酒精性肝損傷大鼠模型血脂水平動(dòng)態(tài)變化及烏藥的干預(yù)研究*

王軍偉陳英俊余力丁慧珍譚明明樓招歡

1浙江省天臺(tái)縣人民醫(yī)院浙江天臺(tái)317200

2浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053

酒精性肝損傷大鼠模型血脂水平動(dòng)態(tài)變化及烏藥的干預(yù)研究*

王軍偉1陳英俊1余力1丁慧珍1譚明明1樓招歡2#

1浙江省天臺(tái)縣人民醫(yī)院浙江天臺(tái)317200

2浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053

目的：觀察酒精性肝損傷大鼠模型血脂的動(dòng)態(tài)改變以及烏藥的干預(yù)作用。方法：采用SD大鼠灌胃給予體積濃度50%的白酒，每日1次，灌胃容積1.2ml/100g，連續(xù)33d建立酒精性肝損傷模型，造模的同時(shí)灌胃給予烏藥不同提取物。分別于給藥第14d、第21d及末次給藥并禁食12h后，眼眶靜脈叢取血，離心制備血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清TC、TG含量。結(jié)果：模型組TC、TG顯著升高；動(dòng)態(tài)觀察顯示模型組血清TC、TG含量早中期逐漸升高，第3周達(dá)高峰，后期回落；較之模型組，烏藥組的血清TC、TG含量均顯著下降，烏藥醇提取物組、烏藥醇提取物石油醚萃取物組及烏藥醇提取物正丁醇萃取物組對(duì)TC下降較優(yōu)，而烏藥醇提取物組及烏藥醇提取物石油醚萃取物組對(duì)TG下降較優(yōu)。結(jié)論：酒精性肝損傷大鼠模型血脂動(dòng)態(tài)改變規(guī)律為先升高后降低，第3周末血脂達(dá)高峰；烏藥可以抑制酒精引起的高脂血癥。

酒精性肝損傷血脂烏藥大鼠實(shí)驗(yàn)研究

肝功能異常往往會(huì)并發(fā)血脂異常，而治療后隨著肝功能的恢復(fù)，血脂水平隨之下降。烏藥為傳統(tǒng)理氣中藥，有調(diào)節(jié)胃腸道、保肝、抗炎、降脂等作用。本研究在既往工作[1]的基礎(chǔ)上，觀察酒精性肝損傷大鼠模型血脂的動(dòng)態(tài)改變，以及烏藥的干預(yù)作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物：健康SD大鼠，雌性，體重180～220g，88只，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0016074。

1.2 藥品與試劑：烏藥，浙江紅石梁集團(tuán)天臺(tái)山烏藥生物工程有限公司提供，參考文獻(xiàn)[1]方法得各種提取物，即烏藥水提取物（WYSTW）、烏藥醇提取物（WYCTW）、烏藥醇提取物石油醚萃取物（WYCTC1）、烏藥醇提取物乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）、烏藥醇提取物正丁醇萃取物（WYCTC3）。陽(yáng)性對(duì)照藥：思密達(dá)（浙江萬(wàn)邦藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：02130121）。白酒：紅星二鍋頭酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京紅星股份有限公司。與雙蒸水按一定體積比例稀釋，酒精體積分?jǐn)?shù)為50%。TC試劑盒，批號(hào)20140723；TG試劑盒，批號(hào)20140804，均購(gòu)于寧波美康生物科技股份有限公司。

1.3 儀器：TBA-40FR全自動(dòng)生化儀，日本東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會(huì)社。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法：選取健康雌性SD大鼠88只，隨機(jī)分為8組，每組11只，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（思密達(dá)0.9g/kg）、烏藥水提物（WYSTW）組、烏藥醇提物（WYCTW）組、烏藥石油醚萃取物（WYCTC1）組、烏藥乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）組、烏藥正丁醇萃取物（WYCTC3）組。所有大鼠均給予基礎(chǔ)飼料，自由采食飲水。除正常對(duì)照組（以等體積的蒸餾水灌胃）外，其余各組大鼠均灌胃給予濃度為50%（v/v）的白酒，每日1次，灌胃容積1.2ml/100g，連續(xù)33d。自造模第l天起，除正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服蒸餾水外，其余各給藥組分別灌胃給予相應(yīng)的藥物，4g/kg，每日1次，灌胃容積為1ml/100g體重，連續(xù)33d。分別于給藥第14d、第21d及末次給藥并禁食12h后，眼眶靜脈叢取血，離心制備血清，全自動(dòng)生化分析儀分別測(cè)定大鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s表示，用單因素方差分析，兩組間比較方差齊性用LSD方法檢驗(yàn)，方差不齊用Dunnett檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 酒精性肝損傷模型大鼠TC含量的動(dòng)態(tài)變化及烏藥干預(yù)后變化：與正常對(duì)照組相比，造模14d、21d、33d的TC含量均顯著升高，尤以21d時(shí)達(dá)到最高水平，模型對(duì)照組大鼠21d、33d的TC含量與正常組相比有顯著性差異（P＜0.01）。與模型對(duì)照組相比，給藥第21d，WYSTW、WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3組大鼠血清TC含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）；給藥第33d，WYCTW、WYCTC1及WYCTC3組大鼠血清TC含量明顯降低（P＜0.05或0.01）。見(jiàn)表1。

