非小細胞肺癌患者中醫(yī)證型與外周血樹突狀細胞功能的相關(guān)性分析*

鮑建敏 沈丹 喻長法 付海衛(wèi) 陳莉莉 陳丹 張紹文

浙江省臺州市第一人民醫(yī)院浙江臺州318020

診法求索

非小細胞肺癌患者中醫(yī)證型與外周血樹突狀細胞功能的相關(guān)性分析*

鮑建敏 沈丹 喻長法 付海衛(wèi) 陳莉莉 陳丹 張紹文

浙江省臺州市第一人民醫(yī)院浙江臺州318020

非小細胞肺癌中醫(yī)證型樹突狀細胞

自1973年加拿大學者Steinman發(fā)現(xiàn)樹突狀細胞（DC）以來，大量研究表明DC是目前已知的體內(nèi)抗原提呈功能最強的專職抗原提呈細胞（APC）[1-2]，其表面能高表達MHC-Ⅱ類分子和共刺激因子CD80、CD83、CD86、CD40等，對T細胞免疫產(chǎn)生免疫應答[3]，有效激發(fā)機體的抗腫瘤免疫應答或激發(fā)細胞毒T細胞產(chǎn)生抗腫瘤效應，在機體抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。近年來一些研究提示，機體存在著不同程度的免疫力低下，與DC數(shù)量上的減少及功能上的缺陷關(guān)系密切。在此基礎上，相關(guān)研究表明DC對肺癌的預后判斷存在一定價值，但肺癌中醫(yī)證候分型與樹突狀細胞功能的相關(guān)性研究鮮有報道。為此，筆者通過對非小細胞肺癌（NSCLC）患者，進行外周血血清CD80、CD83、CD86的測定，來探討肺癌中醫(yī)證型與樹突狀細胞功能之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象：自2012年1月至2016年10月在臺州市第一人民醫(yī)院中醫(yī)科、呼吸科及腫瘤科就診符合條件的患者。納入標準：①有胸片或胸部CT等影像學檢查結(jié)果；②經(jīng)病理學或細胞學確診；③同意參加本研究并簽署知情同意。排除標準：①無病理或細胞學診斷者；②轉(zhuǎn)移性肺癌或合并其他腫瘤；③有心、腎等重要臟器功能不全者；④孕婦及哺乳期婦女。最終入組研究對象113例，參照國際抗癌組織關(guān)于肺癌的TNM分期（UICC2002），其中I期43例，II期16例，III期47例，IV期7例。根據(jù)中醫(yī)證型分組：脾虛痰濕組33例、腎陽虧虛組11例、氣滯血瘀組26例、陰虛內(nèi)熱組22例、氣陰兩虛組21例。其中男性84例，女性29例，平均年齡60.37±12.72歲。正常對照組為健康成人，共30例，男性22例，女性8例，平均年齡59.77±13.76歲。各組患者性別、年齡等基本資料比較，無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性，見表1。

1.2 研究方法：分述如下。

1.2.1 臨床癥狀記錄：由具有一定臨床經(jīng)驗的中級職稱以上醫(yī)師，記錄入組患者咳聲和痰的色、質(zhì)、量，胸悶氣短及兼癥，飲食，二便，舌象，脈象等。

1.2.2 中醫(yī)分型標準：根據(jù)NSCLC患者臨床癥狀表現(xiàn)，并參照中華中醫(yī)藥學會《腫瘤中醫(yī)診療指南》（2008-11-30發(fā)布）擬定的標準，分為脾虛痰濕證、陰虛內(nèi)熱證、氣陰兩虛證、腎陽虧虛證及氣滯血瘀證5組。

1.2.3 標本收集：清晨抽取空腹患者靜脈血，肝素抗凝，采用淋巴細胞分離液密度梯度離心法，收集外周血單個核細胞(PBMC)，再從中分離收集CDl4+單核細胞。1.2.4DC的分離、純化與培養(yǎng)：于分離好的CDl4+單核細胞中加入RPM1640完全培養(yǎng)基，并加誘導因子rGMCSF(1000U/ml)、rIL-4(500U/ml)，5%CO2、37.0℃條件下培養(yǎng)。每隔2天換半液，保持細胞因子終濃度一致，誘導2天后加入成熟誘導因子rTNF-a(10ng/ml)、IL-1β(10ng/ml)、IL-6(10ng/ml)、PGE2(1μg/ml)培養(yǎng)2天，即得到成熟DC。

1.2.5 DC的檢測：成熟DC與用異硫氰酸酯（FITC）標記的CD80、CD83、CD86單克隆抗體4℃孵育30min，PBS洗滌2次，用流式細胞儀檢測。

1.2.6 主要試劑及儀器：CD80、CD83、CD86檢測采用美國BD-FACScalibus流式細胞儀，試劑為公司配套提供。RPMI1640完全培養(yǎng)基購自荷蘭Duchefa公司，rGM-CSF、rIL-4、rTNF-a、IL-1β、IL-6、PGE2購自以色列Cyto-Lab/PeprotechAsia公司。

1.3 統(tǒng)計學方法：采用SPSS17.0軟件進行分析，計數(shù)資料的比較采用RxC列聯(lián)表資料的χ2檢驗；計量資料用±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Tambane’sT2法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

