多抗水稻分子標(biāo)記輔助育種方法

任海+呂小紅+杜萌

摘要：以抵御病蟲害、提高水稻產(chǎn)量的綠色研究領(lǐng)域為背景，提出一種基于分子標(biāo)記的多抗水稻輔助育種方法。采取分子標(biāo)記輔助育種方法，能夠完成擁有理想基因型或基因型組合的個體選擇，并能夠采取常規(guī)育種手段完成優(yōu)良品種的培育。在此方法中，需要利用分子標(biāo)記對目的基因進行跟蹤，選擇具有白葉枯病、稻瘟病、螟蟲抗性基因的親本，并從中選擇優(yōu)良恢復(fù)系和保持系，通過對目標(biāo)基因相鄰兩側(cè)的基因進行分子標(biāo)記，結(jié)合雜交、回交、自交相結(jié)合的育種方法，并輔助于分子檢測和分子標(biāo)記的手段，在較短的培育周期內(nèi)獲得了多抗性征的優(yōu)質(zhì)稻種，最終通過遺傳鑒定得到育種結(jié)果。同時，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，簡稱ELISA）檢測和6個感病指數(shù)檢測的結(jié)果表明，培育出的新稻種對于稻瘟病、螟蟲等病蟲害具有明顯的抗性，從而證實了基于分子標(biāo)記的輔助育種方法可成功地培植出具有多抗性征的優(yōu)質(zhì)稻種。

關(guān)鍵詞：水稻育種；分子標(biāo)記；ELISA檢測；稻瘟病

中圖分類號： S511.03 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2017）19-0154-04

收稿日期：2016-12-31

基金項目：國家科技支撐計劃（編號：2013BAD05B07）；耐鹽高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)水稻高效栽培技術(shù)示范推廣（編號：GCNT-LN-16）；遼寧省博士科研啟動基金（編號：20141169）；遼寧省水稻產(chǎn)業(yè)重大農(nóng)技推廣服務(wù)試點項目。

作者簡介：任 海（1984—），男，遼寧盤錦人，助理研究員，主要從事水稻栽培及鹽堿地改良研究。E-mail：61657137@qq.com。 在人類社會的各種糧食作物中，水稻占有極其重要的地位[1]。據(jù)統(tǒng)計，我國以水稻為主食的人口比例超過40%，世界以水稻為主食的人口比例接近50%[2]?？梢?，水稻的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)對于國計民生有至關(guān)重要的作用。

長期以來，水稻產(chǎn)量一直受到病害和蟲害的困擾。其中，水稻病害中比較突出的有白葉枯病、稻瘟病，水稻蟲害中比較突出的有螟蟲、褐飛虱[3-6]。抵制病蟲害的困擾、提高水稻產(chǎn)量，一直是水稻種植領(lǐng)域關(guān)心的重要問題。以農(nóng)藥為主的化學(xué)方法曾一度被廣泛應(yīng)用于水稻種植過程中，但最終被培育具有抗害基因稻種的綠色方法所取代。學(xué)者們不斷挖掘抗病基因和抗蟲基因，并結(jié)合植株表型進行雜交和回交以獲得具有多抗基因的優(yōu)質(zhì)稻種[7]。但受到水稻培植周期的限制，這種方法獲得優(yōu)質(zhì)稻種的時間過長[8]。但就目前來看，病蟲害防治方面依然存在很多問題，因此在今后的科研工作中要進一步加大對病蟲害研究的力度。本研究借助分子標(biāo)記的方法，完成具有多抗基因的稻種培育，為縮短優(yōu)質(zhì)多抗稻種的育種周期提供借鑒。

