補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷血管內(nèi)皮*

張 偉， 賀 冰， 李 亮， 李 菲， 曹 浪， 劉曉丹， 鄧常清△

(1湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽醫(yī)院， 湖南 岳陽 414000； 2湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院， 湖南 長沙410005； 3湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院， 湖南 長沙 410208)

補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷血管內(nèi)皮*

張 偉1， 賀 冰2， 李 亮3， 李 菲3， 曹 浪3， 劉曉丹3， 鄧常清3△

(1湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽醫(yī)院， 湖南 岳陽 414000；2湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院， 湖南 長沙410005；3湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院， 湖南 長沙 410208)

目的探討補(bǔ)陽還五湯(BYHWD)促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)修復(fù)損傷血管內(nèi)皮的作用及相關(guān)機(jī)制。方法以補(bǔ)陽還五湯灌胃及EPCs尾靜脈輸注作用于內(nèi)皮損傷的模型大鼠，從血管內(nèi)皮的形態(tài)、功能和EPCs歸巢等方面評(píng)價(jià)內(nèi)皮損傷修復(fù)情況；從血管內(nèi)環(huán)境改善和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)及其受體趨化因子受體-4相關(guān)蛋白表達(dá)了解該方促進(jìn)EPCs修復(fù)受損血管的機(jī)制。結(jié)果與單用EPCs組和單用BYHWD組比較，BYHWD聯(lián)合EPCs組內(nèi)膜厚度明顯減少，甘油三酯、總膽固醇及血鈣含量降低，高密度脂蛋白含量升高；此外，BYHWD聯(lián)合EPCs組血管內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血管SDF-1蛋白表達(dá)均顯著增加。結(jié)論補(bǔ)陽還五湯能促進(jìn)EPCs修復(fù)損傷的血管內(nèi)皮，其作用機(jī)制可能與調(diào)控內(nèi)環(huán)境以及促進(jìn)EPCs的歸巢有關(guān)。

補(bǔ)陽還五湯； 內(nèi)皮祖細(xì)胞； 血管內(nèi)皮； 內(nèi)皮型一氧化氮合酶； 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1； 趨化因子受體-4

血管內(nèi)皮損傷是動(dòng)脈粥樣硬化等多種心腦血管疾病的始動(dòng)因素和共同的病理基礎(chǔ)[1]。因而，及時(shí)有效地修復(fù)損傷的血管內(nèi)皮是防治心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的有效手段和重要策略。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)屬于干細(xì)胞家族，是修復(fù)血管內(nèi)皮的種子細(xì)胞[2]。生理?xiàng)l件下，骨髓和外周血中的少量EPCs可代償衰老和凋亡的血管內(nèi)皮細(xì)胞以維持血管內(nèi)皮的完整和生理功能，這一過程確保了血管內(nèi)皮的損傷和修復(fù)的動(dòng)態(tài)平衡。然而，在缺氧、炎癥和損傷等因素的刺激下激活的EPCs不足以彌補(bǔ)細(xì)胞的損傷當(dāng)量，使得血管內(nèi)皮的修復(fù)損傷平衡破壞，從而導(dǎo)致各種心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展。干細(xì)胞移植是治療心腦血管疾病的有效手段。輸注異體同源的EPCs可有效彌補(bǔ)自身EPCs的數(shù)量不足，然而種子細(xì)胞的生存依賴于快速的血管化[3]，因而促進(jìn)EPCs的快速準(zhǔn)確的歸巢具有重要的科學(xué)意義。中醫(yī)藥在防治心腦血管疾病方面積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，補(bǔ)陽還五湯(Buyanghuanwu decoction，BYHWD)是中醫(yī)益氣活血法的代表方劑，已有研究表明該方能有效改善內(nèi)皮功能，促進(jìn)內(nèi)皮損傷的修復(fù)[4-6]。但有關(guān)該方是否能促進(jìn)EPCs對(duì)受損血管內(nèi)皮的修復(fù)作用還不清楚。因此，進(jìn)一步了解補(bǔ)陽還五湯對(duì)EPCs修復(fù)受損內(nèi)皮的調(diào)控作用對(duì)于該方的合理運(yùn)用具有重要的科學(xué)意義。

