銀丹心腦通軟膠囊定量質(zhì)量控制提升研究△

宋軍妹，惠權(quán)斌，呂文英，成龍

(1.陜西寶雞市人民醫(yī)院，陜西 寶雞 721000；2.北京市東城區(qū)朝陽(yáng)門社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，北京 100061；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100093)

·中藥工業(yè)·

銀丹心腦通軟膠囊定量質(zhì)量控制提升研究△

宋軍妹1，惠權(quán)斌1，呂文英2，成龍3*

(1.陜西寶雞市人民醫(yī)院，陜西 寶雞 721000；2.北京市東城區(qū)朝陽(yáng)門社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，北京 100061；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100093)

目的探索中藥復(fù)方多指標(biāo)成分質(zhì)控方法，以銀丹心腦通軟膠囊為研究對(duì)象，進(jìn)行中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究。方法采用HPLC、UPLC-PDA方法，多波長(zhǎng)檢測(cè)，同時(shí)完成了多指標(biāo)成分的定量測(cè)定。結(jié)果該方法簡(jiǎn)單、快捷靈敏，可作為銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量控制方法。結(jié)論HPLC多波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定中藥復(fù)方多指標(biāo)成分具有可行性和應(yīng)用價(jià)值。

中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)；銀丹心腦通軟膠囊；高效液相色譜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

藥品的質(zhì)量控制是一個(gè)綜合體系，但其模式不外乎感官評(píng)價(jià)、生物評(píng)價(jià)和化學(xué)評(píng)價(jià)。對(duì)于目前我國(guó)中藥的質(zhì)量控制而言，主流還是化學(xué)評(píng)價(jià)和感官評(píng)價(jià)，生物評(píng)價(jià)近年來(lái)得到了業(yè)界的高度重視。中藥復(fù)方有效成分和指標(biāo)成分的含量測(cè)定是中藥復(fù)方質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的有效手段之一，其有助于提高質(zhì)量評(píng)價(jià)的科學(xué)性和合理性。銀丹心腦通軟膠囊是治療冠心病心絞痛、高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)后遺癥等心腦血管疾病的中藥大品種，具有一定臨床治療價(jià)值和優(yōu)勢(shì)[1-4]。探索與其功能、主治直接相關(guān)的有效成分化學(xué)質(zhì)量控制和生物活性評(píng)價(jià)對(duì)于有效地進(jìn)行全過(guò)程質(zhì)量控制系統(tǒng)，提升質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保臨床療效的一致性十分重要，并且需求迫切。銀丹心腦通軟膠囊指紋圖譜研究表明，蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B含量較高[5-6]，蘆丁主要來(lái)源于銀杏葉，野黃芩苷和丹酚酸B分別來(lái)源于燈盞細(xì)辛和丹參，因此本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-PDA對(duì)多批銀丹心腦通軟膠囊中蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B進(jìn)行測(cè)定，以此作為銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量控制的企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITY UPLC(美國(guó)Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、Empower2色譜工作站)；Millipore超濾儀；TU-1901紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器公司，UV Win5工作站)；METTLER TOLEVO十萬(wàn)分之一電子天秤；HT-300型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TGL-16G高速離心機(jī)(湖南恒諾儀器有限公司)。

1.2 試劑

蘆丁(成都克洛瑪生物科技有限公司，批號(hào)：130915)；丹酚酸B(成都克洛瑪生物科技有限公司，批號(hào)：131112)；野黃芩苷(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：YY20110513)；甲酸為分析級(jí)；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其余試劑為分析純。

銀丹心腦通軟膠囊貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司生產(chǎn)，樣品批次見(jiàn)表1。

表1 銀丹心腦通軟膠囊樣品批次

2 方法

2.1 供試品溶液制備

銀丹心腦通軟膠囊分別去外殼，稱取內(nèi)囊物0.2 g，置于50 mL具塞錐形瓶，加75%甲醇25 mL，超聲提取(90 W，40 KHz，30 ℃)30 min，8000 r·min-1離心10 min，取上清液，定容至25 mL容量瓶中，過(guò)0.22 μm尼龍濾膜(津騰)即為供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液制備

分別精密稱取蘆丁、野黃芩苷2.0、5.0 mg置于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度；精密稱取丹酚酸B 2.0 mg置于10 mL容量瓶中，加少量75%甲醇超聲溶解后用75%甲醇定容。

2.3 色譜方法

ACQUITY BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相0.5%甲酸水(A)-0.5%甲酸乙腈(B)，梯度洗脫，見(jiàn)表2。流速：0.49 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：255 nm、333 nm、286 nm，色譜圖見(jiàn)圖1。

表2 梯度洗脫表

注：1.蘆??；2.野黃芩苷；3.丹酚酸B；A.蘆丁對(duì)照品(255 nm)；B.野黃芩苷對(duì)照品(333 nm)；C.丹酚酸B對(duì)照品(286 nm)；D.供試品。圖1 超高液相色譜圖

3 結(jié)果與討論

3.1 線性關(guān)系考察

取蘆丁、野黃芩苷對(duì)照品溶液，分別稀釋6、8、10、15、20倍；取丹酚酸B對(duì)照品溶液稀釋4、6、8、10、20倍。按照上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣5 μL。以峰面積積分(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得到3種化合物的回歸方程、相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。