1 研究原理、優(yōu)勢及現(xiàn)狀

1.1 研究原理

分子標(biāo)記輔助育種是結(jié)合目標(biāo)基因型鑒定技術(shù)和傳統(tǒng)育種技術(shù)的一種作物育種技術(shù)，該技術(shù)的運用，須要借助有性雜交使改良親本中出現(xiàn)目的基因，能夠使育種材料的篩選效率及育種目標(biāo)的定向性得到提高[9]。在這一過程中，須要利用分子標(biāo)記對目的基因進行跟蹤，且該分子標(biāo)記能夠與目的基因緊密連鎖或共分離，所以能夠從目標(biāo)區(qū)域和全基因組中篩選出育種分離群體中期望獲得的個體，從而有效縮短育種進程。該方法的使用，須要完成前景選擇和背景選擇。前景選擇即直接選擇目標(biāo)基因，目標(biāo)基因與分子標(biāo)記間的連鎖程度將對方法的可靠性產(chǎn)生至關(guān)重要的影響。在選擇的過程中，如果目標(biāo)基因只有一個分子標(biāo)記，就要確保二者緊密連鎖，才能達到預(yù)期目標(biāo)。因此，通過對目標(biāo)基因相鄰兩側(cè)的基因進行分子標(biāo)記，能夠使選擇的正確率得到有效提高。背景選擇除了進行目標(biāo)基因的選擇，還要選擇基因組中其他性狀。采取該選擇方式，能夠使遺傳背景盡快恢復(fù)為輪回親本基因組，從而使育種年限得到有效縮短。此外，采用該選擇方法也能減少連鎖累贅。目前，人類已經(jīng)完成水稻高密度分子標(biāo)記連鎖圖譜的創(chuàng)建，因此能夠從選育群體中的各單株全基因組進行選擇。表1為常用分子標(biāo)記的優(yōu)缺點比較，在實際采用分子標(biāo)記法時還應(yīng)結(jié)合試驗條件及目的，選用適宜的標(biāo)記類型。

1.2 研究優(yōu)勢

采取分子標(biāo)記輔助育種方法，能夠完成具有理想基因型或基因型組合的個體選擇，并采取常規(guī)育種手段完成優(yōu)良品種的培育。該方法能夠在篩選材料時以多個基因為目標(biāo)，并在一個育種材料中實現(xiàn)多個基因的聚合，因此能夠有效改良品種品質(zhì)。相較于普通篩選方法，可以完成目標(biāo)性狀的提前篩選。比如在育性恢復(fù)鑒定方面，如果能夠提前1代，就可以在苗期完成后期性狀的鑒定。此外，采用該育種方法也能使目標(biāo)性狀的鑒定得到延遲。例如，在鑒定多種病蟲害的抗性時，植物很可能因為遭受某種病蟲害脅迫而出現(xiàn)死亡或絕種現(xiàn)象。一旦出現(xiàn)這種情況，就難以進行多種病蟲害抗性的同時鑒定，并使植株在其他性狀上的優(yōu)異表現(xiàn)材料遭到喪失。但如果采用分子標(biāo)記方法，就能完成多性狀目標(biāo)基因的鑒定，并在收種后實現(xiàn)分類驗證。從總體上來看，采用分子標(biāo)記輔助育種方法能夠體現(xiàn)DNA水平上的選擇差異，并對遺傳變異進行反映，所以能夠通過在不同時期的選擇避免植株受周圍環(huán)境影響，從而使水稻的育種效率和準確性得到有效提高。

1.3 研究現(xiàn)狀

在抗性水稻品種培育方面，分子標(biāo)記輔助育種方法已經(jīng)取得了一定的應(yīng)用進展。從原理上來看，該方法可以通過實現(xiàn)有利性狀基因的轉(zhuǎn)移和多個抗病基因的聚合來增強品種的抗性和抗譜差異，進而實現(xiàn)對抗性水稻品種的培育?；蚓酆鲜窃谝粋€基因組中實現(xiàn)分散在不同品種中目標(biāo)基因的聚合，能夠用相對短的時間完成高產(chǎn)、多抗和優(yōu)質(zhì)雜交稻親本或品種的培育[10]。通過在一個作物品種中聚合不同抗病蟲基因，能夠使該作物抗病蟲能力的持久性得到增強，以避免在后續(xù)種植中進行殺蟲劑和各種農(nóng)藥的噴灑。

白葉枯病為水稻的三大病害之一，感染該病的水稻產(chǎn)量會損失20%～30%，嚴重時甚至?xí)霈F(xiàn)顆粒無收的現(xiàn)象，因此其病害研究得到了諸多國家的重視。在抗白葉枯病水稻育種工作中，中國水稻研究所采取該方法完成了Xa21的轉(zhuǎn)育，并完成了中恢218等具有強抗性和高產(chǎn)特點的水稻品種培育，其中Xa21是白葉枯病抗性基因，且具有廣譜抗性[10]。隨后，白葉枯病抗性基因Xa23也被李進波等利用分子標(biāo)記選擇方法轉(zhuǎn)育出來[10]。經(jīng)國際注冊確認的水稻白葉枯病抗性基因接近40個，其中包含26個顯性基因和38個隱性基因[11]。相較于其他基因，Xa23是在水稻育種中容易實現(xiàn)分子標(biāo)記輔助選擇的基因，因此具有一定的導(dǎo)入價值[12]。endprint