材 料 和 方 法

1動(dòng)物

成年雄性SD大鼠，體重180～200 g，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)為SCXK(湘)2011-0003。實(shí)驗(yàn)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3R原則，并通過湖南中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

2主要試劑和儀器

衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶 (senescence-associated β-galactosidase，SA-β-Gal) 染色試劑盒(Beyotime)；DAPI (Vector Laboratories)；小鼠抗大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)抗體和兔抗鼠β-actin單克隆抗體(Bioworld)；超敏化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒、封閉蛋白干粉、羊抗鼠 II 抗、羊抗兔 II 抗和蛋白印跡膜再生液均購自Boster。MoFloXDP高速分選型流式細(xì)胞儀(Beckman)；DF5000B Leica熒光顯微鏡、Leica CM 1850 冰凍切片機(jī)(Leica Microsystems)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(Thermo)。

3方法

3.1EPCs的培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記 SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后頸椎脫臼處死，采用改良密度梯度離心法獲取單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)[7]，72 h后半量換液，14 d左右細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶后可進(jìn)行鑒定或傳代。(1)EPCs的鑒定：按照文獻(xiàn)方法[8-9]，完成EPCs細(xì)胞表面標(biāo)志物及功能學(xué)鑒定，細(xì)胞傳代備用。(2)按照參考文獻(xiàn)[10]對(duì)EPCs進(jìn)行標(biāo)記：取培養(yǎng)14 d的EPCs，將熒光染色劑DAPI加入EPCs中，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，標(biāo)記后的EPCs用無菌PBS沖洗6次，除去未結(jié)合的DAPI，熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記的EPCs。

3.2血管內(nèi)皮損傷模型的建立 根據(jù)文獻(xiàn)方法[11]建立大鼠血管內(nèi)皮損傷模型，SD雄性大鼠隨機(jī)分組后，以配方為2%膽固醇、0.5%膽酸鈉、3%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶和94.3 %基礎(chǔ)飼料的高脂飼料喂養(yǎng)12周，輔以VitD(7×105U/kg)腹腔注射(分2次注射，高脂喂養(yǎng)2周后第1次注射，2周后第2次注射，每次各半)。隨機(jī)取5只大鼠，觀察內(nèi)膜形態(tài)、計(jì)量檢測(cè)內(nèi)膜厚度并以SA-β-gal法檢測(cè)內(nèi)皮衰老情況，可見大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化樣改變，內(nèi)皮衰老檢測(cè)呈陽性，據(jù)此推測(cè)造模成功。

3.3分組、給藥及處理 模型大鼠隨機(jī)分為單用BYHWD組、單純EPCs輸注組、BYHWD聯(lián)合EPCs組和模型(model)組，并以健康SD大鼠設(shè)為對(duì)照(control)組，合計(jì)5組。按組別給予藥物處理，BYHWD和BYHWD+EPCs組以補(bǔ)陽還五湯灌胃(生藥11.1 g/kg， 每天1次，連用30 d)，每周稱體重調(diào)整灌胃藥量，其余各組蒸餾水灌胃。BYHWD+EPCs組和EPCs組輸注數(shù)量約為2×106以DAPI標(biāo)記的EPCs，通過尾靜脈于給藥的第8天一次性輸注，其余各組輸注1 mL PBS，藥物干預(yù)30 d后處死動(dòng)物取材進(jìn)行檢測(cè)。

3.4血管內(nèi)膜增生的測(cè)定 取胸主動(dòng)脈，按以往研究方法[12]檢測(cè)血管內(nèi)膜厚度以反映內(nèi)皮損傷和修復(fù)情況。HE染色法觀察血管內(nèi)膜形態(tài)，采用圖像分析軟件計(jì)量內(nèi)膜增生情況，按組織學(xué)劃分，內(nèi)彈力膜以內(nèi)為內(nèi)膜。以MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分別測(cè)量內(nèi)膜厚度=[(內(nèi)彈力膜周徑-管腔周徑)/2π]。取血管壁內(nèi)膜最厚處測(cè)量，以3個(gè)不同橫截段面的平均值表示該血管的內(nèi)膜厚度。

