蒙藥漆樹膏的炮制工藝及質(zhì)量標準研究△

包勒朝魯，吳·斯琴畢力格，那生桑，烏蘭圖雅

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學 蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.天津中醫(yī)藥大學，天津 3001932；3.內(nèi)蒙古國家蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

·中藥工業(yè)·

蒙藥漆樹膏的炮制工藝及質(zhì)量標準研究△

包勒朝魯1，吳·斯琴畢力格2，那生桑1，烏蘭圖雅3*

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學 蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.天津中醫(yī)藥大學，天津 3001932；3.內(nèi)蒙古國家蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

目的建立蒙藥漆樹膏炮制規(guī)范。方法根據(jù)蒙醫(yī)藥文獻記載，篩選漆樹膏的蒙醫(yī)炮制的代表性、可行性方法，通過正交試驗設(shè)計，優(yōu)化該方法的工藝，并參照《中華人民共和國藥典》(2015年版·四部)相關(guān)方法，采用三氯化鐵顯色反應(yīng)，鑒定酚類化合物；對供試品水分、灰分、浸出物進行檢測；采用紫外分光光度法，以沒食子酸為對照，在759.5 nm波長下對供試品的活性成分總酚進行定量分析。結(jié)果漆樹膏的最理想的炮制方法為黃油制，其最佳工藝條件為藥材和黃油比例1∶3，黃油表面溫度為200 ℃，浸炮時間為20 min。炮制品三氯化鐵顯色反應(yīng)為陽性；三批樣品水分含量在6.59%～11.28%；總灰分含量在3.02%～7.55%；酸不溶性灰分含量在1.15%～4.49%；醇溶性浸出物含量在9.55%～22.97%；總酚在0.182～1.254 mg·L-1呈良好的線性關(guān)系，該方法平均回收率為99.31%，RSD為1.55%，總酚含量在10.34～20.45 mg·g-1。結(jié)論本炮制方法不僅符合漆樹膏的蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制品目的，也吻合現(xiàn)代藥學理論，是一種較為理想的炮制工藝。

蒙藥；漆樹膏；沒食子酸；總酚；紫外分光光度法；質(zhì)量標準

漆樹膏是蒙醫(yī)常用的瀉下藥之一，為漆樹科植物漆樹Toxicocicndnmvernicifluum(Stokes)F.A.BarkL的樹脂經(jīng)加工后的干燥品[1]。味澀、甘，性涼，效重、糙，有毒。具有瀉下、生肌、愈傷、燥膿“協(xié)日烏蘇”盛熱、痞癥、“協(xié)日烏蘇”病、蟲病等疾病。孕婦、老人、嬰幼兒、體弱者禁用。漆樹膏作為蒙醫(yī)臨床藥之一，入藥于多種復(fù)方制劑，但是其炮制方法多樣，基本沒有工藝條件。本研究在傳統(tǒng)炮制法的基礎(chǔ)上，篩選出具有代表性、可行性的炮制方法，通過L9(34)正交試驗法進一步優(yōu)化炮制工藝，并參照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部)[2]相關(guān)方法，建立了其炮制品的質(zhì)量標準，為漆樹膏的炮制和飲片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TU-1901型紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；HH-S8型恒溫水浴箱(北京科偉永興儀器有限公司)；JA5003N型電子分析天平(上海菁海儀器有限公司)；DFT-200萬能粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；SX-5-14型箱式電阻爐(金壇市榮華儀器制造有限公司)；BGZ-246型電熱鼓風干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；Heizbad Hei-VAP型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國)；HDM-500B型電熱套(金壇市榮華儀器制造有限公司)；DL-1型電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.2 化學試劑

沒食子酸(中國食品藥品檢定研究所，批號：110831-201204，含量：89.9%)；甲苯(天津市風窗化學試劑科技有限公司，批號：20100910)；乙醇(天津市津東天精細化學試劑廠，批號：20121122，)；硝酸銀(北京北化精細化學品有限公司，批號：20071202)；鎢酸鈉(上海埃彼化學試劑有限公司，批號：20090322)；鉬酸鈉(上海埃彼化學試劑有限公司，批號：20090116)；濃鹽酸(固安縣北方化學工業(yè)公司，批號：20060302)；硫酸鋰(天津市光復(fù)精細化工研究所，批號：20160305)；雙氧水(成都倍立康醫(yī)療器械有限公司，批號：20150902)；無水碳酸鈉(天津市風窗化學試劑科技有限公司，批號：20091123)；磷酸(天津市永晟精細化工有限公司，批號：20110310)，以上均為分析純。