稻瘟病為真菌性病害，在世界范圍內(nèi)都屬于危害最嚴重的水稻病害，具有危害大、分布廣和發(fā)病率高等特點，并且一旦染病就難以進行控制，每年都會導(dǎo)致我國損失約10億kg的稻谷。在水稻的整個生育期內(nèi)，都有可能發(fā)生稻瘟病。實踐研究證明，想要進行稻瘟病的防治，還要通過加強抗病品種的培育和種植來實現(xiàn)。而稻瘟病病菌群體中的毒性小種會因大面積單一品種的種植取得傳播優(yōu)勢，容易造成病害流行，因此還要進行持久抗病品種的選育。在水稻抗稻瘟病育種方面，官華忠等則利用SRM22作為分子標(biāo)記，完成了Pi-9抗病基因的轉(zhuǎn)育[9]，陳學(xué)偉等采取分子標(biāo)記方法完成了Pi-d（t）抗病基因的轉(zhuǎn)育[13]。目前，人類已經(jīng)得到了近70多個主效抗性基因，可用于水稻抗稻瘟病育種。

在水稻蟲害方面，螟蟲為危害性較大的蟲害。目前，在浙江等地區(qū)，主要用于進行螟蟲害防治的化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)品效果普遍較差。在這一背景下，轉(zhuǎn)Bt基因或sck基因的抗螟蟲水稻育種問題引起了人們的關(guān)注。在該方面，朱禎等使用潮霉素對雙價cry1Ac（Bt）/sck抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻進行了培育[14]。而李冬虎等通過研究發(fā)現(xiàn)，cry1Ac/sck能夠較好地抵抗二化螟和三化螟等螟蟲[12]。

從總體上來看，運用分子標(biāo)記輔助育種方法進行的抗性水稻品種培育，在水稻品種質(zhì)量性狀選擇方面取得了一定的成效。但是，含有單一抗病蟲基因的水稻材料存在一定的局限性，即如果進行大面積推廣和長時間種植就會出現(xiàn)抗性逐漸降低的問題。因此越來越多的學(xué)者開始對水稻多種病蟲害抗性基因的聚合問題展開研究，以便通過將多抗性基因聚合到同一材料中而增強材料對病蟲害的抗性。在雜交水稻品種研究方面，陽海寧等利用分子標(biāo)記法分別完成了Xa23與Bph3的導(dǎo)入，從而獲得了144份雙抗性基因聚合系[15]。但從接種測試結(jié)果來看，與單一抗性基因的株系相比，具有雙抗性基因聚合系的抗性水平并未得到明顯提高[15]。而毛鐘警等通過MAS技術(shù)，在同一材料中實現(xiàn)了抗褐飛虱基因與抗白葉枯病基因的聚合，并完成了個體的培育[16]。通過在3個新育成的水稻恢復(fù)系中進行Pi9和Xa23的導(dǎo)入，田大剛等完成了具有更高稻瘟病與白葉枯病抗性的恢復(fù)系培育，但得到的品種在材料和農(nóng)藝性狀方面與原有恢復(fù)系無明顯差別[17]。在3種及以上多抗性基因聚合方面，分子標(biāo)記方法也得到了應(yīng)用。為對水稻品種的抗病蟲高效性與持久性展開深入研究，一些育種專家開始采用分子標(biāo)記輔助選擇方法和回交轉(zhuǎn)育法進行抗白葉枯病、抗稻瘟病等多個基因的聚合，并獲得了雜交育種的中間材料。陳圣等采取該方法，將抗水稻螟蟲、抗白葉枯病和抗稻瘟病的3種基因聚合到一起，并獲得了純合株系；該方法不僅能夠使水稻抗譜得到擴寬，還能使抗性品種的使用年限得到延長[18]。目前，有關(guān)水稻病蟲抗性基因的抗譜資源依然較少，須要進行持續(xù)不斷的開發(fā)和挖掘。而在野生材料中，則蘊含較多抗性較好的資源，但這些材料多含有不利基因，一些基因或與目標(biāo)抗性基因連鎖，采用連續(xù)回交等方式容易丟失目標(biāo)抗性基因。因此，目前還須要對現(xiàn)有發(fā)掘的抗性基因進行精確定位，以便完成更多水稻SSR標(biāo)記的開發(fā)，進而有效提高分子標(biāo)記輔助選擇的準確性。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