表3 蘆丁、野黃芩苷、丹酚酸B三種成分的線性回歸方程

3.2 精密度試驗(yàn)

精密稱取供試品S1 0.2 g，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣體積為5 μL，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，供試品溶液各指標(biāo)成分的RSD分別為2.61%、3.11%、4.98%，均小于5%，表明精密度良好。

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取供試品S1 0.2 g，制備供試品溶液，按照上述條件，分別在0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，供試品溶液各指標(biāo)成分的RSD分別為2.88%、3.46%、3.31%，均小于5%，表明供試品在24 h內(nèi)各成分均穩(wěn)定。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱取6份供試品S1，每份0.2 g，制備6份供試品溶液，按照上述條件進(jìn)樣，每次進(jìn)樣體積為5 μL，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，供試品溶液各指標(biāo)成分的RSD分別為3.78%、4.66%、1.97%，表明重復(fù)性良好。

3.5 加樣回收率試驗(yàn)

稱取已知含量的同一批次樣品S1 6份，每份0.1 g，精密稱定，每份樣品加入蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B對(duì)照品溶液，加入與待測(cè)樣品中三種成分量比為1∶1。然后按照供試品制備方法制備供試品溶液，按照色譜方法進(jìn)樣，進(jìn)樣量為5 μL，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 不同化合物的回收率試驗(yàn)(n=6)

3.6 樣品測(cè)定結(jié)果

分別精密稱取不同批次的銀丹心腦通軟膠囊內(nèi)囊液0.2 g，制備待測(cè)樣品，測(cè)定待測(cè)樣品中各成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 銀丹心腦通軟膠囊多成分含量測(cè)定結(jié)果 mg·g-1

3.7 結(jié)論與討論

十二五以來(lái)，我國(guó)力推的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高行動(dòng)計(jì)劃，旨在加強(qiáng)中藥標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)，完善技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)體系，努力將我國(guó)中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)技術(shù)提升為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。銀丹心腦通軟膠囊源于苗族治療心腦血管病的經(jīng)驗(yàn)方，由銀杏葉、丹參、燈盞細(xì)辛、絞股藍(lán)、山楂、大蒜、三七、艾片等藥物組成。因其最早是地方藥品標(biāo)準(zhǔn)上升為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[WS-11332(ZD-1332)-2002]，研究基礎(chǔ)較為薄弱，含量測(cè)定項(xiàng)下僅有丹參水溶性成分丹參素的定量質(zhì)控[7]。在2011年標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)正研究過(guò)程中，參照銀杏葉的定量質(zhì)控經(jīng)驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS-11332(ZD-1332)-2002-2011Z]中增加了對(duì)銀杏葉總黃酮醇苷的定量測(cè)定[8-9]，目前銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已被《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部收載。

在完成銀丹心腦通軟膠囊主要活性組分的體內(nèi)過(guò)程研究后，針對(duì)含量較高的主要心血管活性成分進(jìn)行了定量質(zhì)控研究。本研究采用UPLC建立了銀丹心腦通軟膠囊中蘆丁、野黃芩苷、丹酚酸B三種成分的含量測(cè)定方法，該種方法準(zhǔn)確、快速、靈敏，對(duì)10批不同生產(chǎn)日期的樣品進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定可靠。本方法既提供了一種快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、分離度高的方法，又可為全面控制銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量提供參考，確保其臨床療效的可靠性與一致性。該質(zhì)控方法納入企業(yè)內(nèi)控質(zhì)量體系，確保產(chǎn)品安全、有效和質(zhì)量可控，對(duì)促進(jìn)大中藥產(chǎn)業(yè)的良性互動(dòng)式發(fā)展具有積極的示范意義。

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StudyonMultipleActiveIngredientsQuantitativeControlofYindanxinaotongCapsule

SONG Junmei1，HUI Quanbin1，LYU Wenying2，CHENG Long*

(1.TheHospitalofBaojipeople，BaojiShanxi721000，China；2.CommunityhealthcentralofChaoyanmen，Beijing100061，China；3.TheInstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100093，China)

Objective：To explore the quality control method of multi-index active ingredients of traditional Chinese medicine compound，and improve quality control standard of Yindanxinnaotong capsule.MethodsUPLC、UPLC-PDA with multi-wavelength detection method was used to analyze the multi-compounds.Rutin，scutellarin and phenolic acid B was determined simultaneously.ResultsThe method was simple and rapid，and it could be used as one of the methods for quality control of Yindanxinnaotong capsule.ConclusionThe method is simple，accurate and reliable and not only enables the simultaneous determination of the content of the rutin，scutellarin and phenolic acid B in Yindanxinnaotong capsule，but also provides a simple and feasible quality evaluation method for traditional Chinese medicine compound.

Quality evaluation of the traditional Chinese medicine compound；Yindanxinnaotong capsule；HPLC；quality standard

重大新藥創(chuàng)制子課題(2012ZX09201201-003)

*

成龍，高級(jí)工程師，研究方向：中藥藥代動(dòng)力學(xué)及新藥開(kāi)發(fā)；E-mail：13581972102@139.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.023

2017-05-09)