漆樹膏市場購置，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學蒙醫(yī)藥研究院那生桑教授鑒定為漆樹科植物漆樹Toxicocicndnmvernicifluum(Stokes)F.A.BarkL的樹脂經(jīng)加工后的干燥品；黃油市場購置。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)用SPSS14.0統(tǒng)計軟件處理，組間比較用t檢驗。

1.4 各種溶液的配置

Folin-酚試劑：準確稱取20 g鎢酸鈉和5 g鉬酸鈉于圓底燒瓶中，用140 mL蒸餾水溶解，加入10 mL磷酸(濃度為85%)和20 mL濃鹽酸，文火回流10 h，然后依次加入3 g 硫酸鋰及15 mL雙氧水，加熱沸騰15 min至亮黃色，不得帶微藍和綠色。冷卻，移入250 mL量瓶中，定容，貯于棕色瓶中，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1 mol·L-1的Na2CO3：無水碳酸鈉2.1 g加水溶解成20 mL，即可。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制方法的篩選

漆樹膏的蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制方法為白油制。《四部醫(yī)典》載：“漆樹膏在白油中炮制”；《藍玻璃》云：“漆樹膏在白油湯中蘸制”；《炮制明藏》曰：“熱油里放至冷卻后小炒；《甘露四部》記：“漆樹膏放進融化的油炮制”；《無誤蒙藥鑒》載：“漆樹膏在白油里炮制”；《哲對寧諾爾》云：”“漆樹膏白油中浸泡三天”；《通瓦嘎吉德》曰：“在黃油中煮”；《蒙藥志》：“在砂鍋里與白油一起煮制成膏”。綜上可以看出漆樹膏的蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制為油制，制的方法有油里煮和熱油中浸泡，其中對于輔料油的類除了《甘露四部》沒有明確指定和《通瓦嘎吉德》明確指出黃油”外，其余古籍均稱為白油。但是目前奶食品市場上對于白油有不同的說法，有人說是整個奶制品油的總稱，有人說是酸奶油，有人說是奶油，還有人說黃油等。為了弄清油的類型及炮制方法的可行性，我們按照以上蒙醫(yī)古籍記載，分別以黃油、酸奶油、酸奶、酸奶油渣和鮮奶為輔料，采用蒙醫(yī)炮制1∶3的比例通則[4]，進行炮制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥材在5種輔料中浸泡幾乎沒有任何的改變，既不溶解，也不軟化。酸奶煮制后雖然剛開始藥材能夠軟化，但生成大量的酸奶油渣，取出后酸奶油渣和藥材混為一體，無法分離；鮮奶煮制后藥材完全溶解，但隨即生成大量的奶渣，無法分離藥材和奶渣；黃油煮制后藥材軟化，但不溶解，不生成任何渣子，也不影響藥材的重量，但是煮后藥材極容易粘鍋底，易于焦化，如果將藥材浸炮于熱黃油里，不僅達到以上程度，也能避免藥材的焦化，故選擇了在黃油里浸炮的方法。這也吻合蒙醫(yī)經(jīng)典古籍《甘露四部》中記的“漆樹膏放進融化的油炮制”。

2.2 炮制工藝的優(yōu)化

2.2.1 影響因素及水平的選擇 在前期研究工作基礎(chǔ)上，確定了漆樹膏黃油制的主要影響因素為黃油和藥材比例、黃油溫度、浸泡時間。因此采用藥材和黃油比例、黃油溫度、浸泡時間為影響因子，每個因素設(shè)3個水平，采用L9(34)正交設(shè)計法，以總酚含量和醇溶性浸出物含量為評價指標，通過加權(quán)法進行評分，對試驗結(jié)果進行分析，同時對正交設(shè)計的9個炮制品和最佳工藝的炮制品進行炮制過程中藥材的粘鍋底的情況、取出時的容易程度以及炮制品的脆性進行了觀察。最后結(jié)合正交試驗結(jié)果和炮制過程的評價，篩選出既能代表漆樹膏蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制目的，也符合現(xiàn)代藥學理論的炮制工藝路線。

2.2.2 浸出物的測定 漆樹膏為蒙醫(yī)常用下瀉藥，與中藥干漆同來源藥物，《中華人民共和國藥典》(2015年版)對干漆進行了醇溶性浸出物的測定，故選定其為炮制工藝篩選的考察指標。浸出物的測定照醇溶性浸出物測定法(《中華人民共和國藥典》2015版四部通則2201)項下的熱浸法測定，用乙醇作溶劑。