在多抗水稻輔助育種的過程中，選擇了以下3種主要的試驗材料：CBB23水稻品種，攜帶有Xa23基因，該基因?qū)τ谒景兹~枯病具有顯著抗性；Q1347水稻品種，攜帶有pi9基因，該基因?qū)τ诘疚敛【哂酗@著抗性；科豐6號水稻品種，攜帶有cry1Ac/sck雙組基因，該基因?qū)τ谒久x具有顯著抗性。

在水稻幼苗期摘取葉尖3～4 cm的新鮮葉片，置于 1.5 mL 離心管中，并于-20 ℃的條件下貯存，以供運用CTAB法進行少量DNA提取使用。

2.2 育種過程

為實現(xiàn)多抗水稻稻種的培育，本研究選擇優(yōu)良恢復(fù)系和保持系作為試驗材料，結(jié)合雜交、回交、自交等育種方法，并輔助以分子檢測和分子標(biāo)記，最終通過遺傳鑒定得到育種結(jié)果。詳細的育種過程如下：（1）從試驗材料中選擇育種親本，并分析親本之間的多態(tài)性征；（2）確定親本中的受體和供體，并執(zhí)行受體和供體之間的雜交；（3）將（2）收獲的雜交種和受體再次進行雜交，并結(jié)合田間性狀和分子標(biāo)記的結(jié)果進行進一步篩選；（4）將（3）篩選出的材料和受體再次進行雜交，并結(jié)合田間性狀和分子標(biāo)記的結(jié)果進行進一步篩選；（5）將（4）篩選出的材料和受體再次進行雜交，并以此雜交種和（4）的雜交種進行回交；（6）在（5）的雜交種中，結(jié)合田間性狀和分子標(biāo)記，選擇優(yōu)良單株進行2次自交，以獲得育種結(jié)果。

目前，這種方法是常用的改良品種性狀的方法，可以將目的性狀基因的另一品系與供體進行多次回交，以便將供體親本中的目的基因轉(zhuǎn)移至受體親本，以獲得更優(yōu)良的輪回親本基因型。但是，在回交育種的過程中，有利基因?qū)氲耐瑫r，與之連鎖的不利基因也被導(dǎo)入。采用分子標(biāo)記目的基因，在回交時則可以直接在目的基因附近進行個體重組，進而提升選擇效率，避免“連鎖累贅”的發(fā)生。水稻本身擁有較多的抗病基因，通過回交轉(zhuǎn)育能夠確保得到的抗性品種安全、有效。

育種的具體實施過程為：（1）選擇具有聚合基因Xa23、pi9的優(yōu)良稻系作為母本，將具有雙組合基因cry1Ac/sck的優(yōu)良稻系作為父本，于2014年3月在海南試驗地進行雜交，獲得S1。（2）將S1樣本，于2014年6月在福建試驗地進行種植，苗期輔助以分子標(biāo)記。選擇其中12株優(yōu)良單株進行自交，于2014年9月收獲S2。（3）于2014年11月將S2種植于海南試驗地，苗期輔助以分子標(biāo)記，篩選512株優(yōu)良單株進行自交，于2015年4月收獲S3。

2.3 分子標(biāo)記方法

輔助分子標(biāo)記，可以縮短育種周期，提高育種效率。因此，須要了解Xa23、pi9、cry1Ac/sck等3個基因的分子檢測方法。

基因Xa23和表達序列標(biāo)簽（expressed sequence tag，簡稱EST）標(biāo)記符合共顯特征，兩者的遺傳距離為0.8 cm，預(yù)期條帶800 bp?？刹捎脻舛葹?%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，分子檢測引物如下：Xa23F，5′-TAAGTTGTACTACGACCCCA-3′；Xa23R，5′-CACATGAAGAGCTGGAAACG-3′。endprint

基因pi9可檢測自身，預(yù)期條帶2 000 bp?？刹捎脻舛葹?%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，分子檢測引物如下：pi9F，5′-ATGGTCCTTTATCTTTATTG-3′；pi9R，5′-TTGCTCCATC TCCTCTGTT-3′。