表1 烏藥不同提取部位對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TC含量的影響（±s）

表1 烏藥不同提取部位對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TC含量的影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別TC（mmol/L）給藥33d 1.07±0.23 1.54±0.37##1.37±0.19 1.34±0.23 1.17±0.21*1.05±0.16**1.34±0.36 1.22±0.15*正常對(duì)照組模型對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組WYSTW組WYCTW組WYCTC1組WYCTC2組WYCTC3組給藥14d 1.43±0.28 1.52±0.23 1.50±0.43 1.66±0.18 1.56±0.37 1.55±0.43 1.58±0.31 1.55±0.27給藥21d 1.45±0.21 1.87±0.35##1.42±0.27**1.62±0.21*1.49±0.25**1.52±0.39*1.59±0.36*1.51±0.17**

3.2 酒精性肝損傷模型大鼠TG含量的動(dòng)態(tài)變化及烏藥干預(yù)后變化：與正常對(duì)照組相比，造模14d、21d、33d的TG含量均顯著升高，尤以21d時(shí)達(dá)到最高水平，模型對(duì)照組大鼠14d、21d、33d的TG含量與正常組相比有顯著性差異（P＜0.05或0.01）。與模型對(duì)照組相比，給藥第14d及第21d，WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3組大鼠血清TG含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）；給藥第33d，各給藥組大鼠血清TG含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）。見(jiàn)表2。

表2 烏藥不同提取部位對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TG含量的影響（±s）

表2 烏藥不同提取部位對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TG含量的影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

給藥33d 0.35±0.07 0.55±0.17#0.41±0.08*0.37±0.08*0.34±0.06**0.33±0.10**0.40±0.11*0.41±0.07*組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組WYSTW組WYCTW組WYCTC1組WYCTC2組WYCTC3組TG（mmol/L）給藥14d 0.53±0.13 0.83±0.20##0.70±0.18 0.74±0.19 0.54±0.11**0.54±0.12**0.63±0.16**0.66±0.11**給藥21d 0.72±0.18 1.19±0.32##1.12±0.21 1.10±0.31 0.76±0.14**0.87±0.23**0.86±0.16**0.99±0.12*

4 討論

酒精性肝損傷致血脂異常及脂肪肝的機(jī)理與以下病理生理過(guò)程有關(guān)：當(dāng)酒精進(jìn)入肝細(xì)胞后，在乙醇氧化酶系統(tǒng)作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰?，進(jìn)而再次氧化轉(zhuǎn)變成乙酸，此過(guò)程使輔酶不斷轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶，兩者比例的改變抑制線粒體內(nèi)的三羧酸循環(huán)，導(dǎo)致脂肪氧化減弱，肝內(nèi)脂肪酸的合成增多，引起甘油三酯合成增多，導(dǎo)致血甘油三酯水平上升和脂肪肝的形成。膽固醇的最終代謝產(chǎn)物是膽汁酸，而膽汁酸僅在肝臟合成，在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微粒體酶的作用下，膽固醇在肝內(nèi)逐步轉(zhuǎn)化成膽汁酸，肝功能受損時(shí)，肝臟脂肪代謝出現(xiàn)紊亂，膽固醇降解成膽汁酸的過(guò)程受阻，從而導(dǎo)致血膽固醇升高[1]。

研究結(jié)果表明，酒精性肝損傷模型大鼠TC、TG顯著升高，動(dòng)態(tài)觀察顯示模型組血清TC、TG含量早中期逐漸升高，第3周達(dá)高峰，后期回落，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]?？紤]早中期血脂升高與肝功能受損相關(guān)，而后期回落可能與大鼠老化及肝功能受損后進(jìn)食量減少有關(guān)，有待進(jìn)一步論證。較之模型組，烏藥組的血清TC、TG含量均有顯著下降。比較烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血脂生化指標(biāo)的影響，可得出烏藥醇提取物調(diào)節(jié)血脂作用優(yōu)于水提取物（藥效作用時(shí)間久，效果穩(wěn)定）；醇提取物三個(gè)萃取部位作用比較后，烏藥醇提石油醚萃取物效果最優(yōu)，藥效作用依次為：烏藥醇提石油醚萃取物＞醇提正丁醇萃取物＞醇提乙酸乙酯萃取物。

[1] 王美娟，王軍偉，吳人照，等.烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠血脂的影響[J].浙江中醫(yī)雜志，2014，49(6)：457-458.

[2] 趙敏，楊杏芬，黃俊明，等.小鼠酒精性肝損傷模型的動(dòng)態(tài)研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2005，21(9)：1101-1102.

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目基于“腸-肝軸”的烏藥抗慢性酒精性肝損傷的作用機(jī)制研究，編號(hào)：81503328；浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥抗酒精性肝損傷有效部位研究，編號(hào)：2016C33184；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥不同提取物對(duì)慢性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的干預(yù)作用，編號(hào)：2015DTA021；臺(tái)州市科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的干預(yù)作用，編號(hào)：2014A33339

#通訊作者：樓招歡，E-mail：lou_jasmine@163.com

2017-04-12