3.5內(nèi)皮衰老的測(cè)定 根據(jù)文獻(xiàn)方法[13]測(cè)定血管SA-β-Gal活性以評(píng)價(jià)內(nèi)皮衰老狀況。大鼠胸主動(dòng)脈標(biāo)本石蠟切片，按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理后加入適量的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15 min。用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5 min。吸除PBS，參照說明書加入適量染色工作液37 ℃孵育過夜。隨后于普通光學(xué)顯微鏡下觀察，陽性表達(dá)血管內(nèi)膜可見藍(lán)色顆粒。

3.6EPCs歸巢的觀察 根據(jù)參考文獻(xiàn)[10]取培養(yǎng)14 d的EPCs，用熒光染色劑DAPI標(biāo)記后尾靜脈輸注大鼠體內(nèi)。4周后取胸主動(dòng)脈標(biāo)本于熒光顯微鏡下觀察EPCs在受損血管內(nèi)皮的歸巢分化情況。

3.7血脂血鈣測(cè)定 大鼠連續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)12周后眼球采血測(cè)定血脂、血鈣水平[14]。

3.8血管eNOS、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-drived factor-1，SDF-1)及其受體CXC趨化因子受體4(CXC chemokine receptor-4，CXCR-4)的蛋白表達(dá) 分組方法同前。各組大鼠于給藥30 d后即末次給藥后次日麻醉處死，取出胸腹主動(dòng)脈，將組織碾磨之后收集于干凈Ep管中，Bradford 法測(cè)定蛋白含量。用SDS-PAGE法將蛋白分離后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，加入5%蛋白封閉液在室溫下孵育2 h。分別加入3 mL 用TBST稀釋的 I 抗(eNOS 1∶500、SDF-1 1∶200、CXCR-4 1∶1 000)，4 ℃孵育過夜，洗膜后加入羊抗鼠、羊抗兔 II 抗3 mL(1∶4 000)，37 ℃孵育1 h。將膜放置于熒光成像儀內(nèi)，用凝膠成像系統(tǒng)曝光后將膠片進(jìn)行掃描，用圖像分析軟件IPP 6.0對(duì)圖像進(jìn)行光密度分析。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，方差不齊者先將數(shù)據(jù)進(jìn)行自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后再作單因素方差分析和兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1各組大鼠血管內(nèi)皮形態(tài)及內(nèi)膜厚度比較

血管形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，模型組可見血管內(nèi)膜增厚，部分增厚部位出現(xiàn)泡沫細(xì)胞等動(dòng)脈粥樣硬化樣改變，中膜萎縮，血管環(huán)狀肌層結(jié)構(gòu)被破壞，表明造模成功；與模型組比較，各藥物組內(nèi)膜增生和中膜萎縮狀態(tài)得到改善，其中EPCs輸注組及BYHWD聯(lián)合EPCs組改善最為顯著，見圖1。

Figure 1. Vascular morphology in each group (HE stanining, ×100).

圖1HE染色觀察各組大鼠血管形態(tài)

血管內(nèi)膜厚度比較結(jié)果表明，與control組比較，model組內(nèi)膜增厚(P<0.05)，提示造模后血管內(nèi)皮損傷，內(nèi)膜增生；與model組比較，EPCs組、BYHWD組以及BYHWD+EPCs組內(nèi)膜厚度均顯著減小(P<0.05)；與EPCs組和BYHWD組比較，BYHWD+EPCs組內(nèi)膜厚度減小(P<0.05)，見圖2。

2各組血管內(nèi)皮衰老的比較

β-半乳糖苷酶染色結(jié)果顯示，model組可見血管內(nèi)膜顯著增生，血管內(nèi)膜中可見到SA-β-Gal染色陽性，呈中等強(qiáng)度表達(dá)，而control組表達(dá)呈陰性；與model組比較，EPCs組血管各層細(xì)胞排列整齊，血管內(nèi)膜未見陽性表達(dá)，BYHWD組血管內(nèi)膜可見弱陽性表達(dá)，而BYHWD+EPCs組血管內(nèi)膜亦未見陽性表達(dá)，見圖3。

Figure 2. Comparison of intima thickness in different groups. Mean±SD.n=10.☆P<0.05vscontrol;△P<0.05vsmodel;▲P<0.05vsBYHWD+EPCs.

