avian pox virus quail adapted strain; seed lots; establishment and identification

    10.11751/ISSN.1002-1280.2017.11.02

    2016-12-13

    A

    1002-1280 (2017) 11-0009-06

    S852.65

    毛婭卿,博士,從事獸用生物制品檢測工作。

    李慧姣。E-mail:lihuijiao@ivdc.org.cn

    猜你喜歡
    監(jiān)察所雞痘免疫原性
    中獸醫(yī)藥治療雞痘的新思路
    雞皮膚型雞痘的流行病學、臨床特征、診斷與防控
    “科學使用獸用抗菌藥”百千萬接力公益再行動技術(shù)專家團隊名單
    雞痘的診斷與防控
    豬乙型腦炎PrM-E重組腺病毒的構(gòu)建及免疫原性
    牛傳染性鼻氣管炎IBRV/JZ06-3基礎(chǔ)毒株的安全性和免疫原性研究
    一例雞痘與支原體病混合感染的診治報告
    農(nóng)業(yè)部:21省抽檢發(fā)現(xiàn)195批假獸藥
    布魯菌缺失疫苗株M5-ΔznuA和M5-Δbp26-ΔznuA的構(gòu)建及毒力和免疫原性的評估
    農(nóng)業(yè)部公布2015年第十批假獸藥查處活動的結(jié)果
    av在线天堂中文字幕| 直男gayav资源| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 岛国毛片在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中国美白少妇内射xxxbb| 小说图片视频综合网站| 精品久久久久久久久亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲av熟女| 黄色日韩在线| 国产精华一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产成人91sexporn| 亚洲无线观看免费| 好男人视频免费观看在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 99热这里只有是精品在线观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 中文字幕制服av| 久久99热这里只有精品18| 精品久久久噜噜| АⅤ资源中文在线天堂| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久99热这里只频精品6学生 | 久久久久国产网址| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜日本视频在线| 国产片特级美女逼逼视频| 最新中文字幕久久久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线天堂最新版资源| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲综合精品二区| 久久久精品94久久精品| 全区人妻精品视频| 在线播放国产精品三级| 一区二区三区免费毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 特级一级黄色大片| 久久精品国产亚洲网站| 国产成人福利小说| 欧美日本亚洲视频在线播放| 级片在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 永久免费av网站大全| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产黄片视频在线免费观看| 身体一侧抽搐| 亚洲不卡免费看| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线天堂最新版资源| 18禁动态无遮挡网站| 男女国产视频网站| 天堂中文最新版在线下载 | 亚州av有码| 九草在线视频观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产91av在线免费观看| 成人av在线播放网站| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美精品国产亚洲| 日本色播在线视频| 国产高潮美女av| 人体艺术视频欧美日本| 欧美+日韩+精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲高清免费不卡视频| 少妇的逼好多水| 日本色播在线视频| 只有这里有精品99| 国产一级毛片七仙女欲春2| 日韩国内少妇激情av| 嫩草影院精品99| 亚洲怡红院男人天堂| av福利片在线观看| 国产成人一区二区在线| av在线老鸭窝| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产麻豆成人av免费视频| 丰满少妇做爰视频| 国产精品,欧美在线| www.色视频.com| 国产精品无大码| 22中文网久久字幕| 国产精品久久久久久久电影| 久久精品国产亚洲av涩爱| 午夜福利成人在线免费观看| 三级国产精品片| 在线免费十八禁| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 少妇丰满av| 亚洲国产高清在线一区二区三| 伊人久久精品亚洲午夜| 97超碰精品成人国产| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩高清综合在线| 精品免费久久久久久久清纯| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产三级中文精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产探花在线观看一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 少妇人妻精品综合一区二区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美性感艳星| 69av精品久久久久久| 97热精品久久久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 久久99热6这里只有精品| 国产精品蜜桃在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| av专区在线播放| 九草在线视频观看| 成年女人看的毛片在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费无遮挡裸体视频| 成年版毛片免费区| 亚洲色图av天堂| 亚洲欧美日韩东京热| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产极品天堂在线| 亚洲最大成人av| 春色校园在线视频观看| 嘟嘟电影网在线观看| 99热精品在线国产| 久久久久久九九精品二区国产| 在线观看66精品国产| 精品酒店卫生间| 插逼视频在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲精品自拍成人| 高清视频免费观看一区二区 | kizo精华| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲中文字幕日韩| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日韩欧美精品v在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日韩精品有码人妻一区| 久久99热这里只有精品18| 最近最新中文字幕免费大全7| 嫩草影院入口| 男女那种视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧洲国产日韩| 一本久久精品| 国产大屁股一区二区在线视频| h日本视频在线播放| 黄片wwwwww| 国产黄色小视频在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲国产精品成人久久小说| 18+在线观看网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲av成人精品一二三区| 