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    核桃油對大鼠青光眼模型視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用

    2017-11-20 08:13:50謝林英謝靜張海清
    當代醫(yī)學 2017年32期
    關鍵詞:叢狀核桃油神經(jīng)節(jié)

    謝林英,謝靜,張海清

    (贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院眼科,江西 贛州 341000)

    核桃油對大鼠青光眼模型視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用

    謝林英,謝靜,張海清

    (贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院眼科,江西 贛州 341000)

    目的 觀察核桃油對大鼠青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用。方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cmH2O(14.63 kPa)高眼壓,誘導大鼠視網(wǎng)膜缺血60min,建立急性青光眼模型。正常對照組、青光眼模型對照組、模型加藥組。均取左眼對照。分別在3 d、5 d、7 d觀察視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)及視網(wǎng)膜各層厚度。結果 模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低(P<0.05);模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高(P<0.05);模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目比較差異無統(tǒng)計學意義。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較,均發(fā)生顯著增多或增厚,差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層、外核層厚度比較差異無統(tǒng)計學意義。結論核桃油對實驗性青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞具有保護作用,在今后的臨床研究與實踐中,應對其給予足夠的重視。

    核桃油;青光眼;大鼠模型;視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞;保護作用

    核桃,又名胡核,核桃仁含油量高達65%~70%,其中不飽和脂肪酸含量高達80%以上。核桃油具有很高的營養(yǎng)價值,自古以來作為營養(yǎng)食品,尤其是其中富含亞油酸、亞麻酸及多種微量元素是神經(jīng)組織中細胞脂肪成分的良好來源[1]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面,而對其視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護研究卻鮮有文獻報道[2]。本課題探討核桃油對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞影響以及作用機制,證明核桃是具有中國特色和開發(fā)價值的中醫(yī)藥品及食品。研究中,建立了急性青光眼大鼠模型,并展開了分組實驗,結果匯報如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料 實驗所需試劑包括:濃度為4%的中型甲醛,濃度為4%的水合氯醛,濃度為1%的利多卡因,濃度為1%的氯霉素眼藥水,核桃油。實驗所需儀器包括:尼康公司的光學顯微鏡,石蠟切片機(購自德國Nussloch)。實驗動物:90只健康、成年雄性SD大鼠。

    1.2 方法

    1.2.1 研究方法 取Sprague Dawley成年大鼠,清潔級,雄性,體質量250~300 g。成年SD大鼠90只。隨機分為3組:正常對照組(對照組),青光眼損傷對照組(損傷組),青光眼損傷后核桃油喂養(yǎng)組[喂養(yǎng)動物喂養(yǎng)時間為30 d。核桃油的劑量為1 000mg/(kg·d)]。均取左眼對照。而后取3組大鼠視網(wǎng)膜病理切片及鋪片,顯微鏡觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)及IPL、INL厚度。

    1.2.2 造模方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cm H2O(14.63 kPa)高眼壓,誘導大鼠視網(wǎng)膜缺血60min,建立急性青光眼模型。

    1.2.3 標本采集 按照預先分組,在第3、5、7天進行斷頭處死大鼠,迅速將眼球摘除,經(jīng)亞甲藍對角膜上極、視神經(jīng)短端進行標記,角膜上扎一個小孔,浸潤在4%中型甲醛中,進行固定,持續(xù)24 h,而后將固定好眼球經(jīng)角膜上極、視神經(jīng)斷端對稱將眼球剖開,梯度酒精脫水,而后浸蠟。常規(guī)石蠟包埋后,連續(xù)4μm切片,進行常規(guī)蘇木精-伊紅染色。

    1.2.4 顯微鏡觀察 經(jīng)攝像顯微鏡對標本進行觀察,同時照相,對高倍視野內視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目進行統(tǒng)計,同時對視乳頭周圍1mm處視網(wǎng)膜各層厚度進行測量。

    1.3 觀察指標 對比分析各組實驗動物視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)、內叢狀層以及內核層、外核層厚度。

    1.4 統(tǒng)計學方法 采取SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行處理,計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗;P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 各組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比 經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低(P<0.05);模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高(P<0.05);模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目比較差異無統(tǒng)計學意義,見表1。

    表1 3組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比

    表1 3組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比

    注:與正常對照組比較,a P<0.05,與模型對照組比較,b P<0.05

    7 d 17.0±1.6 9.0±2.7a 17.0±2.1b組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 21.0±3.2 10.0±1.3a 19.0±3.5b 5 d 18.0±2.4 9.0±3.1a 17.0±3.4b