基因cry1Ac/sck可檢測自身，預(yù)期條帶分別為800、400 bp?？刹捎脻舛葹?%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，分子檢測引物如下：crylAcF，5′-TGCAGAGAGCTTCAGAGAGTG-3′；crylAcR，5′-ACACCCTGACCTAGTTGAGC-3′；sckF，5′-AAAATGAAGAGCACCATCTTC-3′；sckR，5′-TCTAGAGTT CATCTTTCTCATC-3′。

2.4 抗性檢測方法

為了證實本研究培育的S3純合株系所具有的多抗性特征，需進行進一步抗性檢測。

首先，采用ELISA檢測方法檢測S3純合株系中cry1Ac的表達量。株系的cry1Ac表達量反映了稻種對螟蟲的抑制效果，主要通過檢測蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，簡稱Bt）含量來確定cry1Ac的表達量。在檢測的過程中，使用雙抗體夾心法進行水稻Bt含量的檢測，即對其中一個夾板進行90 min的紫外線照射處理，然后分別用處理和未處理夾板進行Bt梯度的測定。在測定過程中，須要使用碳酸鹽緩沖溶液（carbonate buffer solution，簡稱CBS）進行IgG溶液的稀釋，直至溶液濃度達到1 μg/mL。夾板上共100個孔，每孔加 100 μL，并在4 ℃條件下包被過夜。在封閉孔時，需要每孔添加濃度為2%的牛血清白蛋白135 μL，并在37 ℃條件下封閉1 h。

其次，采用6個感病指數(shù)來檢驗S3純合株系的稻瘟病及其他常見稻病的抗病性征。在測試前，需要將在濾紙片上保存的菌株轉(zhuǎn)移至酵母淀粉培養(yǎng)基上，在28 ℃的暗箱中培養(yǎng) 4～5 d后，將其轉(zhuǎn)移至米糠培養(yǎng)基上培養(yǎng)7～8 d，然后將培養(yǎng)皿上的菌絲刮去，并在25～28 ℃的光照培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。約3 d后，利用蒸餾水將孢子清洗下來，然后利用擦鏡紙進行過濾，并完成孢子懸液的培養(yǎng)，以供接種使用。在育苗時，將長至3葉1心的水稻幼苗移至發(fā)病室內(nèi)，利用空壓機連接頭進行噴霧接種。每盤苗須要噴灑50 mL孢子懸液，并在保濕筒內(nèi)持續(xù)保濕24 h，然后移到筒外，進行定時噴霧。在接種后6～7 d，植株病情已經(jīng)基本穩(wěn)定，可以進行發(fā)病情況的調(diào)查。在秧齡達到25 d后，進行秧苗移栽，并且在之后1個月內(nèi)不使用任何殺蟲劑。在進行蟲害鑒定時，在定圃四周種植8行感蟲品種作為對照，從而實現(xiàn)對縱卷葉螟蟲的誘集和增加。以自然誘集稻縱卷葉螟產(chǎn)卵為蟲源進行鑒定，并利用細目紗網(wǎng)對需要鑒定的水稻進行籠罩。完成鑒定后，噴施5%氟蟲腈懸浮劑，以免蟲源向外圍擴散。在接種時，仍然采用表1中的3個樣本。

3 結(jié)果與分析

3.1 分子標(biāo)記

多抗稻種培育成功后，對各純合株系進行分子檢測，其中一個樣本的分子檢測結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，該樣本同時具備了抑制白葉枯病的基因Xa23、抑制稻瘟病的基因pi9、抑制螟蟲的雙組合基因cry1Ac/sck。從分子檢測的角度證明了多抗稻種的成功培育。

3.2 抗性檢測

從表3可以看出，S3的3個樣本的Bt相對含量分別達到了0.121 1%、0.122 7%、0.121 2%，均超過了0.100 0%，說明3個樣本對螟蟲存在明顯抗性。

從表4可以看出，S3等3個樣本的6個感病指數(shù)均低于

5%，充分說明3個樣本對稻瘟病及其他稻病具有明顯抗性。而在螟蟲防治方面，S3的3個樣本表現(xiàn)出了良好的縱卷葉螟抗性，很少有卷葉出現(xiàn)，并且卷葉程度較低，多數(shù)葉肉并未受到損傷，而對照組的卷葉率則達到了90%以上，并且葉肉受到了嚴重蠶食。