国产黄色小视频在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品亚洲一区二区| 九九热线精品视视频播放| 亚洲人与动物交配视频| 国产午夜精品论理片| 2021天堂中文幕一二区在线观| av在线天堂中文字幕| 国产精品国产三级国产专区5o | 激情 狠狠 欧美| 久99久视频精品免费| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美成人午夜免费资源| 永久网站在线| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜视频国产福利| 只有这里有精品99| 成人午夜高清在线视频| 九九爱精品视频在线观看| h日本视频在线播放| 久久久久久伊人网av| 国产精华一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲图色成人| 日本免费在线观看一区| 国产高清视频在线观看网站| 免费黄色在线免费观看| 免费看光身美女| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精品久久久久久av不卡| 国产免费又黄又爽又色| 免费看a级黄色片| 日韩欧美三级三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| www.av在线官网国产| 在线观看一区二区三区| 国产在视频线精品| 看片在线看免费视频| av在线观看视频网站免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 九九爱精品视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 嫩草影院精品99| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品一及| 舔av片在线| 久久久国产成人免费| 色尼玛亚洲综合影院| 免费av不卡在线播放| 亚洲精品成人久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 三级毛片av免费| 特大巨黑吊av在线直播| 午夜免费男女啪啪视频观看| 大话2 男鬼变身卡| 日韩中字成人| 嫩草影院新地址| a级毛色黄片| 特大巨黑吊av在线直播| 18禁动态无遮挡网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 小说图片视频综合网站| av免费观看日本| 97超视频在线观看视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一区二区三区乱码不卡18| 国产色爽女视频免费观看| 在线播放无遮挡| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 一个人观看的视频www高清免费观看| 一边亲一边摸免费视频| 在线天堂最新版资源| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品不卡视频一区二区| 国产淫语在线视频| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲人成网站在线播| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久色成人| 成人无遮挡网站| 最近视频中文字幕2019在线8| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品av视频在线免费观看| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品,欧美精品| 小说图片视频综合网站| 看免费成人av毛片| 搞女人的毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 天堂网av新在线| 黄色欧美视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 黄色欧美视频在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费人成在线观看视频色| 午夜久久久久精精品| av线在线观看网站| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产久久久一区二区三区| 极品教师在线视频| 极品教师在线视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产一级毛片在线| 内地一区二区视频在线| 免费黄网站久久成人精品| 免费看日本二区| 99久国产av精品| 国产精品蜜桃在线观看| 国产视频内射| 最近的中文字幕免费完整| 青青草视频在线视频观看| 日韩av在线大香蕉| 亚洲精品国产av成人精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成年免费大片在线观看| 久久久精品大字幕| 在线a可以看的网站| 少妇的逼水好多| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 视频中文字幕在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲国产最新在线播放| 男人的好看免费观看在线视频| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 99热这里只有是精品50| 尾随美女入室| 中文字幕av成人在线电影| 亚州av有码| 深爱激情五月婷婷| 久久久久九九精品影院| 69av精品久久久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 大香蕉97超碰在线| 午夜激情福利司机影院| 国产色爽女视频免费观看| 高清视频免费观看一区二区 | 国产视频首页在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲最大成人中文| 18+在线观看网站| 真实男女啪啪啪动态图| 免费av观看视频| 亚洲成人av在线免费| 久久精品国产自在天天线| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品国产三级国产专区5o | 日韩欧美三级三区| 日韩欧美精品免费久久| 中文字幕免费在线视频6| 国产亚洲精品av在线| 亚洲精品自拍成人| 久久精品国产自在天天线| 深爱激情五月婷婷| 精品人妻熟女av久视频| 青春草视频在线免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 少妇人妻一区二区三区视频| 床上黄色一级片| 亚洲国产精品成人久久小说| 黄色欧美视频在线观看| 色5月婷婷丁香| 男女啪啪激烈高潮av片| 日本爱情动作片www.在线观看| 联通29元200g的流量卡| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日本三级黄在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 超碰av人人做人人爽久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩强制内射视频| 亚洲精品一区蜜桃| 欧美日本亚洲视频在线播放| 美女内射精品一级片tv| 人人妻人人看人人澡| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美+日韩+精品| 日韩欧美三级三区| 老司机福利观看| 在线天堂最新版资源| 国产黄片视频在线免费观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品av视频在线免费观看| 久久精品久久久久久久性| 看免费成人av毛片| 精品午夜福利在线看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产老妇女一区| 搡老妇女老女人老熟妇| 免费人成在线观看视频色| 日本色播在线视频| 久久久久网色| 九草在线视频观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 天堂影院成人在线观看| 日韩欧美精品v在线| 水蜜桃什么品种好| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产激情偷乱视频一区二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 