    2.2 視網(wǎng)膜 經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較,均發(fā)生顯著增多或增厚,差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層、外核層厚度比較差異無統(tǒng)計學意義,見表2、3、4。

    表2 3組視網(wǎng)膜內叢狀層厚度比較

    表2 3組視網(wǎng)膜內叢狀層厚度比較

    注:與正常對照組比較,a P<0.05,與模型對照組比較,b P<0.05

    組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 57.1±4.5 26.5±2.1a 43.6±3.1b 3 d 58.4±4.3 28.9±1.6a 49.8±4.3b 5 d 56.9±3.7 28.1±2.3a 46.7±2.5b

    表3 3組視網(wǎng)膜內核層厚度比較

    表3 3組視網(wǎng)膜內核層厚度比較

    注:與正常對照組比較,a P<0.05,與模型對照組比較,b P<0.05

    組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 31.2±3.2 16.6±2.1a 21.5±3.2b 3 d 30.2±3.1 19.9±2.3a 24.1±2.5b 5 d 29.9±2.7 17.3±1.4a 22.3±1.5b

    表4 3組視網(wǎng)膜外核層厚度比較(

    表4 3組視網(wǎng)膜外核層厚度比較(

    7 d 41.1±1.7 39.2±1.4 39.2±2.3組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 40.5±2.1 38.8±1.6 40.8±1.8 5 d 41.3±1.8 37.2±1.9 39.9±1.6

    3 討論

    青光眼是最常見的眼科疾病之一,可發(fā)于各年齡段,是危害人群致盲的首要原因。青光眼嚴重影響了人群的生活及工作。青光眼最早期癥狀往往表現(xiàn)為視力的明顯下降,出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡。有研究證實,青光眼患者中,存在諸多致病因素,會造成患者視神經(jīng)細胞凋亡[3]。開發(fā)一種安全、經(jīng)濟、有效的對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)保護作用的藥物具有重要的臨床意義[4]。近幾年,隨著醫(yī)學技術水平的不斷提高,基因工程、細胞因子學、中西醫(yī)保護視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡的研究越來越多[5]。核桃自古以來作為營養(yǎng)食品,它富含的亞油酸、亞麻酸及多種微量元素對神經(jīng)細胞具有很好的修復作用[6]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面,而對其神經(jīng)營養(yǎng)保護功能及機制研究鮮有文獻報道[7]。本次研究中,出于對核桃油對大鼠青光眼模型視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用進行研究分析的目的,建立了急性青光眼大鼠模型,并展開了分組實驗,結果發(fā)現(xiàn),模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低;模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高;模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目無明顯差異。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較,均發(fā)生顯著增多或增厚,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型加藥組與正常對照組比較,3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內叢狀層、內核層、外核層厚度無明顯差異。這一結果與相關文獻[8]報道結果相似,充分證實核桃油對實驗性青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞具有保護作用,在今后的臨床研究與實踐中,應對其給予足夠的重視。

    [1] 袁援生.青光眼流行病學研究進展[J].昆明醫(yī)學院學報,2010,31(9):1-3.

    [2] 樓航芳,葛鋼鋒.中西醫(yī)聯(lián)合用藥對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞bcl-2和bax基因表達的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2010,34(2):146-145.

    [3] 游玉霞,李玉潔,張海娟,等.杞貞膠囊對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞保護作用及其作用機制的實驗研究[J].眼科,2014,23(6):402-405.

    [4] 張芳玲,邵蔚.銀杏葉提取物注射液對NMDA誘導的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷的保護作用[J].南京中醫(yī)藥大學學報.2014,30(3):283-286.

    [5] 杜然然,畢宏生,郭俊國,等.枸杞多糖對體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用[J].眼科新進展,2014,34(2):119-122.

    [6] 李諾,黃麗娜,曾平.白蒺藜皂苷對慢性高眼壓兔視網(wǎng)膜SOD活性和MDA含量的影響[J].國際眼科雜志,2013,13(5):854-856.

    [7] 沈惠芳,謝欣,楊文忠,等.注射用鼠神經(jīng)生長因子多藥聯(lián)合治療對缺血性視神經(jīng)病變的作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2015,35(15):1412-1414.

    [8] 余勇軍,曾志成.益氣養(yǎng)陰活血化瘀中藥對青光眼術后視神經(jīng)保護作用的研究[J].國際眼科雜志,2011,11(12):2106-2109.

    10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.069

    贛州市指導性科技計劃(GZ2015ZSF094)

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