圖2各組大鼠血管內(nèi)膜厚度的比較

Figure 3. Endothelial cell senescence markers in each group (SA-β-Gal staining, ×100).

圖3各組血管內(nèi)皮衰老情況的比較

3EPCs的歸巢

熒光顯微鏡下BYHWD+EPCs組和EPCs組血管壁可見藍(lán)色熒光，尤其是在內(nèi)膜部位及損傷嚴(yán)重部位的熒光表達(dá)更強(qiáng)；結(jié)合血管形態(tài)學(xué)及管壁計(jì)量檢測(cè)結(jié)果提示輸注EPCs的各組損傷修復(fù)較好，由此可知輸注的EPCs歸巢到損傷血管分化為內(nèi)皮細(xì)胞參與了損傷血管內(nèi)皮的修復(fù)，見圖4。

Figure 4. EPCs homing to vascular intima (fluorescence staining, ×40).

圖4熒光下各組EPCs歸巢情況

4血脂和血鈣的比較

與control組比較，model組大鼠血清中甘油三酯和總膽固醇顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示高脂喂養(yǎng)加注射維生素D導(dǎo)致血脂升高；與model組比較，BYHWD+EPCs組和BYHWD組均可使總膽固醇及甘油三酯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而EPCs組在上述兩個(gè)指標(biāo)上與model組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；與model組比較，BYHWD組和BYHWD+EPCs組高密度脂蛋白(high- density lipoprotein，HDL)的水平均能升高(P<0.05)，而EPCs組HDL無顯著變化；與EPCs組比較，BYHWD+EPCs組總膽固醇及甘油三酯降低(P<0.05)；與BYHWD組比較，BYHWD+EPCs合用降低甘油三酯、升高HDL水平的作用更為顯著(P<0.05)。血鈣結(jié)果分析表明，與control組比較，model組血鈣顯著升高(P<0.05)；各治療組與model組比較血鈣濃度顯著降低(P<0.05)；EPCs組與BYHWD+EPCs組相比，后者血鈣下降更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖5。

5各組血管eNOS表達(dá)的比較

與control組比較，model組中eNOS蛋白表達(dá)減少；與model組比較，各實(shí)驗(yàn)組eNOS表達(dá)均增強(qiáng)；與EPCs組和BYHWD組比較，BYHWD+EPCs組的eNOS蛋白表達(dá)顯著增加。結(jié)果表明，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs可提高eNOS蛋白表達(dá)水平，見圖6。

6各組SDF-1、CXCR-4表達(dá)的比較

與control組比較，model組SDF-1蛋白表達(dá)顯著升高；與model組比較，BYHWD+EPCs組SDF-1蛋白表達(dá)顯著升高，而EPCs組、BYHWD組與model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；與EPCs組和BYHWD組比較，BYHWD+EPCs組SDF-1表達(dá)顯著增高。在CXCR-4蛋白表達(dá)方面，與control組比較，model組CXCR-4表達(dá)顯著降低；與model組比較，BYHWD+EPCs組CXCR-4表達(dá)顯著降低，其它各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，但BYHWD+EPCs組與EPCs組和BYHWD組比較CXCR-4顯著降低，見圖7。

Figure 5. Comparison of serum lipids and serum calcium in different groups. Mean±SD.n=10.☆P<0.05vscontrol;△P<0.05vsmodel;▲P<0.05vsEPCs;★P<0.05vsBYHWD.

圖5各組大鼠血清中血脂和血鈣表達(dá)結(jié)果

Figure 6. The protein expression of eNOS in in different groups. Mean±SD.n=10.☆P<0.05vscontrol;△P<0.05vsmodel;▲P<0.05vsEPCs;★P<0.05vsBYHWD.