成年免费大片在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 国产免费视频播放在线视频 | 国产探花在线观看一区二区| 久久久午夜欧美精品| 性色avwww在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| АⅤ资源中文在线天堂| 国产单亲对白刺激| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av成人精品一区久久| av免费观看日本| 久久精品夜色国产| 一个人看的www免费观看视频| 七月丁香在线播放| 少妇熟女欧美另类| 亚洲成色77777| 欧美性感艳星| 高清在线视频一区二区三区 | 国产av不卡久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 成人毛片60女人毛片免费| 一个人观看的视频www高清免费观看| 天堂网av新在线| 哪个播放器可以免费观看大片| 日本欧美国产在线视频| 成年版毛片免费区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| videos熟女内射| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品酒店卫生间| 97在线视频观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 午夜免费激情av| 国内精品一区二区在线观看| 精品久久国产蜜桃| 久久久国产成人精品二区| 国产精品一区二区性色av| 国产黄片视频在线免费观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲精品自拍成人| 久久久久久久国产电影| 精品国内亚洲2022精品成人| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲乱码一区二区免费版| 最近2019中文字幕mv第一页| 日本免费在线观看一区| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲无线观看免费| 有码 亚洲区| 欧美97在线视频| 日日撸夜夜添| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩精品青青久久久久久| 男人的好看免费观看在线视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲高清免费不卡视频| 国产午夜精品论理片| 国产黄a三级三级三级人| 国产久久久一区二区三区| 日日啪夜夜撸| 日韩亚洲欧美综合| 国产老妇女一区| 成人午夜高清在线视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| 男人狂女人下面高潮的视频| 日韩欧美精品v在线| 国产乱来视频区| 久久热精品热| 男人的好看免费观看在线视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品一区二区三区视频在线| 久久精品91蜜桃| 午夜老司机福利剧场| 人体艺术视频欧美日本| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 伦理电影大哥的女人| 欧美性感艳星| 国产精品人妻久久久久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 99久久成人亚洲精品观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产 一区精品| 超碰97精品在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 日日撸夜夜添| 国产久久久一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产乱来视频区| 亚洲真实伦在线观看| 久久人人爽人人片av| 91久久精品电影网| 午夜精品在线福利| 寂寞人妻少妇视频99o| 最近手机中文字幕大全| 国产高清不卡午夜福利| 性插视频无遮挡在线免费观看| 看免费成人av毛片| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美激情久久久久久爽电影| 最近中文字幕高清免费大全6| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 赤兔流量卡办理| 国产精品日韩av在线免费观看| 一级爰片在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 青春草视频在线免费观看| 一边亲一边摸免费视频| 99久久精品一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 免费人成在线观看视频色| 国产黄a三级三级三级人| 联通29元200g的流量卡| 亚洲欧洲日产国产| 97超碰精品成人国产| 我要搜黄色片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av熟女| 亚洲美女视频黄频| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 久久综合国产亚洲精品| 国产精品不卡视频一区二区| 中国国产av一级| 欧美高清成人免费视频www| 激情 狠狠 欧美| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲最大成人av| 97超碰精品成人国产| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲无线观看免费| 日韩强制内射视频| 99热精品在线国产| 床上黄色一级片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美日韩在线观看h| 久久精品夜色国产| 国产三级中文精品| 99热6这里只有精品| 久久精品人妻少妇| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产老妇女一区| 日韩高清综合在线| av.在线天堂| 亚洲综合精品二区| 免费观看在线日韩| 成人av在线播放网站| 男的添女的下面高潮视频| 免费黄色在线免费观看| 91久久精品电影网| 日韩欧美精品免费久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 日韩一区二区三区影片| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 只有这里有精品99| 女人被狂操c到高潮| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美日韩在线观看h| 欧美丝袜亚洲另类| av女优亚洲男人天堂| 国产精品.久久久| 能在线免费看毛片的网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产淫片久久久久久久久| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲人与动物交配视频| 久久热精品热| 女人被狂操c到高潮| 26uuu在线亚洲综合色| 又爽又黄a免费视频| АⅤ资源中文在线天堂| 中文字幕av在线有码专区| 18禁在线播放成人免费| 波多野结衣巨乳人妻| 99九九线精品视频在线观看视频| 黄色一级大片看看| 亚洲五月天丁香| 插逼视频在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 黄片无遮挡物在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久久久久伊人网av| 午夜精品一区二区三区免费看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品人妻久久久久久| 视频中文字幕在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 男人和女人高潮做爰伦理| 中文字幕av成人在线电影| 婷婷色av中文字幕| 亚洲怡红院男人天堂| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲欧洲日产国产| 欧美97在线视频|