表2 各組NSCLC癌患者外周血CD80、CD83、CD86的表達情況（±s，%）

表2 各組NSCLC癌患者外周血CD80、CD83、CD86的表達情況（±s，%）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與脾虛痰濕組比較，△P＜0.05；與腎陽虧虛組比較，▲P＜0.05；與氣滯血瘀組比較，☆P＜0.05；與陰虛內(nèi)熱組比較，★P＜0.05。

CD86 108.21±19.50 102.61±13.79 99.95±11.74 91.33±14.09*△85.47±10.17*△▲85.27±12.42*△▲組別正常對照組脾虛痰濕組腎陽虧虛組氣滯血瘀組陰虛內(nèi)熱組氣陰兩虛組例數(shù)30 33 11 26 22 21 CD80 92.75±16.42 66.13±12.87*60.66±11.87*53.51±12.19*△53.45±8.06*△39.09±7.76*△▲☆★CD83 51.49±8.60 44.46±8.75*46.15±9.04 42.88±6.04*39.70±7.75*△▲34.99±8.31*△▲☆

2 結(jié)果

NSCLC患者不同中醫(yī)證型與外周血CD80、CD83、CD86的關(guān)系。詳見表2。

3 討論

中醫(yī)學對肺癌的認識，多歸屬于“息賁”“肺積”等范疇，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有類似肺癌證候的描述。肺癌的病機多責之于人體正氣虛損，臟腑功能失調(diào)，導致肺氣失宣、氣滯血瘀、聚痰生癖而形成腫塊。肺癌臨床表現(xiàn)復雜多樣，但總體來說，早期仍以實證為主，表現(xiàn)為痰濕、氣滯、血瘀；晚期則以本虛標實為主，甚至單純虛證，如陽虛、陰虛、氣陰兩虛等。

成熟的樹突狀細胞表面所表達的共刺激因子CD80、CD83、CD86等，是T細胞免疫應答所必需的信號分子，它能唯一激活初始型T細胞致敏，產(chǎn)生初次免疫應答，從而啟動機體的特異性免疫應答；此外，DC還介導了外周免疫耐受及腫瘤免疫逃逸現(xiàn)象[4]。機體存在著不同程度的免疫力低下，與DC數(shù)量上的減少及功能上的缺陷關(guān)系密切。相關(guān)研究表明：DC對NSCLC的預后判斷存在一定價值。如劉杜姣等[5]報道老年肺癌患者的死亡可能與DC細胞表面表型表達下降有關(guān)，尤其是CD83、CD86的表達下降與肺癌患者死亡的關(guān)系較為密切；侯安繼等[6]報道老年NSCLC患者CD83、CD1a低表達與患者疾病進展和生存期相關(guān)。本研究表明非小細胞肺癌患者中脾虛痰濕組CD80、CD86均高于氣滯血瘀組、陰虛內(nèi)熱組及氣陰兩虛組，提示病變尚處于腫瘤的早期階段，致癌病變的各種病邪作用于機體，可以有效地激發(fā)機體的抗腫瘤免疫應答或激發(fā)細胞毒T細胞產(chǎn)生抗腫瘤效應，起到自我保護作用，而從中醫(yī)病機分析早期正氣尚足，外邪初犯，正邪交爭，預后尚可；在氣陰兩虛組中CD80、CD83、CD86均偏低，提示機體免疫功能狀態(tài)底下，多為疾病的晚期階段，正氣虛衰已無力抗拒外邪，提示疾病預后不佳。此外，化療作為惡性腫瘤的常規(guī)治療手段之一，極易耗氣傷陰，也一定程度上造成臨床上晚期NSCLC患者中氣陰兩虛證候較為多見[7]。

由此可見，非小細胞肺癌不同中醫(yī)證型與外周血樹突狀細胞功能之間存在著一定的相關(guān)性，并間接表明不同證型患者其細胞免疫功能具有強弱差異。目前從細胞免疫角度研究不同中醫(yī)證型非小細胞肺癌的差異表現(xiàn)還處于初期階段，今后可以此為橋梁，來進一步研究證候類型與生存期之間的關(guān)系；并為中醫(yī)治療NSCLC提供客觀的療效標準。

[1] OstbergJR,RepaskyEA.Emergingevidenceindicates that physiologically relevant thermal stress regulates dendritic cell function[J].Cancer Immunology Immunotherapy,2006,55(3)：292-298.

[2] Kissel K,Berber S,Noekher A.Human platelets targetdendriticcelldifferentiationandproduction ofproinflammatorycytokines[J].Transfusion,2006,46(5)：818-827.

[3] Sharpe A,Freeman G.The B7-CD28 superfamily[J].Nature Reviews Immunology,2002,2(2)：116-126.

[4] TabarkiewiczJ,RybojadP,JablonkaA.CD1c+and CD303+dendriticcellsinperipheralblood,lymph nodes and tumor tissue of patients with non-small cell lung cancer[J].Oncology Reports,2008,19(1)：27.

[5] 劉杜姣,歐建峰,馬曉惠,等.老年肺癌患者外周血細胞表面DC分子的表達與生存的關(guān)系[J].中國腫瘤臨床與康復,2007,14(1)：5-7.

[6] 侯安繼,胡艷,周莉,等.老年非小細胞肺癌患者外周血樹突狀細胞表面分子研究[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(19)：105-106.

[7] 高繼良.沙參麥冬湯維持治療化療后非小細胞肺癌31例觀察[J].浙江中醫(yī)雜志,2015,50(2)：90-91.

浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目NSCLC中醫(yī)證候分型與其外周血樹突狀細胞功能的相關(guān)性研究，編號：2012ZB172

2017-05-26