2.2.3 總酚含量的測定 漆樹膏是有毒蒙藥，經(jīng)黃油制后可降低毒性，緩和其峻瀉之性，據(jù)文獻報道漆樹膏主要活性成分為酚類化合物[4]，故選定總酚含量為炮制工藝篩選的考察指標。

2.2.3.1 波長的選擇 供試品溶液的制備：精密稱取漆樹膏細粉(過60目篩)0.10 g，置于250 mL圓底燒瓶中，加入50 mL 95%乙醇回流提取1.5 h，過濾，取續(xù)濾液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?質(zhì)量濃度為0.002 g·mL-1)。

對照品溶液的制備：精密稱取沒食子酸1.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加1 mL無水乙醇，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1)。用時用無水乙醇稀釋10倍后取1 mL用蒸餾水稀釋8倍，即可。

測定波長的選擇：精密吸取0.1 mL供試品溶液及0.4 mL對照品溶液，分別置于5 mL容量瓶中，加入1 mL的folin-酚試劑，黑暗條件下放置10 min，然后加入2 mL的1 mol·L-1的Na2CO3，加水至5 mL，50 ℃水浴10 min，同時取0.1 mL 95%乙醇，加入1 mL的folin-酚試劑，黑暗條件下放置10 min，然后加入2 mL的1 mol·L-1的Na2CO3，加水至5 mL，50 ℃水浴10 min為空白。照紫外分光光度法(《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則0400)于400～800 nm處掃描，結(jié)果對照品在759.5 nm有最大吸收峰，見圖1。，供試品在762 nm有最大吸收峰，見圖2，兩者相差僅3 nm。結(jié)合Folin-酚比色法的原理：在堿溶液中酚類化合物可以將鎢酸鈉還原生成藍色化合物，該化合物在770 nm附近有最大吸收峰。故本實驗選擇759.5nm為測定波長。

圖1 沒食子酸標準品全波長掃描

圖2 漆樹膏藥材全波長掃描

2.2.3.2 標準曲線的繪制 精密量取沒食子酸對照溶液0.4、0.8、1.2、1.6 mL，按上述方法分別置于5 mL容量瓶中，加入1 mL的folin-酚試劑，黑暗條件下放置10 min，然后加入2 mL的1 mol·L-1的Na2CO3，加水至5 mL，50 ℃水浴10 min。同時取0.1 mL 95%乙醇，加入1 mL的folin-酚試劑，黑暗條件下放置10 min，然后加入2 mL的1 mol·L-1的Na2CO3，加水至5 mL，50 ℃水浴10 min為空白，照分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅴ)于759.5 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(Y)，沒食子酸的濃度(mg·L-1)為橫坐標(X)，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=0.547X-0.032(r=0.999 4)，表明沒食子酸在0.182～1.254 mg·L-1與吸光度值之間呈良好線性關(guān)系。

2.2.3.3 方法學考察 精密度試驗：精密吸取供試品溶液0.1 mL，按2.2.3.2項下方法顯色，測定吸光度，連續(xù)測定6次，結(jié)果吸光度平均值為0.171，RSD為1.19%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取供試品溶液0.1 mL，按2.2.3.2項下方法顯色，每隔30 min測定吸光度，連續(xù)測定4次，見表2，吸光度平均值為0.134，RSD為1.96%，表明供試品溶液在1.5 h內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗：精密稱取供試品粉末6份，每份0.1 g，按2.2.3.1項下方法提取，按2.2.3.2項下方法顯色，測定吸光，結(jié)果吸光度平均值為1.142，RSD為1.46%，表明本方法重復(fù)性良好。

加樣回收率試驗：精密稱取同一批供試品粉末6份，每份0.050 g，按2.2.3.1項下方法制備供試品溶液，在供試品溶液中加入適量的對照品溶液，按2.2.3.2項下方法顯色后測定吸光度，計算加樣回收率，結(jié)果見表1，平均回收率為99.31%，RSD為1.55%，表明本方法準確可靠。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.3 正交試驗因素、水平的設(shè)計