圖6各組eNOS表達(dá)結(jié)果

Figure 7. The protein expression of SDF-1 and CXCR-4 in different groups. Mean±SD.n=10.☆P<0.05vscontrol;△P<0.05vsmodel;▲P<0.05vsEPCs;★P<0.05vsBYHWD.

圖7各組SDF-1和CXCR-4的表達(dá)結(jié)果

討 論

補(bǔ)陽還五湯出自清代名醫(yī)王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》，具有益氣活血之功效，為治療缺血性腦血管病及后遺癥的有效方劑。已有研究表明[15-16]該方能通過增強(qiáng)血管內(nèi)皮生長因子及其受體的表達(dá)和提高蛋白水平達(dá)到保護(hù)血管內(nèi)皮的作用，并能通過各種途徑促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)一氧化氮，從而達(dá)到保護(hù)血管內(nèi)皮的作用[17]。在抗動(dòng)脈粥樣硬化方面，補(bǔ)陽還五湯內(nèi)服加外敷治療閉塞性周圍動(dòng)脈粥樣硬化有顯著療效[18]。它可以通過抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)降低動(dòng)脈粥樣硬化小鼠一氧化氮水平，防治動(dòng)脈粥樣硬化[19]；還能下調(diào)MMP-9的表達(dá)，降低血脂，具有抗動(dòng)脈粥樣化作用[20]。由此可見，該方具有較好的改善內(nèi)皮功能的作用。其作用機(jī)制主要為降血脂、抗氧化損傷、調(diào)節(jié)內(nèi)皮活性物質(zhì)分泌、抗栓與促栓平衡和抗細(xì)胞凋亡等。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從血管形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)和血管內(nèi)膜厚度比較可知，單純輸注EPCs或單用補(bǔ)陽還五湯可抑制內(nèi)膜增生，提示EPCs和中藥復(fù)方對(duì)內(nèi)皮損傷具有一定的修復(fù)作用。而補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs對(duì)受損血管內(nèi)皮的修復(fù)作用更強(qiáng)。內(nèi)皮衰老形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)表明，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs組內(nèi)皮衰老程度減輕，損傷減輕。EPCs示蹤實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs后，可促進(jìn)EPCs在受損血管的歸巢。提示中藥復(fù)方聯(lián)合EPCs后可促進(jìn)EPCs對(duì)血管內(nèi)皮的修復(fù)，中藥聯(lián)合EPCs具有一定的相加作用。

血管內(nèi)皮eNOS蛋白表達(dá)分析也表明，輸注EPCs、單用補(bǔ)陽還五湯可上調(diào)eNOS表達(dá)，促進(jìn)了血管內(nèi)皮功能的恢復(fù)；補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs可進(jìn)一步上調(diào)血管內(nèi)皮eNOS表達(dá)，交互作用分析表明中藥復(fù)方聯(lián)合EPCs均具有相加作用，這也從功能上進(jìn)一步證明了中藥復(fù)方有能促進(jìn)EPCs修復(fù)受損血管內(nèi)皮的作用，其機(jī)制可能與補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)EPCs向受損內(nèi)皮歸巢，進(jìn)而分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)。

在調(diào)節(jié)血脂、血鈣方面補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs的作用優(yōu)于單純EPCs組。推測(cè)補(bǔ)陽還五湯對(duì)血脂、血鈣具有調(diào)節(jié)作用，補(bǔ)陽還五湯通過對(duì)血脂、血鈣的調(diào)節(jié)，改善了機(jī)體內(nèi)環(huán)境，從而可促進(jìn)EPCs向受損內(nèi)皮的歸巢分化，促進(jìn)受損內(nèi)皮的修復(fù)。