綜合以上2組抗性檢測結(jié)果，證實了基于分子標(biāo)記的輔助育種方法成功地培育出了具有多抗性征的優(yōu)質(zhì)稻種，可以防治主要病蟲害對稻種的危害。

根據(jù)水稻育種領(lǐng)域的已有文獻可知，基因Xa23對于白葉枯病的抑制效果非常優(yōu)異，基因pi9對于稻瘟病的抑制效果非常優(yōu)異，雙組合基因cry1Ac/sck對于螟蟲的抑制效果非常優(yōu)異。本研究在分子檢測標(biāo)記的技術(shù)手段輔助下，將這3種優(yōu)秀基因進行聚合，培育出具有多抗屬性的水稻優(yōu)良恢復(fù)系。利用與抗白葉枯病與抗稻瘟病基因連鎖的分子標(biāo)記與抗螟蟲基因的直接相關(guān)引物對基因供體親本展開多態(tài)性分析可以發(fā)現(xiàn)，采取的分子標(biāo)記為共顯性標(biāo)記，EST標(biāo)記在供體親本中擴增出800 bp的特征條帶，基因pi9在供體親本中擴增出2 000 bp特征條帶，基因cry1Ac、sck在供體親本中分別擴增出800、400 bp特征條帶。在親本之間，各連鎖標(biāo)記具有多態(tài)性，能夠在分子標(biāo)記輔助選擇中得到應(yīng)用。利用標(biāo)記與檢測的基因進行分離世代選擇，最終完成3種基因純合株系的聚合。

4 討論

水稻是中國乃至世界范圍內(nèi)最重要的糧食作物，其產(chǎn)量關(guān)乎人類的生存和發(fā)展。如何有效抑制病害和蟲害、提高水稻產(chǎn)量，是水稻種植領(lǐng)域需要持續(xù)關(guān)注的焦點問題。據(jù)不完全統(tǒng)計，世界上危害水稻的侵染性病害達300多種，其中有些病害分布在全世界范圍內(nèi)，有些則存在于部分地區(qū)。在我國白葉枯病、稻瘟病、螟蟲都是重要的水稻病蟲害，因此選育能夠抵抗這3種水稻病蟲害的多抗水稻可帶來明顯的經(jīng)濟效益和社會效益。在過去一段時間內(nèi)，多利用抗病親本的主效抗病基因進行水稻育種。受病原菌致病小種變化因素的影響，在進行單一抗病品種大面積種植時容易出現(xiàn)水稻大面積感病問題，繼而導(dǎo)致水稻生產(chǎn)承受更多損失。因此，須要進行多個抗病基因的聚合，從而實現(xiàn)多抗水稻品種的培育，更好地預(yù)防水稻生產(chǎn)病害。此外，抗病害基因育種的綠色方法，是取代以農(nóng)藥為主的化學(xué)方法的必然選擇，也是今后水稻育種領(lǐng)域的主要發(fā)展趨勢。但在過去較長的時間里，基因聚合法一直因為無法實現(xiàn)抗性基因的有效檢測而無法得到實踐應(yīng)用，以致于持久抗性水稻品種的培育問題無法得到有效解決。分子標(biāo)記輔助選擇育種方法，能夠利用建立在DNA多態(tài)性上的分子標(biāo)記技術(shù)實現(xiàn)對抗性基因的標(biāo)記，從而有效進行聚合體抗性基因的檢測。endprint

本研究表明，含有單一基因Xa23、pi9、cry1Ac/sck的單株，可以通過雜交、回交、自交等手段，獲得具有多抗性征的優(yōu)良稻種。由此可見，采用基因聚合方法能夠完成多抗水稻品種的有效培育。分子檢測、分子標(biāo)記等手段的使用，可以縮短育種周期、簡化培育過程，是多抗水稻品種培育的有效方法。本研究結(jié)果為多抗優(yōu)質(zhì)水稻品種的培育提供了一種可以借鑒的思路和方法。另外，除了常規(guī)育種工作，還應(yīng)在工作實用化和雜種優(yōu)勢評價方面展開深入研究，因此，在后續(xù)研究中，進一步將得到的3抗材料與優(yōu)良恢復(fù)系親本進行配組，并評價綜合指標(biāo)，以便使得到的水稻改良品種能夠被廣泛應(yīng)用。此外，還應(yīng)對改良得到的同一恢復(fù)系的遺傳背景、配合力及農(nóng)藝性狀等方面的差異展開評價。

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