見表2。

表2 因素水平表

2.4 正交試驗

取大小均一的凈漆樹膏共9份，置于砂鍋中，按正交試驗設(shè)計，倒入相應(yīng)比例預(yù)熱至相應(yīng)溫度的黃油(將黃油煮制相應(yīng)溫度，以紅外線測溫儀測量控制黃油表面溫度)，至相應(yīng)時間后，取出，放涼，以上述確定的測定方法和評分標準，對不同條件下制備的炮制品進行評分和測定，結(jié)果見表3～4。

綜合評分=浸出物含量×0.5+總酚含量×0.5

(1)

表4 結(jié)果方差分析表

注：F(0.05)=19.0。

從表3、表4中可知，以浸出物和總酚類為指標的最佳條件為A1B1C2，即藥材和黃油比例為1∶3，黃油表面溫度為200 ℃，浸炮時間為20 min。影響次序為A>C>B。三個因素對漆樹膏浸出物和總酚含量均無顯著性差異(P>0.05)。

2.5 炮制操作過程評價

對炮制過程中藥材的粘鍋底的情況和取出時的容易程度以及炮制品的脆性進行觀察，結(jié)果見表5。

表5 炮制操作過程評價

從表5可知，不粘鍋時藥材的脆性差，油膩，不易粉碎；粘鍋底的一部分粘的厲害，不易取出，一部分粘的少，容易取出；在粘鍋底并容易取出當中除了第7號油性大，不易粉碎外，3、4和10號脆性好，容易粉碎，便于藥材的粉碎。因此從炮制操作過程看3、4和10號，即A1B3C3、A2B1C2和A1B1C2最為適宜的條件。

2.6 最佳炮制工藝的確定

結(jié)合正交試驗結(jié)果和炮制操作過程評價結(jié)果，最終選擇了既能使藥材浸出物含量及總酚含量高，又能保證炮制操作便利并便于藥材粉碎的方法即A1B1C2，即藥材和黃油比例為1∶3，黃油表面溫度為200 ℃，浸炮時間為20 min。

2.7 最佳炮制工藝條件的驗證試驗

精密稱取不同批次漆樹膏3份，按最佳炮制條件A1B1C2平行操作，每份0.10 g，按2.2.3.1項下方法制備供試品溶液，2.2.3.2項下方法顯色后測定吸光度，計算總酚含量，結(jié)果見表6，總酚含量在21.21～22.35 mg·g-1，平均含量為21.88 mg·g-1，RSD為2.73%。

表6 黃油制漆樹膏總酚含量測定結(jié)果

2.8 炮制品質(zhì)量標準研究

2.8.1 性狀 本品呈不規(guī)則塊狀，深棕褐色，表面油亮，質(zhì)脆，易粉碎，具黃油特殊臭氣。

2.8.2 鑒別 1)本品粉末深棕褐色，可見脂肪油滴，見圖3～4；2)取本品一小塊，置瓷蒸發(fā)皿中，點火即燃燒，產(chǎn)生黑煙并發(fā)出強烈漆臭，伴有黃油香味，見圖5；3)取本品粉末1 g，加乙醇10 mL，置熱水浴中加熱5 min，放冷，濾過。取濾液1 mL，加三氯化鐵試液1～2滴，顯墨綠色，見圖6。

圖3 黃油制漆樹膏粉末圖(×100)

圖4 黃油制漆樹膏粉末圖(×400)

圖5 黃油制漆樹膏火試現(xiàn)象

圖6 黃油制漆樹膏三氯化鐵顯色反應(yīng)

2.8.3 檢查 由于本品為樹脂類藥材，在采集和運輸過程中易帶入塵土等非藥用部分，同時容易受到干燥或潮濕環(huán)境的影響，故正文規(guī)定了水分、總灰分和酸不溶性灰分的限度檢查，以控制藥材的純度。

水分：照水分測定法(《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0832)[3]項下第四法進行測定，結(jié)果見表7。

表7 黃油制漆樹膏水分含量測定表

結(jié)果表明，三批樣品水分含量在6.59%～11.28%，平均值為8.85%。故規(guī)定黃油制漆樹膏水分含量不得過12%。

灰分：取三批樣品，每批3份，每份約4 g(通過2號篩)，照總灰分和酸不溶性灰分測定法(《中華人民共和國藥典》2015版四部通則2302)[3]進行測定，結(jié)果見表8～9。

結(jié)果表明，三批樣品總灰分含量在3.02%～7.55%，平均值為5.93%；酸不溶性灰分含量在1.15%～4.49%，平均值為3.19%，故規(guī)定黃油制漆樹膏總灰分不得過8.0%，酸不溶性灰分不得過5.0%。