為進(jìn)一步了解補(bǔ)陽還五湯與EPCs的關(guān)系，本研究還從分子機(jī)制進(jìn)行了研究探討。研究表明SDF-1/CXCR-4軸在內(nèi)皮祖細(xì)胞的歸巢、動(dòng)員和分化中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[21]。SDF-1又名CXCL12或前B細(xì)胞刺激因子，屬于CXC族趨化因子成員，CXCR-4屬于趨化因子家族， CXCR-4是SDF-1唯一的受體，是一個(gè)有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白耦聯(lián)受體，在CD34+造血干/祖細(xì)胞表面及內(nèi)皮祖細(xì)胞表面高表達(dá)[22]。SDF-1/CXCR-4軸參與造血干/祖細(xì)胞、T細(xì)胞等細(xì)胞的趨化和遷移過程,還在胚胎發(fā)育、維持造血系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)功能、介導(dǎo)免疫缺陷病毒感染等方面起重要作用。本研究結(jié)果顯示，藥物聯(lián)合EPCs輸注組的SDF-1表達(dá)高于單獨(dú)輸注EPCs組和BYHWD組。以上結(jié)果提示藥物聯(lián)合EPCs可能通過上調(diào)SDF-1的表達(dá)而促進(jìn)EPCs遷移、歸巢，促進(jìn)了損傷內(nèi)皮的修復(fù)。而CXCR-4的表達(dá)出現(xiàn)了反向的趨勢(shì)，這可能與選擇的檢測(cè)標(biāo)本為血管有關(guān)，由于SDF-1可在血管內(nèi)膜表達(dá)，而CXCR-4僅在EPCs表面表達(dá)，當(dāng)SDF-1與CXCR-4耦合整合入血管內(nèi)膜完成修復(fù)過程，前者的大量表達(dá)勢(shì)必消耗大量的CXCR-4方能完成EPCs歸巢，因而出現(xiàn)了CXCR-4結(jié)果的負(fù)反饋這一推測(cè)還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，從血管形態(tài)學(xué)、血脂、血鈣和血管內(nèi)皮功能檢測(cè)結(jié)果并結(jié)合交互作用分析可知，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合EPCs可以增加損傷血管內(nèi)皮的修復(fù)作用，其機(jī)制可能與補(bǔ)陽還五湯通過改善局部微環(huán)境、促進(jìn)了EPCs的歸巢有關(guān)。

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(責(zé)任編輯： 盧 萍， 余小慧)

BYHWD promotes endothelial progenitor cells to repair damaged vascular endothelium

ZHANG Wei1, HE Bing2, LI Liang3, LI Fei3, CAO Lang3, LIU Xiao-dan3, DENG Chang-qing3

(1TheAffiliatedYueyangHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Yueyang414000,China;2TheSecondAffiliatedHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410005,China;3InstituteofIntegratedChineseandWesternMedicineofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410208,China.E-mail:zeen6463@sina.com)

AIM: To investigate the role of Buyanghuanwu decoction (BYHWD) in promoting endothelial progenitor cells (EPCs)-induced recovery of damaged vascular endothelium.METHODSThe endothelial damaged rats were lavaged with BYHWD and injected with EPCs through vena caudalis. The repaired situation of damaged endothelium was observed.RESULTSCompared with EPCs group and BYHWD group, the endothelial thickness was reduced, the levels of calcium, triglycerides and total cholesterol were decreased, but the high density lipoprotein levels were increased. In addition, the protein expression of vascular endothelial nitric oxide synthase and vascular stromal cell-drived factor-1 was sig-nificantly increased, but the expression of CXC chemokine receptor-4 was significantly reduced in BYHWD+EPC group.CONCLUSIONBYHWD promotes EPCs repairing damaged endothelium, the mechanism may be related to improve the internal environment and promotes the EPCs homing.

Buyanghuanwu decoction; Endothelial progenitor cells; Vascular endothelium; Endothelial nitric oxide synthase; Stromal cell-derived factor-1； CXC chemokine receptor-4

1000- 4718(2017)11- 1969- 06

2017- 04- 12

2017- 06- 07

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81001494)；湖南省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目 (No. 15k059)；湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 2016JJ4069)

△通訊作者 Tel: 13787177397; E-mail: zeen6463@sina.com

R363； R285.5

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.11.008