表8 黃油制漆樹膏總灰分含量測定表

表9 黃油制漆樹膏酸不溶性灰分含量測定表

2.8.4 浸出物的測定 取三批本品，每批三份，每份約4 g(通過2號篩子)，精密稱定，照醇溶性浸出物測定法(《中華人民共和國藥典》2015版四部通則2201)[3]項下的熱浸法測定，用乙醇作溶劑。結(jié)果見表10。

表10 黃油制漆樹膏浸出物含量測定表

結(jié)果表明，三批樣品浸出物含量在9.55%～22.97%，平均值為14.34%。故考慮其常溫下容易化解等不定因素，規(guī)定黃油制漆樹膏醇溶性浸出物(熱浸法)不得少于5.0%。

2.8.5 總酚含量的測定 取三批樣品，每批三份，每份約0.10 g，按最佳炮制條件炮制，按2.2.3.1項下方法制備供試品溶液，按2.2.3.2項下方法顯色后測定吸光度，并計算，結(jié)果見表11，總酚含量在10.34～20.45 mg·g-1，均含量為15.41 mg·g-1，故規(guī)定黃油制漆樹膏的總酚含量不得少于5 mg·g-1。

表11 黃油制漆樹膏總酚含量的測定表

3 討論

漆樹膏為蒙醫(yī)臨床常用的瀉下藥，由于其臨床療效顯著，入味于多種復(fù)方制劑，但是其現(xiàn)代研究幾乎為零，化學成分、藥理作用等尚不明確，并且沒有蒙藥的質(zhì)量標準體系。本研究參照中藥飲片現(xiàn)代炮制研究[4]及正交試驗設(shè)計方法[5]，對漆樹膏的蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制方法進行了優(yōu)化，并初步擬定了其質(zhì)量控制范圍，初步建立了較為完善的質(zhì)量標準，為保證漆樹膏及其復(fù)方制劑臨床療效的均一性和穩(wěn)定性提供了較為完善的質(zhì)量標準體系。

[1] 羅布桑.蒙藥學[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2006.

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3] 內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙藥材標準[S].赤峰：內(nèi)蒙古科學技術(shù)出版社，1986.

[4] 羅春麗,黃明進,李金玲,等.不同炮制工藝對制首烏外觀性狀及內(nèi)在質(zhì)量的影響[J].中國現(xiàn)代中藥,2015,17(10):1070-1074.

[5] 于曉,戴衍朋,周倩,等.正交試驗設(shè)計優(yōu)選升麻炭最佳炮制工藝[J].中國現(xiàn)代中藥,2015,17(8):844-846.

StudyonProcessingTechnologyandQualityStandardofMongolianMedicineQishugao

BAO Lechaolu1，WU Siqinbilige2，NA Shengsang1，WU Lantuya3*

(1.MongolianMedicineResearchInstituteofInnerMongoliaMedicalUniversity，Hohhot010110，China；2.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193，China；3.Departmentofpulmonarydisease，InnerMongoliaInternationalMongolianHospital，Huhhot010010，China)

Objective：To establish the processing standard of Mongolian medicine Qishugao.MethodsAccording to literature，the representative processing method was selected，and optimized through orthogonal design.Referring to the China Pharmacopoeia (2015)，the relevant method was used to identify phenols，and measure water content，ash content and ethanolic extract.The total phenol as active component was detected with gallic acid as reference substance by spectrometric method.ResultsThe optimal preparation for Qishugao was butter cream processing，the condition was as follows：drug and butter ratio 1∶3，butter the surface temperature 200 ℃，soaking time 20 min.The color reaction of ferric chloride was positive.The water content of the three batches was between 6.59%-11.28%.The total ash content was between 3.02%-7.55%.The content of acid-insoluble ash was between 1.15%-4.49%.The content of alcohol soluble extract was between 9.55%-22.97%.The total phenol content was 0.182-1.254 mg·L-1.The average recovery was 99.31%，RSD was 1.55%，and the total phenol content was between 10.34-20.45 mg·g-1.ConclusionThe processing method is consistent with modern technology，it also follows traditional Mongolian medicine experience.

Mongolian medicine；Qishugao；gallic acid；total phenols；UV；quality standard

內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計劃項目(20151230)

*

烏蘭圖雅，副主任醫(yī)師，研究方向：蒙醫(yī)臨床研究；Tel:(0471)6653173，E-mail：2501598956@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.021

2017-01-16)